Dentre a seleção de anticorpos para imagem tecidual, o processo de fixação representa um desafio pelo mascaramento de epítopos. Portanto, a etapa de recuperação personalizada é necessária para expor esses antígenos para ligação de anticorpos. Além disso, a autofluorescência inerente ao tecido pode causar dificuldades até uma alta coloração de fundo.

Entretanto, a utilização de diferentes abordagens nos protocolos da literatura dificulta uma comparação padronizada entre as imagens. Nosso estudo visa atender à demanda por procedimentos padronizados e auxiliar o pesquisador na superação dos desafios durante o processo de aquisição de imagens. Estabelecemos um protocolo de imagem versátil aplicável a diferentes tecidos, comparando vários protocolos diferentes.

Portanto, nosso trabalho fornece dicas de orientação e solução de problemas desde o uso de anticorpos até a montagem de amostras, destacando as possíveis armadilhas. Nossos resultados avançam a pesquisa introduzindo um novo anticorpo primário para a sitrulina sua três, e um agente redutor autofluorescente para minimizar a coloração de fundo. Além disso, para o sucesso das imagens, enfatizamos o manuseio cuidadoso das amostras e a importância de manter uma temperatura alta constante para a recuperação do antígeno.