Les mouches à viande sont un groupe diversifié de mouches qui peuvent être des parasites obligatoires ou facultatifs, ainsi que des parasites sapro-nécrophages. Les espèces parasites obligatoires se nourrissent exclusivement de tissus vivants et provoquent des myiases chez les vertébrés, tandis que les espèces sapro-nécrophages se nourrissent de matière organique en décomposition. Les parasites facultatifs peuvent se nourrir de matières vivantes ou en décomposition et vivre comme parasites ou non.
Bien que le stade larvaire soit le plus problématique, la femelle joue un rôle décisif car elle choisit l’endroit où pondre et, par conséquent, contrôle en grande partie l’endroit où les larves se nourriront et se développeront. L’objectif général des méthodes présentées ici est d’évaluer à la fois la préférence des larves pour le substrat alimentaire et le choix du site de ponte des femelles chez les mouches à viande. Préférence alimentaire des larves.
Première étape, préparation des boîtes de Pétri avec de l’agar-agar 2%Préparez des boîtes de Pétri avec 2%-agar. Pour ce faire, ajoutez six grammes de gélose bactériologique à 300 millilitres d’eau et faites fondre ce mélange au micro-ondes. Divisez ensuite le volume en quatre boîtes de Pétri.
Préparez le nombre de boîtes de Pétri avec de l’agar-agar en fonction du nombre de répétitions souhaitées. Une fois la gélose solidifiée, percez quatre trous dans la gélose à l’aide de la pétrelle de coupe fournie dans notre papier dans un tube conique de 50 millilitres d’un diamètre de trois centimètres, deux trous de chaque côté de la boîte de Pétri. Deuxième étape, préparation des substrats.
Pour préparer la viande fraîche avec du sang, utilisez 12 millilitres de sang bovin dilué, soit la moitié du sang avec une solution anticoagulante et l’eau filtrée à moitié. Ajoutez ensuite cette solution à 200 grammes de bœuf haché frais et remuez bien. N’oubliez pas d’utiliser des cylindres et des cuillères gradués différents pour chaque type de viande afin d’éviter toute autre contamination entre les substrats.
Pour préparer le substrat pourri, ajoutez 12 millilitres d’eau filtrée à 200 grammes de viande pourrie et remuez-le comme il l’a fait avec la viande fraîche. Avant le début de l’expérience, la viande est laissée à pourrir pendant cinq jours à 25 degrés Celsius dans un incubateur. Après avoir préparé le substrat de viande, remplissez les trous de la gélose avec de la viande fraîche et pourrie de chaque côté.
N’oubliez pas de randomiser la position de la viande dans les boîtes de Pétri comme nous le montrons ici. Troisième étape, la mise en place expérimentale. Dans une pièce à 25 degrés Celsius, placez le coussin chauffant juste en dessous d’une source de lumière pour éclairer uniformément le test de préférence dans un large biais de comportement vers ou contre la lumière.
Ensuite, utilisez du carton autour du coussin chauffant comme support pour garder tout au même niveau. Placez un carton noir sur tout l’ensemble, le coussin chauffant et le carton de support, pour garder le même motif de couleur au-dessus de tous les supports. Placez six boîtes de Pétri avec de la gélose et du substrat de viande sur le carton noir avec deux substrats, un de chaque type sur le coussin chauffant et les deux autres à l’extérieur de la surface du coussin chauffant.
Ce faisant, nous permettrons à chacune des boîtes de Pétri d’avoir quatre substrats, frais et froid, pourri et froid, frais et chaud, et enfin, pourri et chaud. Laissez chauffer le substrat pendant environ 10 minutes. Quatrième étape, test larvaire.
Vérifiez la température du substrat à l’aide d’un thermomètre infrarouge. Le côté le plus froid devrait être d’environ 25 degrés Celsius et le plus chaud d’environ 33 degrés Celsius. Après avoir atteint la température désirée, placez cinq larves du troisième stade au centre de chaque boîte de Pétri à l’aide d’une pince à épiler.
Couvrez ensuite la boîte de Pétri avec le couvercle et laissez l’expérience de choix se dérouler pendant exactement 10 minutes. Au cours de l’expérience, les larves ramperont autour de la boîte de Pétri et choisiront parmi les quatre options. Si des larves s’échappent, prenez-les à l’aide d’une pince à épiler et replacez-les au centre de la boîte de Pétri.
Après 10 minutes, sortez toutes les boîtes de Pétri expérimentales du coussin chauffant et placez-les sur une autre surface. Comptez ensuite le nombre de larves présentes dans chaque substrat. Nous avons observé que les larves colorées restent dans le substrat qu’elles ont choisi.
Préférence de la femelle pour le site de ponte. Première étape, la mise en place expérimentale. La tâche peut être effectuée sur une étagère ordinaire qui était auparavant recouverte de cartons noirs.
Ces cartons, tout comme dans un test larvaire, sont nécessaires, de sorte qu’aucun repère visuel n’est disponible pour les femelles adultes. L’étagère doit également être recouverte uniformément de bandes LED. Dans une pièce à 25 degrés Celsius, placez le coussin chauffant au centre de l’étagère.
Utilisez du carton autour du coussin chauffant comme support pour que tout reste au même niveau. Placez un carton noir sur tout l’ensemble, un coussin chauffant et un carton de support pour garder le même motif coloré au-dessus de tous les supports. Placez les coussins chauffants sous deux bras de la même croix entre deux croix différentes.
