ניתוח התוכן של חומצות שומן והרכב בMicroalgae

Summary

שיטה לקביעת תכולת חומצות שומן והרכב באצות המבוססות על הפרעה מכאנית של תאים, מיצוי שומנים מבוסס ממס, transesterification, וכימות וזיהוי של חומצות שומן באמצעות גז כרומטוגרפיה מתוארת. תקן פנימי tripentadecanoin משמש כדי לפצות על ההפסדים האפשריים בחילוץ וtransesterification שלם.

Abstract

שיטה כדי לקבוע את התוכן ואת ההרכב של חומצות שומן הכוללת בהווה באצות הוא תאר. חומצות שומן הן מרכיב עיקרי של ביומסה microalgal. חומצות שומן אלו יכולות להיות נוכחים בשיעורי acyl שומנים בדם שונים. בעיקר חומצות השומן קיים בtriacylglycerol (TAG) הן עניין מסחרי, משום שהם יכולים לשמש לייצור דלקים לתחבורה, כימיקלים בצובר, בריאותיים (ω-3 חומצות שומן), ומוצרי מזון. כדי לפתח יישומים מסחריים, שיטות אנליטיות אמינות לכימות של תכולת חומצות שומן והרכב יש צורך. Microalgae הם תאים בודדים מוקף דופן תא נוקשה. שיטת ניתוח חומצת השומן אמורה לספק הפרעה תא מספיק כדי לשחרר את כל שומני acyl והליך המיצוי משמש אמור להיות מסוגל לחלץ את כל כיתות השומנים acyl.

עם השיטה המוצגת כאן את כל חומצות השומן הנוכחיות באצות יכולות להיות מדויקת וreproducibly IDENtified ולכמת באמצעות כמויות קטנות של מדגם (5 מ"ג) עצמאיות באורכם שרשרת, מידת unsaturation, או ברמת השומנים בדם שהם חלק ממנה.

שיטה זו אינה מספקת מידע על השפע היחסי של כיתות שומנים שונות, אבל ניתן להאריך להפריד כיתות שומנים בדם אחד מהשני.

השיטה מבוססת על רצף של הפרעה מכאנית של תאים, מיצוי שומנים מבוסס ממס, transesterification של חומצות שומן לאסטרים מתילים של חומצות שומן (fames), וכימות וזיהוי של fames באמצעות גז כרומטוגרפיה (GC-FID). סטנדרטי TAG פנימי (tripentadecanoin) הוא הוסיף לפני הליך האנליטיות לתיקון להפסדים במהלך החילוץ וtransesterification שלם.

Introduction

חומצות שומן הן אחד המרכיבים העיקריים של ביומסה microalgal ובדרך כלל לפצות בין 5-50% מהמשקל היבש של תאי ^1-3. הם בעיקר בהווה בצורה של glycerolipids. glycerolipids אלה בתורם בעיקר מורכב מפוספוליפידים, glycolipids, וtriacylglycerol (TAG). בעיקר חומצות השומן קיים בTAG הן עניין מסחרי, משום שהם יכולים לשמש כמשאב לייצור דלקים לתחבורה, כימיקלים בצובר, בריאותיים (ω-3 חומצות שומן), ומוצרי מזון ^3-6. Microalgae יכול לגדול בתקשורת טיפוח על בסיס מים ים, יכול לקבל את הפרודוקטיביות אזוריות גבוהה הרבה יותר מאשר צמחים יבשתיים, ויכול להיות מעובד בphotobioreactors מקומות שאינם מתאימים לחקלאות ב, ואולי אפילו מהחוף. מסיבות אלה, microalgae נחשב לעתים קרובות חלופה מבטיחה לצמחים יבשתיים לייצור של מוצרים בתפזורת אחרים ^3-6 ביו דיזל ו. פוטנציאל לא l חקלאיואו מים מתוקים (כשטפח בphotobioreactors הסגור או כאשר משמשים microalgae הימי) נחוץ לייצור שלהם. לכן, דלק ביולוגי הנגזר מmicroalgae נחשב 3 ^rd דלק ביולוגי מדור.

