Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la vaccinologie muqueuse, telles que la façon dont la muqueuse intestinale absorption des composés biologiques et comment ces produits biologiques modulent le système immunitaire au site local après l’intubation. Le principal avantage de cette technique est qu’il est simple à mettre en place, rapide, et montre de faibles taux de mortalité. Cette méthode peut fournir un aperçu de la vaccinologie muqueuse.
Il peut également être appliqué à d’autres composés, tels que les produits chimiques, les substances toxiques ou les agents pathogènes. La démonstration visuelle de cette méthode est critique car dans les étapes orales d’intubation et de dissection intestinale, vous devez être prudent parce que dans l’intubation vous pourriez blesser le poisson zèbre et causer la mort. En dissection, l’extrémité de l’intestin est très fine et fragile.
Placez environ un centimètre de tubes en silicone fin sur une aiguille luer-lock de calibre 31. Coupez une pointe stérile de pipette filtrant de 10 microlitres, prenez l’extrémité la plus fine et placez-la sur le tube de silicone comme gaine. Pour commencer, fixez l’appareil à aiguille à une seringue luer-lock de 100 microlitres.
Tout d’abord, déplacez le poisson vers les réservoirs expérimentaux une nuit avant l’expérience. Vortex la solution de nanoparticule préparée bien, et d’élaborer le volume désiré de la suspension. Après avoir anesthésier le poisson en toute sécurité, utilisez un filet pour transférer rapidement le poisson dans un plateau en plastique humide.
Orientez l’animal horizontalement pour faire face à l’aiguille. Soutenir soigneusement le poisson d’une main et ouvrir la bouche avec l’aiguille protégée. Puis, insérez doucement l’aiguille vers le bas de l’œsophage à environ un centimètre de l’ouverture de la bouche.
Il est difficile de voir jusqu’où l’aiguille doit aller, et c’est une question de pratique. Vous sentirez l’aiguille comme il trouve un arrêt, puis en manipulant l’aiguille, vous trouverez l’angle correct pour insérer l’appareil un peu plus. Injectez lentement la suspension des nanoparticules dans le poisson, en veillant à ce que la suspension ne s’écoule pas vers l’extérieur par les branchies ou la bouche.
Après cela, retirez doucement l’aiguille et placez le poisson dans un réservoir de récupération. Pendant que le poisson récupère, surveillez le poisson pour toutes les anomalies. Une fois le poisson récupéré, retournez-le dans l’un des réservoirs expérimentaux.
Après avoir euthanasié le poisson selon le protocole du texte, placez le poisson sur un morceau de papier filtre. À l’aide de ciseaux de dissection tranchants, faire une incision semi-circulaire de l’anus à l’operculum, et ouvrir l’incision avec des pinces fines. Ensuite, coupez les deux extrémités de l’intestin, sortez tous les organes internes et placez-les sur le papier filtre.
Ensuite, séparez l’intestin des organes internes, et étirez-le, en prenant soin d’obtenir tout l’intestin. Enfin, utilisez des pinces à épiler pour rouler l’intestin sur le papier filtre pour détacher le tissu adhésif. Utilisant ce protocole, le poisson zèbre du sexe mélangé ont été avec succès intubés avec différentes nanoparticules recombinantes de protéine.
Utilisant le dispositif oral fait maison d’intubation, un faible pourcentage moyen de mortalité a été réalisé. Pour évaluer la livraison des corps fluorescents d’inclusion de nanoparticules faits avec l’alpha recombinant de TNF, une analyse de cytométrie a été exécutée. La quantité totale de cellules fluorescentes était significativement plus élevée dans le groupe intubé par nanoparticules que dans le groupe témoin cinq et 24 heures après l’intubation.
L’équipement d’intubation est peu coûteux, précis et réutilisable. L’ensemble de la procédure d’intubation peut être fait très rapidement par un opérateur, et, surtout, la méthode est cohérente entre les différents opérateurs. La combinaison de notre méthode d’intubation et de l’analyse en aval pourrait être idéale pour la mise au point d’un vaccin oral.
