Pour commencer, liquéfiez les échantillons de sperme humain prélevés et homogénéisez-les soigneusement à l’aide d’une pipette pasteur. Transférez ensuite 100 microlitres de l’échantillon de sperme dans un tube à centrifuger. Dans ce tube, ajoutez 900 microlitres de solution de coloration.
Mélanger à plusieurs reprises par pipetage et homogénéiser soigneusement le réactif. Placez le tube sur un agitateur bidimensionnel pour une agitation continue à 200 tr/min pendant 30 minutes à température ambiante. En attendant la réaction de coloration, procéder à l’analyse de la concentration des spermatozoïdes à l’aide du système CASA.
Après avoir mis le système sous tension, double-cliquez sur l’icône SCAscope pour ouvrir le logiciel d’application. Ensuite, mélangez soigneusement l’échantillon de sperme par pipetage et transférez jusqu’à 10 microlitres de l’échantillon dans la chambre de comptage SCA. Attendez 60 secondes pour que l’échantillon de sperme cesse de dériver.
Ensuite, placez la chambre de comptage SCA sur le porte-échantillon du système CASA. Dans le logiciel d’application, entrez les informations du patient dans la boîte de dialogue. Cliquez sur le bouton de démarrage pour enregistrer la concentration de spermatozoïdes dans le sperme.
Ensuite, arrêtez l’agitateur lorsque la réaction de coloration de 30 minutes est terminée. Avant l’analyse, mélangez le contenu du tube à centrifuger par pipetage. Transférez jusqu’à 10 microlitres du réactif dans la chambre de comptage des spermatozoïdes et couvrez-la d’une lamelle en verre dédiée.
Placez la chambre de comptage des spermatozoïdes sur la platine microscopique et allumez le microscope optique. Ensuite, attendez 60 secondes pour que l’échantillon de réactif cesse de dériver. Sous l’objectif 10x, ajustez le cap et les boutons de réglage fin pour sélectionner un champ de vision.
Passez ensuite à la lentille d’objectif 40x et observez les leucocytes positifs pour les spermatozoïdes et la peroxydase. Utilisez le système de compteur électronique pour compter au moins 200 spermatozoïdes et le nombre de leucocytes positifs à la peroxydase en brun. À l’aide de cette technique, les leucocytes positifs à la peroxydase ont été colorés dans l’échantillon de sperme.
Les leucocytes positifs à la peroxydase présentaient une teinte brune contrastant avec les cellules rondes, ordinaires et non colorées.