התוכן הסלולרי הכולל של חומצות שומן (% ממשקל יבש), הרכב ברמת שומנים בדם, כמו גם את אורך חומצות שומן ומידת הרוויה הוא משתנה מאוד בין מיני microalgae. יתר על כן, מאפיינים אלה משתנים עם תנאי גידול, כגון זמינות חומרי מזון, טמפרטורה, pH, ועוצמת אור ^1,2. לדוגמא, כאשר הם נחשפים לרעב חנקן, microalgae יכול לצבור כמויות גדולות של TAG. בתנאי גידול אופטימליים TAG בדרך כלל מהווה פחות מ -2% ממשקל יבש, אבל כאשר הם נחשפים לתוכן TAG רעב חנקן יכול להגדיל לעד 40% מהמשקל היבש microalgal ^1.

Microalgae בעיקר לייצר חומצות שומן עם אורכי שרשרת 16 ו18אטומי פחמן, אבל כמה מינים יכולים לעשות חומצות שומן של עד 24 אטומי פחמן באורך. שני רוויים כמו גם חומצות שומן בלתי רוויות מאוד מיוצרות על ידי אצות חד. האחרון כולל חומצות שומן עם יתרונות תזונתיים (ω-3 חומצות שומן) כמו C20: 5 (חומצת eicosapentaenoic; EPA) וC22: 6 (docosahexaenoic acid; DHA) שעבורם אין חלופות ירקות קיימות ^1,2,4,7. (חלוקת) אורך שרשרת של חומצות שומן ומידת הרוויה גם קובע את התכונות ואיכות של דלק ביולוגי המופקת מאצות ושמן מאכל ^4,8.

כדי לפתח יישומים מסחריים של חומצות שומן microalgal נגזר, שיטות אנליטיות אמינות לכימות של תכולת חומצות שומן והרכב יש צורך.

כמו גם ציין ידי Ryckebosch et al. ^9, ניתוח של חומצות שומן באצות חד מבדיל את עצמו ממצעים אחרים (למשל שמן צמחי, מוצרי מזון, ברקמות של חיות וכו ') יהיוmicroalgae לגרום 1) הם תאים בודדים מוקפים בקירות תא נוקשה, מסבכים מיצוי שומנים בדם; 2) microalgae מכיל מגוון רחב של שיעורי שומנים וההפצה ברמת שומנים בדם משתנה ⁷ מאוד. יש כיתות שומנים שונות אלה מגוון רחב במבנה כימי ותכונות כגון קוטביות. כמו כן, שיעורי שומנים אחרים מאשר שומני acyl מיוצרים; 3) microalgae מכיל מגוון רחב של חומצות שומן, הנע 12-24 אטומי פחמן באורך ומכיל הן רווי וכן חומצות שומן בלתי רוויות מאוד. לכן, שיטות שפותחו לניתוח חומצות שומן במצעים אחרים מאשר microalgae, לא יכולות להיות מתאימות כדי לנתח את חומצות שומן באצות.

כפי שנסקר על ידי Ryckebosch et al. ^9, ההבדל העיקרי בין הליכי מיצוי שומנים נפוצים הוא בממס המערכות הנמצאים בשימוש. בגלל המגוון הגדול של סוגי שומנים בהווה באצות, כל משתנה בקוטביות, שחולץכמות שומנים תשתנה עם ממסים משמשים ^10-12. זה מוביל לחוסר העקביות בתוכן השומנים בדם ובהרכב מובא ^ב9,10 ספרות. בהתאם למערכת הממס בשימוש, שיטות המבוססות על מיצוי בממסים ללא הפרעה דרך תא, למשל, מכות חרוז או sonication, ייתכן שלא לחלץ את כל השומנים בגלל המבנה הנוקשה של כמה מיני microalgae ^9,13. במקרה של מיצוי שומנים שלם, המיצוי יעילות של שומנים בדם הכיתות השונות יכולה להשתנות ^14. זה יכול גם להיות השפעה על הרכב חומצות שומן נמדד, כי הרכב חומצות שומן משתנה בין מעמדות שומנים בדם ^7.

