Cette étude décrit un grand modèle animal reproductible des dommages rénaux de ré-perfusion d’ischémie, qui peuvent être utilisés pour étudier la pathophysiologie des dommages rénaux aigus, et pour explorer des modalités thérapeutiques potentielles. Cette méthode est hautement reproductible et minimise l’impact de la réponse inflammatoire en limitant la quantité d’insultes au corps par rapport à une approche ouverte. Ce modèle préclinique imite des scénarios cliniques, tels que la transplantation rénale, l’hypoperfusion rénale suivant le choc cardiogénique, les procédures de transcatheter ayant pour résultat l’ischémie rénale, et les procédures cardio-vasculaires avec des temps cardio-circulatoires prolongés d’arrêt.
Pour commencer, désinfectez la zone latérale droite du cou en appliquant de la bétadine, puis de l’éthanol à 95% trois fois. Draper l’animal de manière stérile. Effectuer une réduction pour le cathétérisme de l’artère carotide droite et de la veine jugulaire droite.
Rétractez le muscle sternocleidomastoid latéralement, et disséquez-le vers le bas à l’artère carotide droite et à la veine jugulaire droite. Insérez une gaine d’angiographie 5F dans l’artère et la veine. Fixez-le avec une suture en soie 2-0.
Insérez une gaine d’angiographie 5F utilisant la technique de Seldinger dans l’artère fémorale gauche en perforant l’artère avec une aiguille creuse. Insérez un fil de guidage à pointe molle à travers la lumière et avancez-le dans l’artère fémorale. Maintenez le fil de guidage bien rangé d’une main tout en retirant l’aiguille.
Passez la gaine d’angiographie sur le fil de guidage dans l’artère fémorale et retirez le fil de guidage en utilisant le guidage par ultrasons si nécessaire. Administrer par voie intraveineuse 200 UI par kilogramme d’héparine de sodium pour obtenir une anticoagulation systémique. Pour effectuer une angiographie, injecter un agent de contraste iodé sous fluoroscopie pour identifier les artères rénales.
Identifiez les artères rénales et avancez manuellement le fil de guidage dans le cathéter de guidage. Placez le cathéter de guidage 5F JL4 dans l’artère rénale gauche par l’artère carotide droite. Placez le deuxième cathéter de guidage 5F JL4 dans l’artère rénale droite par l’artère fémorale gauche.
Utilisez les fils guides pour diriger une angioplastie transluminale percutanée 5F, ou un cathéter de dilatation PTA, dans chaque artère rénale. Placez chaque cathéter à ballonnet en place et raccordez une conduite de pression à chaque cathéter. Vérifiez la présence de formes d’ondes de pouls artérielles dans le moniteur de pression pour assurer le positionnement correct du cathéter.
Gonflez chaque ballon et visez une pression d’environ 2,5 pression atmosphérique à l’intérieur du ballon. Pour confirmer l’arrêt du flux sanguin vers les reins, observez l’aplatissement de la forme d’onde du pouls à l’extrémité du cathéter à ballonnet. Injecter un produit de contraste iodé dans une dilution 1:1 avec une solution saline et vérifier toute opacification des vaisseaux rénaux.
Après 60 minutes d’occlusion, dégonfler soigneusement et retirer les cathéters à ballonnet des artères rénales. Effectuer une angiographie à l’aide d’un opacénique dilué 1:1 pour confirmer la perméabilité de l’artère rénale et l’établissement de la ré-perfusion rénale. Retirez la gaine d’angiographie 5F de l’artère fémorale gauche.
Appliquer de la pression sur le site du cathétérisme pendant 30 minutes. Inverser l’effet de l’héparine par l’administration de trois milligrammes par kilogramme de protamine jusqu’à la normalisation du temps de coagulation actif. Pour prélever de l’urine pendant la période postopératoire, fixez un tube au cathéter de Foley avec une suture de soie 2-0 à l’aide d’un point interrompu sur la peau.
Pour le prélèvement sanguin, laissez les gaines d’angiographie dans l’artère carotide droite et la veine jugulaire droite en place, et fixez-les avec une suture de soie 2-0. administrer trois milligrammes par kilogramme de bupivacaïne au site d’incision pour minimiser la douleur. Continuer d’hydrater l’animal avec 0,9 chlorure de sodium pendant un total de deux heures après la fin de l’ischémie.
Fermez l’incision du cou avec une suture de soie 2-0 à l’aide d’un point interrompu en deux couches. Placez un timbre de fentanyl de 25 à 50 microgrammes par heure sur le dos de l’animal pour minimiser la douleur postopératoire, et surveillez l’animal sous ventilation mécanique jusqu’à ce qu’il se réveille. Prélever les échantillons finaux de sang et d’urine et calculer le rendement urinaire.
Effectuer une incision de laparotomie médiane à l’aide d’une lame de taille 10 du xiphoïde jusqu’au milieu du bassin. Utilisez un rétracteur latéral droit pour rétracter la peau abdominale. Disséquer les attachements péritonéaux latéraux du mur abdominal pour exposer le retroperitoneum droit et gauche.
Identifier et disséquer brutalement les artères rénales et les veines. Ligate les artères rénales et les veines avec une suture de soie 2-0 et exécutez des néphrectomies bilatérales pour recueillir des spécimens de tissu entier pour l’analyse histologique et métabolique. La fonction rénale a été évaluée en déterminant le rendement d’urine, l’eGFR, la créatine de plasma, et le BUN.
Après 60 minutes d’occlusion bilatérale d’artère rénale, le rendement d’urine a été sensiblement diminué et est resté de cette façon à six et 24 heures suivant la ré-perfusion. De même, on a observé une diminution significative de l’eGFR, qui a chuté de la ligne de base par rapport à la fin de l’ischémie à deux heures, six heures, et 24 heures de ré-perfusion. La créatinine de plasma a été sensiblement augmentée à deux, six, et 24 heures de ré-perfusion comparée à la ligne de base.
BUN a été augmenté par rapport à la ligne de base à six et 24 heures de ré-perfusion. Des secteurs nécrotiques et hémorragiques évidents ont été inégalement distribués dans les deux reins à la fin des 60 minutes de l’ischémie rénale bilatérale et des 24 heures de la ré-perfusion. Masson' la souillure trichrome de s a indiqué la nécrose coagulative confluente, qui a été située aux tubules proximaux du cortex rénal.
Des sections encastrées dans le plastique ont également été évaluées. Tous masson' des glissières trichromes de s ont été évaluées pour la nécrose de cellules, la perte de bordure de brosse, la formation de fonte, et la dilatation de tubule. La nécrose tubulaire aiguë, ou marquant d’ATN, a montré des dommages significatifs au cortex rénal et à la médulle.
Lors de l’exécution de ce protocole, vérifiez le positionnement des sites de ballon sur la proximité de RC, et occluez totalement l’écoulement vers le rein. Assurez-vous qu’il ne se pante pas dans cette eau. Après ce procédé, des sondes endovascular d’écoulement de cathéter peuvent être insérées dans les artères rénales pour évaluer le flux sanguin rénal, ou des biopsies rénales peuvent être exécutées pour évaluer des dommages rénaux de tissu.
