Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Schleimhautimpfung zu beantworten, wie z. B. wie Darmschleimhaut biologische Verbindungen aufnehmen und wie solche biologischen Daseinstatoren das Immunsystem an der lokalen Stelle nach der Intubation modulieren. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass es einfach einzurichten, schnell, und zeigt niedrige Sterblichkeitsraten. Diese Methode kann Einblicke in die Schleimhautimpfung geben.
Es kann auch auf andere Verbindungen angewendet werden, wie Chemikalien, Giftstoffe, oder Krankheitserreger. Visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, wie in der oralen Intubation und Darmsektion Schritte, müssen Sie vorsichtig sein, weil in der Intubation könnten Sie den Zebrafisch verletzen und den Tod verursachen. Bei der Zerlegung ist das Ende des Darms sehr fein und zerbrechlich.
Legen Sie etwa einen Zentimeter feinen Silikonschlauch auf eine 31-Spur Luer-Lock-Nadel. Schneiden Sie eine sterile 10-Mikroliter-Filterpipettenspitze, nehmen Sie das feinere Ende und legen Sie es über das Silikonrohr als Mantel. Zunächst befestigen Sie das Nadelgerät an einer 100-Mikroliter-Luer-Lock-Spritze.
Erstens, bewegen Sie die Fische in die Versuchstanks eine Nacht vor dem Experiment. Wirbel nisch die vorbereitete Nanopartikellösung gut, und ziehen Sie das gewünschte Volumen der Suspension. Nach der sicheren Beästhesierung der Fische, verwenden Sie ein Netz, um den Fisch schnell auf eine nasse Kunststoffschale zu übertragen.
Richten Sie das Tier horizontal aus, um der Nadel zu begegnen. Unterstützen Sie den Fisch vorsichtig mit einer Hand und öffnen Sie den Mund mit der geschützten Nadel. Dann legen Sie die Nadel vorsichtig die Speiseröhre hinunter, bis etwa einen Zentimeter von der Mundöffnung entfernt.
Es ist schwer zu sehen, wie weit die Nadel gehen sollte, und das ist eine Frage der Praxis. Sie werden die Nadel fühlen, wie sie einen Stopp findet, und dann durch die Manipulation der Nadel, finden Sie den richtigen Winkel, um das Gerät ein wenig mehr einsetzen. Injizieren Sie die Nanopartikelsuspension langsam in den Fisch, sodass die Suspension nicht nach außen durch die Kiemen oder den Mund fließt.
Danach entfernen Sie vorsichtig die Nadel und legen Sie den Fisch in einen Erholungsbehälter. Während sich der Fisch erholt, überwachen Sie den Fisch auf Anomalien. Sobald sich der Fisch erholt hat, kehren Sie ihn in einen der Versuchstanks zurück.
Nach der Einschläferne der Fische gemäß dem Textprotokoll, legen Sie den Fisch auf ein Stück Filterpapier. Mit scharfen Sezierscheren einen halbkreisförmigen Schnitt vom Anus zum Operculum machen und den Schnitt mit feiner Pinzette öffnen. Schneiden Sie dann beide Enden des Darms, nehmen Sie alle inneren Organe heraus und legen Sie sie auf das Filterpapier.
Als nächstes trennen Sie den Darm von den inneren Organen, und dehnen Sie ihn aus, wobei Sie darauf achten, den gesamten Darm zu erhalten. Schließlich verwenden Sie eine Pinzette, um den Darm auf dem Filterpapier zu rollen, um das Klebegewebe zu lösen. Mit diesem Protokoll wurden Zebrafische gemischten Geschlechts erfolgreich mit verschiedenen rekombinanten Protein-Nanopartikeln intubiert.
Mit dem hausgemachten oralen Intubationsgerät wurde ein niedriger durchschnittlicher Prozentsatz der Sterblichkeit erreicht. Um die Abgabe der fluoreszierenden Nanopartikel-Einschlusskörper mit rekombinantem TNF-Alpha zu bewerten, wurde eine Zytometrie-Analyse durchgeführt. Die Gesamtmenge der fluoreszierenden Zellen war in der nanopartikelintubierten Gruppe sowohl fünf als auch 24 Stunden nach der Intubation signifikant höher als in der Kontrollgruppe.
Die Intubationsausrüstung ist kostengünstig, präzise und wiederverwendbar. Das gesamte Intubationsverfahren kann sehr schnell von einem Operator durchgeführt werden, und, was wichtig ist, ist die Methode zwischen verschiedenen Operatoren konsistent. Die Kombination unserer Intubationsmethode mit der nachgelagerten Analyse könnte ideal für die Entwicklung oraler Impfstoffe sein.