השיטה שלנו מבוססת על רצף של הפרעה מכאנית של תאים, מיצוי שומנים מבוסס ממס, transesterification של חומצות שומן לאסטרים מתילים של חומצות שומן (fames), וכימות וזיהוי של fames באמצעות כרומטוגרפיה גז בשילוב עם ioniza להבהגלאי tion (GC-FID). תקן פנימי בצורה של triacylglycerol (tripentadecanoin) הוא הוסיף לפני ההליך אנליטית. הפסדים אפשריים במהלך החילוץ וtransesterification שלם אז יכולים להיות מתוקנים ל. השיטה יכולה לשמש כדי לקבוע את התוכן כמו גם את ההרכב של חומצות השומן קיימים ביומסה microalgal. כל חומצות השומן המצויים בסוגים השונים acyl שומנים בדם, כוללים אחסון (TAG), כמו גם שומני קרום תא (glycolipids, פוספוליפידים), מזוהים, שזוהה ולכמת באופן מדויק וreproducibly בשיטה זו משתמשת רק בכמויות קטנות של מדגם (5 מ"ג) . שיטה זו אינה מספקת מידע על השפע היחסי של כיתות שומנים שונות. עם זאת, השיטה יכולה להתארך להפריד כיתות שומנים מכל ¹ אחר. הרכב חומצות שומן של הריכוז וכיתות שומנים השונים אז יכול להיות נקבע באופן אינדיבידואלי.

בספרות מספר שיטות אחרות הןתאר לניתוח שומנים באצות. חלק מהשיטות להתמקד ברכיבי lipophilic כולל ^15, בעוד שיטות אחרות מתמקדות בחומצות שומן כוללת ^9,16. חלופות אלה כוללות קביעת gravimetric של שומני חילוץ בסך הכל, טרנס esterification הישיר של חומצות שומן בשילוב עם כימות באמצעות כרומטוגרפיה, ותאי צביעה עם צבעי ניאון lipophilic.

חלופה נפוצות לכימות של חומצות שומן באמצעות כרומטוגרפיה היא כימות של שומנים באמצעות נחישות gravimetric ^17,18. יתרונותיו של נחישות gravimetric הם חוסר דרישות לציוד מתקדם ויקר כמו גז כרומטוגרף; להקל להגדיר את ההליך, בגלל הזמינות של ציוד הסטנדרטי אנליטיים (למשל Soxhlet); ונחישות gravimetric היא פחות מזמן רב כרומטוגרפיה שיטות. מבוססת היתרון העיקרי של שימוש בשיטות כרומטוגרפיה המבוססת על othאה יד היא כי בשיטה כזו רק חומצות השומן נמדדות. בנחישות gravimetric החומצה שאינה שומנית המכילה שומנים, כמו פיגמנטים או סטרואידים, כלולה גם בנחישות. שומני חומצה שאינה מכיל שומן אלו יכולים לפצות על חלק גדול (> 50%) של שומנים בסך הכל. אם מישהו מעוניין רק בתכולת חומצות שומן (לדוגמא ליישומים ביו דיזל), זה יהיה בהערכת, כאשר הוא משמשת נחישות gravimetric. בנוסף, בנחישות gravimetric הדיוק של האיזון האנליטית המשמש לשקילת השומנים חולצו קובע את גודל המדגם שצריך להיות בשימוש. כמות זו היא בדרך כלל הרבה יותר מהסכום הדרוש, כאשר הוא משמש כרומטוגרפיה. לבסוף, יתרון נוסף של שימוש בכרומטוגרפיה על נחישות gravimetric הוא כי כרומטוגרפיה מספקת מידע על הרכב חומצות שומן.

חלופה נוספת לשיטה שהוצגה היא ^16,19,20 transesterification ישירים.בשיטה זו שאיבת שומנים בדם וtransesterification של חומצות שומן לfames משולבים בצעד אחד. שיטה זו היא מהירה יותר מאשר שלב חילוץ וtransesterification נפרד, אבל שילוב של צעדים אלה מגביל את הממסים שיכולים לשמש לחילוץ. זה עלול להשפיע לרעה על יעילות שאיבה. יתרון נוסף של צעד נפרד שאיבת שומנים בדם וtransesterification הוא שהיא מאפשרת להפרדה ברמת שומנים בדם נוספת בין שלבי ¹ אלה. זה לא אפשרי בעת השימוש transesterification הישיר.