Cela permettra une meilleure utilisation de l’espace dans l’étagère. Allumez les lumières LED et le coussin chauffant avant le début de l’expérience. N’oubliez pas de toujours nettoyer les verres en forme de croix avec de l’éthanol à 70 % pour éviter la contamination olfactive entre les tests.
Deuxième étape, préparation des substrats. Préparez les boîtes de Pétri en plastique avec cinq grammes de viande fraîche ou pourrie. Le substrat est le même que celui de l’essai larvaire, frais et pourri de cinq jours.
Un total de quatre boîtes de Pétri sont nécessaires pour chaque croisement, deux avec de la viande fraîche et deux avec de la viande avariée. Pour la viande fraîche, ajoutez un millimètre de sang bovin dilué soit la moitié du sang avec l’anticoagulant et l’autre moitié de l’eau. Pour la viande pourrie, ajoutez un millimètre d’eau filtrée.
N’oubliez pas de bien mélanger les deux substrats et d’utiliser des cuillères différentes pour éviter la contamination croisée des odeurs entre la viande pourrie et la viande fraîche. Vérifiez si l’alcool s’est complètement évaporé sur les croix. Placez ensuite quatre boîtes de Pétri avec de la viande à l’extrémité des bras des croix, une de chaque type de viande sur le coussin chauffant et les deux autres à l’extérieur de la surface du coussin chauffant.
Cela permettra à chacun des croisements d’avoir quatre substrats, frais et froid, pourri et froid, frais et chaud, et enfin, pourri et chaud. Fermez l’ouverture des croix et laissez les substrats chauffer pendant environ 10 minutes. Troisième étape, test féminin.
Récupérez une femelle dans la cage à mouches. Ils se caractérisent par un abdomen élargi et jaune blanchâtre. Séparez une femelle pour chaque croisement dans des tubes individuels.
Vérifiez la température des substrats à l’aide d’un thermomètre infrarouge. Le côté le plus froid devrait être d’environ 25 degrés Celsius et le plus chaud d’environ 33 degrés Celsius. Placez un tube avec une femelle saisie juste au centre de l’ouverture de chaque croix.
Une fois que la femelle est entrée dans la croix, fermez l’ouverture avec le couvercle. Après avoir placé toutes les femelles dans chaque croisement, fermez la partie ouverte de l’étagère avec le carton noir pour vous protéger des sources de lumière extérieures. Laissez l’expérience se dérouler pendant exactement quatre heures.
Une fois ce temps écoulé, retirez la femelle des croisements à l’aide d’un tube. Vérifiez ensuite s’il y avait une autre position sur le substrat. Identifiez le couvercle de chaque boîte de Pétri avec le nom du substrat.
Utilisez de l’éthanol à 70 % pour nettoyer les croix de toute odeur du test. Quatrième étape, le comptage des œufs. Les boîtes de Pétri peuvent être congelées avant d’être comptées.
Dans ce cas, décongelez les boîtes de Pétri. Ensuite, comptez le nombre d’œufs dans chaque substrat à l’aide d’un stéréomicroscope. Analyse de données et statistiques.
Première étape, calcul de l’indice de préférence. Pour chaque répétition des tests comportementaux, un indice de préférence est calculé séparément pour le type de substrat et pour la température. L’indice de préférence pour le type de substrat est représenté par le nombre de larves ou d’œufs sur les substrats de viande fraîche divisé par le nombre total de larves ou d’œufs sur tous les substrats.
L’indice de préférence pour la température est représenté par le nombre de larves ou d’œufs sur des substrats chauds divisé par le nombre total de larves ou d’œufs sur tous les substrats. En tenant compte des deux préférences d’indice, les valeurs proches de un reflètent la préférence pour les substrats frais ou chauds. Et les valeurs proches de zéro signifient la préférence pour les substrats pourris ou froids.
Deuxième étape, comparaison de la préférence observée au choix aléatoire. Nous pouvons visualiser l’indice de préférence pour la température sur l’axe Y et l’indice de préférence pour la viande sur l’axe X. Pour déterminer si les larves et/ou les femelles présentent une préférence pour une condition, nous avons comparé nos résultats à un choix aléatoire à l’aide de données simulées.
Nos résultats larvaires ont été significativement différés de tous les ensembles de données simulés en termes de température et de préférence pour la viande. Graphiquement, il est évident que les larves ont montré une forte préférence pour le substrat pourri et froid. Nous avons constaté que la préférence féminine pour un type de viande était significativement différente d’un choix aléatoire dans environ 30 % des comparaisons.
Pour la température, environ 70 % de nos comparaisons ont abouti à une préférence significative. Les deux protocoles offrent la possibilité de tester la préférence des larves et des femelles pour deux facteurs en interaction, le type de viande et la température. Les tests sont simples et peuvent être adaptés pour tester la préférence d’autres espèces de la même taille et/ou d’autres conditions.
Nous savons que le comportement des animaux est assez variable et influencé par plusieurs facteurs environnementaux, il faut donc prendre des précautions particulières pour éviter un éclairage inégal, des odeurs persistantes et d’autres contaminations du substrat par des ustensiles partagés. Merci d’avoir regardé.
