Ce protocole est le premier à décrire comment les thérapies peuvent être administrées efficacement à une allogreffe cardiaque entière dans le grand modèle animal de transplantation cardiaque. Le principal avantage de ce protocole est qu’il permet aux investigateurs de tester les effets d’un traitement sur une allogreffe cardiaque entière sur de longues périodes après la transplantation. Cette technique peut être utilisée pour étudier les interventions qui préviennent le rejet de l’allogreffe cardiaque, le dysfonctionnement primaire du greffon, minimisent le besoin d’immunosuppression postopératoire ou prolongent la durée de vie d’une allogreffe cardiaque.
L’optimisation de l’exposition est la partie la plus difficile de la procédure de transplantation et nécessite plusieurs membres de l’équipe. De même, des perfusionnistes expérimentés sont nécessaires pour coordonner et surveiller la perfusion ex vivo. Pour commencer, faites une incision de 20 à 30 centimètres de long en utilisant la lame numéro 10 du manubrium jusqu’au xiphoïde, en fonction de la taille du porc.
Utilisez l’électrocautérisation pour diviser le grand pectoral du sternum au xiphoïde en prenant soin de diviser le long de la ligne médiane du sternum. Une fois descendu au sternum, marquez la ligne médiane et commencez la sternotomie du xiphoïde en la divisant avec de lourds ciseaux. Étendez ensuite la céphalée de sternotomie après chaque coupe.
Séparez brutalement le cœur du sternum à l’aide de balayages des doigts et complétez la sternotomie à travers le manubrium. Après avoir optimisé l’exposition chirurgicale sur le terrain à l’aide d’un rétracteur sternal, identifiez et retirez le thymus par électrocautérisation en entrant longitudinalement dans le péricarde du diaphragme à l’aorte et en créant un berceau péricardique à l’aide de sutures en soie. Divisez complètement le tissu entre l’aorte et l’artère pulmonaire et visualisez l’emplacement de l’arc aortique et du tronc brachycéphale pour faciliter le placement correct de la pince transversale aortique.
À l’aide de ciseaux et d’une dissection émoussée, libérez circonférentiellement la veine cave supérieure et attachez deux sutures de soie de taille zéro autour de la veine cave supérieure. Appliquez une suture en polypropylène de taille 4-0 sur l’aorte ascendante de manière en U et sur l’oreillette droite de manière à cordon de la bourse. Insérez une canule racinaire aortique pédiatrique fixée par le point en U précédemment placé.
Et puis après avoir désaéré la canule, fixez-la en place avec un garrot Rummel. Connectez la canule de la racine aortique au tube cardioplégique après que le tube a été rincé avec la cardioplégie del Nido. Créez une atriotomie droite dans le cordon de la bourse précédemment placé.
Insérez une canule veineuse dans l’oreillette droite et fixez-la avec un garrot Rummel. Connectez la canule veineuse à une ligne d’aspiration stérile connectée à la cardiotomie de l’économiseur de cellules et collectez environ 1 à 1,3 litre de sang. Ensuite, appliquez la pince transversale aortique, en vous assurant soigneusement que la pince obstrue complètement l’aorte ascendante.
Après avoir placé de la gadoue de glace stérile sur le cœur, divisez la veine cave inférieure et supérieure juste proximale à la veine azygos. L’aorte au niveau de l’arche est juste distale à l’artère innominée et à l’artère pulmonaire principale à la bifurcation. Identifiez et ligaturez les veines pulmonaires, puis retirez le cœur de la poitrine et placez-le dans un récipient avec de la glace stérile.
Pour préparer l’aorte à la mise en place du connecteur aortique, placez quatre sutures en polypropylène de taille 4-0 promises dans un simple matelas horizontal autour de l’intérieur de l’aorte distale à une profondeur de cinq millimètres sous le bord coupé, puis attachez-les. Tout en tenant les sutures aortiques promises, insérez le connecteur aortique dans l’aorte et attachez un ruban ombilical autour de l’aorte pour fixer le connecteur. Placez un cordon de bourse en polypropylène de taille 4-0 autour du bord de coupe distale de l’artère pulmonaire principale.
