Ainsi, dans notre protocole, l’instillation intra-colique de TNBS conduit à une inflammation transmurale au site d’instillation et à la distension mécanique dans le segment proximal à l’inflammation. Cela imite donc la maladie de Crohn sténotique. Comme le segment proximal est distendu mécaniquement mais ne montre pas d’inflammation visible, une étude comparative du segment proximal et du site d’inflammation aide à déterminer si le stress mécanique joue un rôle dans la colite de Crohn.
Les études précédentes se concentrent uniquement sur le site de l’inflammation. Notre protocole travaillant sur différents sites du modèle met en évidence un rôle critique du stress mécanique dans la maladie de Crohn, en particulier dans la maladie de Crohn sténotique. Pour commencer, placez les rats sur la table d’anesthésie en position couchée.
Pour induire la colite, insérez un cathéter en polyuréthane ouvert de qualité médicale à travers l’anus sur environ sept à huit centimètres du bord anal et instillez doucement le TNBS dans le côlon. Administrer les rats témoins simulés avec 250 microlitres de solution saline. Pour faciliter la distribution du TNBS ou de la solution saline et éviter les déversements, maintenez les rats en position couchée, la tête tournée vers le bas à un angle d’environ 30 degrés, l’anus étant fermé pendant deux minutes.
Ouvrez l’abdomen du rat à l’aide de ciseaux et de pinces de qualité chirurgicale. Retirez soigneusement tout le côlon au-dessus du canal anal et transférez immédiatement le côlon dans un tampon HBSS glacé 1x. Redressez le deux-points dans la mémoire tampon et mesurez la longueur du côlon à l’aide d’une règle.
Prenez un fil de nylon et encerclez-le autour du côlon pour mesurer la circonférence externe des segments du côlon en contrôle et des rats traités au TNBS. Prenez des tissus de pleine épaisseur pour l’histologie. Coupez le côlon le long de la planche mésentérique et nettoyez soigneusement le côlon avec un tampon HBSS.
Évaluez le côlon pour le score d’inflammation macroscopique en fonction des critères prédéfinis avec un minimum de modifications. Prélever des échantillons de tissu colique de rats traités par TNBS aux sites P, I et D.Site P est la partie deux à trois centimètres avant la marge buccale du site d’inflammation. Le site I est le site d’inflammation où le TNBS est instillé, généralement à quatre à six centimètres de l’extrémité du côlon.
Enfin, le site D est la partie d’un à deux centimètres distale à la marge aborale du site d’inflammation. L’instillation intracolique de TNBS chez le rat a induit une inflammation transmurale localisée d’environ deux centimètres de long avec une paroi intestinale épaissie et une lumière rétrécie dans le site d’instillation dans le côlon distal. Le site d’instillation du TNBS a été appelé site I.As la suite d’une inflammation transmurale et d’une sténose, l’inflammation et le stress mécanique étaient présents dans le site I.La sténose du site I a entraîné une distension lumineuse marquée dans le segment proximal au site d’instillation du TNBS, appelé site P.La circonférence du côlon a été significativement augmentée dans les sites P et I par rapport au côlon témoin simulé.
Bien que distendue mécaniquement, le site P ne présentait pas d’inflammation visible. Au contraire, le segment colique distal à l’instillation de TNBS appelé site D ne présentait ni inflammation ni distension mécanique. Le score macroscopique de l’inflammation au site I chez les rats traités par TNBS a été considérablement augmenté par rapport aux témoins simulés dans les sites P et D des rats colites.
Les scores d’inflammation dans les sites P et D n’ont pas été significativement augmentés par rapport à sham. Il est donc important d’étudier non seulement le site I, mais aussi les sites P et D du modèle, car cela aide à reconnaître l’importance pathogène du stress mécanique dans la maladie de Crohn. Pour déterminer davantage si le stress mécanique est un facteur pathogène dans l’inflammation intestinale, on peut également essayer de libérer la distension mécanique en nourrissant les animaux exclusivement avec un régime liquide et voir si cela aide à l’inflammation et à la fonction intestinale.
