오픈 패치 클램프 피 펫과 Unstirred 경계 층에 이온 농도의 측정: 유체에 의해 이온 채널의 제어 의미 흐름

이 제출은 이온 채널의 단지 규정에 있는 액체 흐름과 같은 전기 생리적인 구체에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 이온 채널의 유체 흐름 조절과 관련된 데이터 해석을 위해 멤브레인 표면의 교반되지 않은 경계 층에서 실제 이온 농도를 추정할 수 있다는 것이다. 이 절차를 시작하려면 발사 유리 모세관 튜브를 구부려 U 모양을 형성합니다.

모세관의 내경은 큰 이온 전류를 기록할 때 계열 저항을 감소시키기에 충분합니다. 다음으로, 3개의 어금니 칼륨염100밀리리터에 아가로즈 3그램을 녹이고, 90~100°C 사이의 핫 플레이트에 놓습니다. 그런 다음, 용액에 유리 다리를 침지하여 염화 칼륨 아가로즈와 다리를적재합니다.

아가로즈가 설정되고 굳어질 수 있도록 밤새 실온에서 보관하십시오. 다음 날, 경화 아가로즈 소금에서 염화칼륨이 실린 유리 다리를 조심스럽게 파고들수 있습니다. 다리를 냉장고에 3개의 어금니 칼륨을 넓은 목에 담아 보관하십시오.

이 절차에서, 패치 클램프 챔버 위에, 목욕 용액로드 용기를 배치합니다. 다음으로, 튜브를 흡입하여 입욕 용액으로 패치 클램프 챔버를 채웁니다. 유체 흐름을 중지하려면 용기 측의 튜브를 잘라 유체 흐름을 차단합니다.

그런 다음 흡입 측에서 튜브를 잘라 흡입을 동시에 중지합니다. 고정 제어 상태입니다. 유체 흐름 전단 힘을 적용하려면 용기와 흡입 측면에 두 튜브를 동시에 엽니다.

유체 흐름 전단력을 셀에 적용하기 전이나 후에 지정된 시간에 걸쳐 유체 부피의 감소를 측정하여 분당 밀리리터의 유량을 계산합니다. 액체 금속 접합 전위의 변화를 측정하려면, 목욕 챔버에 대한 정상적인 생리염 식염수를 준비하고, 염화 칼륨 다리의 부재와 존재에서 그들을 비교한다. 다음으로, 3개의 어금니 칼륨 염화물 용액을 포함하는 패치 파이펫을 챔버에 놓고 파이펫과 입욕 용액 사이의 접합 전위 이동을 최소화한다.

그런 다음 전압 클램프 증폭기를 현재 클램프 모드로 설정합니다. 초기 오프셋 전위를 무효화한 후 유량의 변화에 따라 유도되는 전압의 변화를 측정합니다. 전압의 변화가 액체 금속 접합 전위인지 확인하려면 목욕 용액과 기준 전극 사이의 아가로즈 염교를 사용하여 접합 전위유체 흐름의 효과를 다시 검사합니다.

액체 금속 접합 전위의 변화의 결과로, 기능 잠재적 유량 관계를 끌어, 초라 유체 유량에 의해 접합 잠재적 변화의 포화 값을 추정한다. 이어서, 입욕액에서 염화물 농도를 변경하고, 접합 전위 염화물 농도 관계를 그립니다. 유체 속도는 일정해야 하며, 인접한 은은 염화물 기준 전극의 염화물 농도감소를 방지하기에 충분히 높어야 한다.

두 관계 곡선에서, 측정 된 접합 전위 변화에서 염화물 농도의 변화를 추정한다. VDCC-L 전류는 효소분산된 쥐 막질 동맥 근세포에 기록되었으며, nystatin 천공 패치 클램프 레코딩이 기록되었다. 아가로즈 칼륨 염화칼륨 다리를 사용하면 기준 전극과 입욕 용액 사이의 접합 전위가 최소화될 수 있으며 유체 흐름은 VDCC-L 전류의 전압을 독립적으로 증가시켰습니다.

그러나, 은은염화물 기준 전극이 염화화칼륨 교량 없이, 유동염수 없이, 입체에 직접 연결되었을 때, 유체 유량의 존재하에 있는 IV 관계는 정적인 조건하에서 VDCC-L 전류에 비해 오른쪽으로 이동한다. 아가로즈 다리를 가진 쥐 배혈백혈병 세포에 기록된 Kerr 2.1 전류의 유체 유동 유도 증가는, 교반되지 않은 층 효과에 의해 설명될 수 있다. 개발 후,이 기술은 전기 생리학을 통해 연구자들을위한 길을 열었습니다.

따라서 이온 채널 전류의 유체 흐름 조절을 위한 것입니다. 전기 화학 현상의 관점에서, 세포막 표면에서 교반되지 않은 경계 층에서.