Insérez la canule de l’artère pulmonaire et attachez les extrémités du cordon de la bourse pour fixer la canule. Ensuite, connectez-vous à la canule de l’artère pulmonaire au connecteur de l’artère pulmonaire sur l’appareil et fixez-le avec la cravate. Prenez la greffe préparée de la table arrière au dispositif de perfusion ex vivo et connectez le connecteur aortique à l’endroit de l’appareil.
L’évent du ventricule gauche s’écoule à travers la veine pulmonaire non liée dans l’oreillette gauche et à travers la valve mitrale dans le ventricule gauche. À l’aide de la lame numéro 10, faites une incision cutanée de 20 à 30 centimètres de long, puis continuez la dissection jusqu’au fascia à l’aide de l’électrocautérisation. Après avoir soulevé le fascia et le péritoine avec deux pinces Kocher, faites soigneusement une petite incision dans la cavité péritonéale à l’aide de ciseaux Metzenbaum.
Prolongez l’ouverture péritonéale sur toute la longueur de l’incision à l’aide de l’électrocautérisation. Placer un doigt en dessous pour protéger les viscères sous-jacents. Placez un rétracteur Balfour pour optimiser l’exposition et rétractez-vous dans l’intestin grêle par voie craniale à l’aide d’une serviette humide.
Portez le curage jusqu’à l’aorte abdominale dans la veine cave inférieure, puis ligaturez les lymphatiques avec des clips moyens et grands. Sur la table arrière, lorsque la veine pulmonaire gauche atriotomie où l’évent du ventricule gauche ventricule avait été inséré est sursélu, coupez l’aspect distal de l’aorte et de l’artère pulmonaire où la fixation aux canules peut avoir écrasé le tissu. Placez une pince de Satinsky sur la veine cave inférieure et créez une vénotomie longitudinale mesurant environ 1,5 centimètre à l’aide de la lame numéro 11 et des ciseaux de Pott.
Anastomose la greffe de l’artère pulmonaire à la veine cave inférieure infrarénale du receveur de bout en bout à l’aide d’une suture en polypropylène de taille 4-0. Ensuite, anastomosez la greffe de l’aorte à l’aorte infrarénale du receveur de bout en bout à l’aide d’une suture en polypropylène de taille 4-0. Placez soigneusement le cœur dans l’espace rétropéritonéal droit, en évitant la tension sur l’anastomose et le pliage des vaisseaux.
Ensuite, remplacez l’intestin grêle. Fermez le fascia avec une suture Maxon de taille de boucle zéro de manière à partir des deux extrémités de l’incision et en attachant au milieu, en évitant toute blessure à l’intestin. Fermez la couche dermique profonde avec la taille 2-0 Vicryl en cours d’exécution et la peau avec la taille 4-0 Monocryl en mode course.
Plusieurs paramètres de perfusion différents ont été acquis. Les débits circulatoires ont été mesurés à partir de l’artère pulmonaire, de l’aorte et des artères coronaires. La pression aortique, y compris la pression moyenne, la pression systolique, la pression diastolique, a également été mesurée.
Au cours de la perfusion ex vivo, la fréquence cardiaque et la température de l’allogreffe cardiaque ont également été mesurées. Pendant la période de perfusion, la saturation en oxygène veineux mixte et les valeurs d’hématocrite ont été mesurées à partir du perfusat. La viabilité du cœur hétérotopique intrabdominal in situ 35 jours indique une transplantation réussie à l’aide de ce protocole.
La chose la plus importante à retenir est de choisir un site pour l’allogreffe qui minimise le potentiel de tension et de pliage des anastomoses. En suivant cette procédure, l’investigateur sera en mesure de tester plusieurs types différents de thérapies pour déterminer leurs effets sur les réponses immunologiques contre l’allogreffe, ainsi que déterminer la longévité d’un effet thérapeutique sur l’allogreffe. Après avoir développé ce protocole, notre groupe a pu tester différents vecteurs viraux pour l’administration de gènes, ainsi qu’un modèle de rejet allographique aigu afin de comprendre la physiopathologie du rejet et l’efficacité de l’administration de gènes à l’aide de vecteurs viraux.
