Diese Einreichung kann helfen, Schlüsselfragen im elektrophysiologischen Bereich zu beantworten, wie z. B. den Flüssigkeitsfluss in den Vorschriften von Ionenkanälen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die tatsächliche Ionenkonzentration in der ungerührten Grenzschicht der Membranoberfläche für die Dateninterpretation im Zusammenhang mit der Strömungsregulation von Ionenkanälen abschätzen kann. Um dieses Verfahren zu beginnen, biegen Sie das gebrannte Glaskapillarrohr zu einer U-Form.
Der Innendurchmesser der Kapillare sollte groß genug sein, um den Serienwiderstand bei der Aufnahme großer Ionenströme zu reduzieren. Als nächstes drei Gramm Agarose in 100 Milliliter n.G. dreimolarem Kaliumchlorid auflösen und zwischen 90 und 100 Grad Celsius auf eine Kochplatte legen. Dann laden Sie die Brücke mit der Kaliumchlorid-Agarose, indem Sie die Glasbrücke in die Lösung eintauchen.
Halten Sie es über Nacht bei Raumtemperatur für die Agarose zu setzen und auszuhärten. Am nächsten Tag die mit Agarose Kaliumchlorid beladene Glasbrücke vorsichtig aus dem gehärteten Agarosesalz herausgraben. Bewahren Sie die Brücke in einer breithalsigen Flasche mit dreimolarem Kaliumchlorid im Kühlschrank auf.
Legen Sie bei diesem Verfahren einen mit Badelösung beladenen Behälter über die Patch-Klemmkammer. Als nächstes füllen Sie die Patch-Klemmenkammer mit der Badelösung, indem Sie das Rohr absaugen. Um den Flüssigkeitsfluss zu stoppen, klemmen Sie das Rohr an der Seite des Behälters, um den Flüssigkeitsfluss zu blockieren.
Beklemmen Sie dann das Rohr an der Saugseite, um gleichzeitig die Absaugung zu stoppen. Dies ist die stationäre Steuerungsbedingung. Um Flüssigkeitsdurchflussscherkraft anzuwenden, öffnen Sie beide Rohre am Behälter und die Saugseiten gleichzeitig.
Berechnen Sie vor oder nach dem Anwenden der Flüssigkeitsdurchflussscherkraft auf die Zelle den Durchfluss in Milliliter pro Minute, indem Sie die Abnahme des Flüssigkeitsvolumens über einen bestimmten Zeitpunkt messen. Um Veränderungen des Flüssigkeits-Metall-Kreuzungspotentials zu messen, bereiten Sie eine normale physiologische Salzkochsalzlösung für die Badekammer vor und vergleichen Sie sie in Abwesenheit und Vorhandensein einer Agar-Kaliumchlorid-Brücke. Als nächstes legen Sie eine Patchpipetette mit dreimolarer Kaliumchloridlösung in die Kammer, um die Verzweigungspotentialverschiebung zwischen Pipette und Badelösungen zu minimieren.
Stellen Sie dann den Spannungsklemmenverstärker in den aktuellen Klemmmodus ein. Messen Sie nach der Aufhebung des anfänglichen Offsetpotentials die Spannungsänderungen, die durch Variation der Durchflussraten induziert werden. Um zu überprüfen, ob es sich bei den Spannungsänderungen um Flüssigkeits-Metall-Anschlusspotentiale handelt, untersuchen Sie die Auswirkungen des Flüssigkeitsflusses auf das Anschlusspotential anhand der Agarose-Salzbrücke zwischen der Badlösung und der Referenzelektrode.
Zeichnen Sie mit den Ergebnissen der Veränderungen des Flüssigkeits-Metall-Knotenpotentials die Funktionspotential-Durchflussbeziehungen und schätzen Sie den sättigenden Wert der Knotenpotentialverschiebung durch die suprafluide Durchflussrate. Ändern Sie dann die Chloridkonzentration in der Badeflüssigkeit und ziehen Sie das Anschlusspotential-Chlorid-Konzentrationsverhältnis. Beachten Sie, dass die Flüssigkeitsrate konstant und ausreichend hoch sein sollte, um eine Abnahme der Chloridkonzentration auf die der angrenzenden Silber-Silberchlorid-Referenzelektrode zu verhindern.
Schätzen Sie anhand der beiden Beziehungskurven die Veränderungen der Chloridkonzentration aus der gemessenen Knotenpotentialverschiebung. VDCC-L-Ströme wurden in den enzymatisch dispergierten mesenterischen arteriellen Myozyten der Ratte aufgenommen, wobei Nystatin perforierte Patch-Clamp-Aufnahmen wurden. Mit der Agarose-Kaliumchlorid-Brücke konnte das Anschlusspotenzial zwischen Referenzelektrode und Badelösungen minimiert und der Flüssigkeitsfluss die Spannung des VDCC-L-Stroms unabhängig voneinander erhöht.
Wenn jedoch die Silber-Silberchlorid-Referenzelektrode ohne agarose Kaliumchloridbrücke direkt mit der Badeflüssigkeit verbunden war, verlagerte sich die IV-Beziehung in Gegenwart eines Flüssigkeitsflusses nach rechts, verglichen mit denen der VDCC-L-Ströme unter einem statischen Zustand. Die Strömungs-induzierte Zunahme von Kerr 2.1-Strömen, die in basophilen Leukämiezellen der Ratte mit der Agarosebrücke aufgezeichnet wurden, lässt sich durch den ungerührten Schichteffekt erklären. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher in der Überelektrophysiologie.
So ist es für die Regulierung des Flüssigkeitsflusses in den Ionenkanalströmen. In Bezug auf elektrochemische Phänomene, in der ungerührten Grenzschicht an der Zellmembranoberfläche.
