Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della vaccinologia della mucosa, come come i composti biologici di assorbimento della mucosa intestinale e come tali biologici modulano il sistema immunitario nel sito locale dopo l'intubazione. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è semplice da configurare, velocemente, e mostra bassi tassi di mortalità. Questo metodo può fornire informazioni sulla vaccinologia della mucosa.
Può anche essere applicato ad altri composti, come sostanze chimiche, sostanze tossiche o agenti patogeni. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto nei passaggi di intubazione orale e dissezione intestinale, è necessario fare attenzione perché nell'intubazione si potrebbe ferire il pesce zebra e causare la morte. Nella dissezione, la fine dell'intestino è molto fine e fragile.
Posizionare circa un centimetro di tubi in silicone fine su un ago Luer-lock calibro 31. Tagliare una punta sterile del filtro a 10 microliter, prendere l'estremità più fine e posizionarla sopra il tubo di silicone come una torcia. Per iniziare, attaccare l'apparato dell'ago a una siringa Luer-lock da 100 microliter.
In primo luogo, spostare il pesce nei serbatoi sperimentali una notte prima dell'esperimento. Vortice bene la soluzione di nanoparticella preparata e redigere il volume desiderato della sospensione. Dopo aver anestetizzato in modo sicuro il pesce, utilizzare una rete per trasferire rapidamente il pesce su un vassoio di plastica bagnato.
Orientare l'animale orizzontalmente per affrontare l'ago. Sostenere attentamente il pesce con una mano e aprire la bocca con l'ago protetto. Quindi, inserire delicatamente l'ago lungo l'esofago a circa un centimetro dall'apertura della bocca.
È difficile capire fino a che punto dovrebbe andare l'ago, e questa è una questione di pratica. Sentirai l'ago mentre trova un arresto, e quindi manipolando l'ago, troverai l'angolo corretto per inserire un po 'di più il dispositivo. Iniettare lentamente la sospensione della nanoparticella nel pesce, assicurando che la sospensione non fluisca verso l'esterno attraverso le branchie o la bocca.
Dopo questo, rimuovere delicatamente l'ago e posizionare il pesce in un serbatoio di recupero. Mentre il pesce si riprende, monitorare il pesce per eventuali anomalie. Una volta recuperato il pesce, restituirlo a uno dei serbatoi sperimentali.
Dopo aver eutanasiato il pesce secondo il protocollo di testo, posizionare il pesce su un pezzo di carta da filtro. Usando forbici a dissezione affilate, fare un'incisione semicircolare dall'ano all'opercolo e aprire l'incisione con pinzette fini. Quindi, tagliare entrambe le estremità dell'intestino, estagliare tutti gli organi interni e posizionarli sulla carta da filtro.
Successivamente, separare l'intestino dagli organi interni e allungarlo, facendo attenzione a ottenere tutto l'intestino. Infine, utilizzare le pinzette per arrotolare l'intestino sulla carta filtrante per staccare il tessuto adesivo. Utilizzando questo protocollo, i pesci zebra del sesso misto sono stati intubati con successo con diverse nanoparticelle proteiche ricombinanti.
Utilizzando il dispositivo di intubazione orale fatto in casa, è stata raggiunta una bassa percentuale media di mortalità. Per valutare la consegna dei corpi di inclusione delle nanoparticelle fluorescenti realizzati con TNF alpha ricombinante, è stata eseguita un'analisi della citometria. La quantità totale di cellule fluorescenti era significativamente più alta nel gruppo intubato con nanoparticelle rispetto al gruppo di controllo sia cinque che 24 ore dopo l'intubazione.
L'attrezzatura di intubazione è economica, precisa e riutilizzabile. L'intera procedura di intubazione può essere eseguita molto rapidamente da un operatore e, cosa importante, il metodo è coerente tra diversi operatori. La combinazione del nostro metodo di intubazione con l'analisi a valle potrebbe essere ideale per lo sviluppo di vaccini orali.
