Bu gönderi, elektro-fizyolojik küredeki temel soruların yanıtlatMasına yardımcı olabilir, örneğin iyon kanallarının sadece yönetmeliklerinde sıvı akışı gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, iyon kanallarının akışkan akış düzenlemesi ile ilgili veri yorumu için membran yüzeyinin karıştırılmamış sınır tabakasındaki gerçek iyon konsantrasyonu tahmin edilebilmektedir. Bu prosedüre başlamak için, bir U şekli oluşturmak için ateş cam kılcal tüp viraj.
Büyük iyon akımları kaydedilirken kılcal damarın iç çapı seri direncini azaltacak kadar büyük olmalıdır. Daha sonra, üç molar potasyum klorür 100 mililitre agarose üç gram eritin ve 90 ve 100 santigrat derece arasında bir sıcak plaka üzerine yerleştirin. Daha sonra, çözelti içine cam köprü batırarak, potasyum klorür agarose ile köprü yükleyin.
Agarose ayarlamak ve sertleştirmek için oda sıcaklığında bir gecede tutun. Ertesi gün, dikkatle sertleştirilmiş agarose tuzu agarose potasyum klorür yüklü cam köprü kazmak. Köprüyü buzdolabında geniş boyunlu üç azılı potasyum klorür şişesinde saklayın.
Bu prosedürde, yama kelepçeodasının üzerine, banyo çözeltisi yüklü bir konteyner yerleştirin. Daha sonra, tüpü emerek yama kelepçesi odasını banyo solüsyonuile doldurun. Sıvı akışını durdurmak için, sıvı akışını engellemek için tüpü kabın tarafına doğru kırpın.
Daha sonra emme tarafında aynı anda emme durdurmak için tüp klip. Bu sabit kontrol koşulu. Sıvı akış kesme kuvveti uygulamak için, her iki tüpü de konteyner ve emme kenarlarında aynı anda açın.
Hücreye sıvı akış kesme kuvveti uygulamadan önce veya uyguladıktan sonra, belirli bir süre içinde sıvı hacmindeki düşüşü ölçerek dakikada mililitre cinsinden akış hızını hesaplayın. Sıvı-metal bağlantı potansiyelindeki değişiklikleri ölçmek için, banyo odası için normal bir fizyolojik tuz tuzu hazırlayın ve agar potasyum klorür köprüsünün yokluğunda ve varlığında karşılaştırın. Daha sonra, pipet ve banyo çözeltileri arasındaki kavşak potansiyelini en aza indirmek için hazneye üç molar potasyum klorür çözeltisi içeren bir yama pipet yerleştirin.
Daha sonra voltaj kelepçesi amplifikatörü geçerli kelepçe moduna ayarlayın. İlk dengeleme potansiyelini etkisiz hale aldıktan sonra, akış hızlarını değiştirerek indüklenen voltaj daki değişiklikleri ölçün. Voltajdaki değişikliklerin sıvı-metal bağlantı potansiyelleri olduğunu doğrulamak için, banyo çözeltisi ile referans elektrot arasındaki agarose tuz köprüsünü kullanarak sıvı akışının bağlantı potansiyeli üzerindeki etkisini yeniden inceleyin.
Sıvı-metal bağlantı potansiyelindeki değişikliklerin sonuçlarıyla, fonksiyon potansiyel akış hızı ilişkilerini çizin ve bağlantı noktası potansiyel değişiminin supra-sıvı akış hızına göre doyurul değerini tahmin edin. Daha sonra, banyo sıvısındaklorür konsantrasyonu değiştirmek ve kavşak potansiyel klorür konsantrasyonilişkisi çizin. Sıvı oranının sabit ve klorür konsantrasyonunun bitişikteki gümüş-gümüş klorür referans elektrotuna düşmesini önlemek için yeterince yüksek olması gerektiğini unutmayın.
İki ilişki eğrisinden, ölçülen kavşak potansiyel kaymasından klorür konsantrasyonundaki değişiklikleri tahmin edin. VDCC-L akımları enzimatik olarak dağılmış sıçan mezenterik arteriyel miyositlerde nystatin delikli yama-kıskaç kaydı ile kaydedildi. Agarose potasyum klorür köprüsü ile referans elektrot ve banyo çözeltileri arasındaki bağlantı potansiyeli en aza indirilebilir ve sıvı akışı VDCC-L akımının gerilimini bağımsız olarak artırmıştır.
Ancak, gümüş-gümüş klorür referans elektrot doğrudan banyo sıvısı bağlı olduğunda, bir agarose potasyum klorür köprü olmadan, sıvı akışı varlığında IV ilişki sağa kaymıştır, statik bir durum altında VDCC-L akımları ile karşılaştırıldığında. Agarose köprüsü ile sıçan bazofilik lösemi hücrelerinde kaydedilen Kerr 2.1 akımlarının sıvı akışına bağlı artış, karıştırılmamış tabaka etkisi ile açıklanabilir. Bu teknik, geliştirildikten sonra elektro-fizyoloji üzerine araştırmacıların önünü açmıştır.
Yani iyon kanalı akımlarında sıvı akışının düzenlenmesi için. Elektro-kimyasal fenomenler açısından, hücre zarı yüzeyinde karıştırılmamış sınır tabakasında.
