Cette soumission peut aider à répondre à des questions clés dans la sphère électro-physiologique, comme le flux de fluide dans seulement les règlements des canaux iion. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut estimer la concentration réelle d’ion dans la couche limite non siffrée de la surface de la membrane pour l’interprétation des données liées à la régulation du débit fluide des canaux imitants. Pour commencer cette procédure, pliez le tube capillaire en verre feu pour former une forme en U.
Le diamètre intérieur du capillaire doit être suffisamment grand pour réduire la résistance aux séries lors de l’enregistrement de grands courants ion. Ensuite, dissoudre trois grammes d’agarose en 100 millilitres de chlorure de potassium trois molaires, et le placer sur une plaque chaude entre 90 et 100 degrés Celsius. Ensuite, chargez le pont avec l’agarose de chlorure de potassium, en immergeant le pont de verre dans la solution.
Conservez-le toute la nuit à température ambiante pour que l’agarose se mœure et durcisse. Le lendemain, creusez soigneusement le pont en verre chargé de chlorure de potassium agarose du sel d’agarose durci. Conserver le pont dans une bouteille à col large de chlorure de potassium trois molaire au réfrigérateur.
Dans cette procédure, placez un récipient chargé de solution de bain, au-dessus de la chambre patch-clamp. Ensuite, remplissez la chambre patch-clamp avec la solution de bain en aspirant le tube. Pour arrêter le flux de liquide, couper le tube sur le côté du récipient, pour bloquer le flux de liquide.
Puis couper le tube sur le côté aspiration pour arrêter l’aspiration en même temps. C’est l’état de contrôle stationnaire. Pour appliquer la force de cisaillement d’écoulement fluide, ouvrez les deux tubes sur le récipient et les côtés d’aspiration en même temps.
Avant ou après l’application de la force de cisaillement du flux fluide sur la cellule, calculer le débit en millilitre par minute en mesurant la diminution du volume de liquide sur une période donnée. Pour mesurer les changements dans le potentiel de jonction liquide-métal, préparez une solution saline physiologique-salée normale pour la chambre de bain, et comparez-les en l’absence et la présence du pont de chlorure de potassium d’agar. Ensuite, placez une pipette de patch contenant la solution de chlorure de potassium de trois molaire dans la chambre, pour réduire au minimum le décalage potentiel de jonction entre la pipette et les solutions de bain.
Réglez ensuite l’amplificateur de pince de tension au mode de pince actuel. Après avoir annulé le potentiel initial de compensation, mesurez les changements de tension induits par la variation des débits. Pour vérifier que les changements de tension sont des potentiels de jonction liquide-métal, réexaminez l’effet du flux de liquide sur le potentiel de jonction, en utilisant le pont de sel agarose entre la solution de bain et l’électrode de référence.
Avec les résultats des changements dans le potentiel de jonction liquide-métal, dessiner les relations de taux de débit potentiel de la fonction, et estimer la valeur saturante du changement potentiel de jonction par le débit supra-fluide. Ensuite, modifiez la concentration de chlorure dans le liquide de bain et dessinez la relation de concentration potentielle de chlorure de jonction. Notez que le taux de liquide doit être constant, et suffisamment élevé pour empêcher la diminution de la concentration de chlorure à celle de l’électrode de référence au chlorure argenté-argent adjacente.
À partir des deux courbes de relation, estimer les changements dans la concentration de chlorure par rapport au changement potentiel de jonction mesuré. Des courants de VDCC-L ont été enregistrés dans les myocytes artériaux mesenteric de rat enzymatically dispersés, avec l’enregistrement perforé de patch-clamp de nystatin. Avec le pont de chlorure de potassium agarose, le potentiel de jonction entre l’électrode de référence et les solutions de bain pourrait être réduit au minimum, et le flux de fluide a augmenté la tension du courant VDCC-L indépendamment.
Toutefois, lorsque l’électrode de référence au chlorure argenté-argent a été directement reliée au liquide de bain, sans pont de chlorure de potassium agarose, la relation IV en présence de flux de liquide s’est déplacée vers la droite, par rapport à celle des courants VDCC-L dans un état statique. L’augmentation induite par le flux de liquide des courants kerr 2.1, qui ont été enregistrés dans les cellules leucémiques basophiles de rat avec le pont d’agarose, peut être expliquée par l’effet de couche non siffrée. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans la sur-électrophysie.
C’est donc pour la régulation du flux de fluide dans les courants du canal iion. En termes de phénomènes électrochimiques, dans la couche limite non siffrée à la surface de la membrane cellulaire.
