Pour commencer, préparez 10 fois du citrate concentré, une solution de récupération cible ou un TRS de pH six, selon les instructions du fabricant. Diluez-le dans un rapport de 1 :10 avec de l’eau déminéralisée. Ensuite, chauffez la solution dans un bocal en plastique à 96 degrés Celsius.
Retirez les lames du support de lames et placez-les dans une chambre humide. Ensuite, pipetez une ou deux gouttes de l’agent autoréducteur d’autofluorescence sur chaque échantillon de tissu et incubez les échantillons pendant cinq minutes. Empilez les lames dans le rack de lames et rincez-les pendant une minute dans de l’éthanol à 60 % en effectuant des mouvements de haut en bas pour éliminer le réactif auto-réducteur inutilisé.
Plongez la grille de lames dans de l’eau déminéralisée pendant cinq minutes. Transférez les lames dans un bocal de coloration avec un tampon TRS préchauffé pour la récupération de l’antigène. Incuber les lames pendant 10 minutes à 96 degrés Celsius dans un bain-marie.
Retirez le pot de teinture et laissez-le refroidir à température ambiante pendant environ 60 à 90 minutes. Ensuite, retirez le TRS tout en gardant les lames dans le bocal. Rincez les lames deux fois avec une solution saline tamponnée TRIS contenant 0,05 % d’interpolation à un pH de 7,4 pendant trois minutes chacune pour éliminer tout résidu de TRS restant.
Placez les lames dans une chambre humide. Essuyez délicatement l’excès d’eau des lames à l’aide de mouchoirs en papier, puis encerclez chaque échantillon à l’aide d’un stylo barrière hydrophobe pour empêcher la solution d’anticorps de s’écouler.