שיטות נפוצות אחרות כדי לקבוע את תוכן השומנים באצות כוללות מכתימות את ביומסה עם כתמי ניאון lipophilic כגון הנילוס אדום או BODIPY ומדידת אותות הקרינה ^21,22. יתרון של שיטות אלה הם שהם פחות מייגע יותר מאשר בשיטות אלטרנטיביות. חסרון של שיטות אלה הוא שתגובת הניאון היא, מסיבות שונות, משתנה בין species, תנאי גידול, סוגי שומנים בדם, ונהלים אנליטיים. כדוגמא, כמה וריאציות אלה נגרמים על ידי הבדלים בספיגה של הצבע על ידי microalgae. כיול באמצעות שיטה אחרת, כמותית יש צורך אפוא, שבוצע רצוי לכל תנאי גידול השונים ושלבי צמיחה. לבסוף, שיטה זו אינה מספקת מידע על הרכב חומצות שומן ופחות מדויק ולשעתק מאשר שיטות כרומטוגרפיה מבוססת.

השיטה שהוצגה מבוססת על השיטה שתוארה על ידי למרס et al. ²³ וסנטוס et al. ²⁴ וגם יושמה על ידי מחברים שונים אחרים ^1,25-27. גם שיטות אחרות זמינות המבוססים על אותם העקרונות ויכולות לספק ^9,28 תוצאות דומות.

Protocol

1. לדוגמא הכנה

ישנם שני פרוטוקולים חלופיים עבור מדגם הכנה כלל כצעדי 1.1 ו1.2. שני השיטות מתאימות במידה שווה ולתת תוצאות דומות, אבל אם יש כמות מוגבלת של אצות תרבות נפח זמינה, שיטה 1.1 מומלצת.

הערה: בכל אחת מפרוטוקול, להכין שני צינורות מקצף חרוז נוספים בהתאם לפרוטוקול כולו, אך מבלי להוסיף אצות להם לשמש כריק. בדרך זו, ניתן לזהות פסגות בהכרומתוגרמה GC כתוצאה ממיצוי של רכיבים מחומרים המשמשים לכימות.

1.1. לדוגמא הכנת פרוטוקול אפשרות 1: מומלץ כאשר כמות מוגבלת של אצות תרבות היא זמינה

1. קבע את ריכוז האצות היבש במשקל (ג / ליטר) במרק התרבות, למשל כפי שתואר על ידי ברויאר et al. ^1.
2. העבר את נפח של מרק התרבות המכיל 5-10 מ"ג אצות משקל יבש לצינור צנטריפוגות זכוכית. לחשב את הסכום המדויק של ביומסה הועבר באמצעות הריכוז ביומסה קבע בשלב 1.1.1.
3. צנטריפוגה 5 דקות ב1,200 x גרם.
4. מחק חלק מsupernatant, להשאיר כ 0.25 מיליליטר בצינור.
5. Re-להשעות את האצות בsupernatant שנותר על ידי pipetting עדין גלולה מעלה ומטה ולהעביר את התא גלולה המלאה לצינור מקצף חרוז באמצעות פיפטה 200 μl.
6. יש לשטוף את פיפטה צינור צנטריפוגות וזכוכית עם המים ± 0.15 מיליליטר milliQ ולהעביר את הנוזל לצינור אותו מקצף חרוז.
7. צינורות מקצף חרוז צנטריפוגה למשך דקה אחת בסל"ד המקסימאלי כדי לוודא שאין בועות אוויר להישאר בחלק התחתון של הצינורות. אפשר לאחסן צינורות מקצף חרוז סגורים ב -80 ° C.
8. Lyophilize צינורות מקצף חרוז המכילים את המדגם. ניתן לאחסן את צינורות מקצף חרוז הסגורים ב -80 ° C.

1.2. אפשרות הכנת פרוטוקול לדוגמא 2

1. צנטריפוגה נפח לא ידוע של מרק תרבות אצות וזורקים supernatant. אין זה הכרחי כדי לקבוע את הריכוז ביומסה או למדוד את נפח שימוש.
2. למדוד או לחשב את osmolarity של מדיום התרבות באמצעות הריכוז של מלחים העיקריים כיום במדיום לתרבות.
3. שטוף את התא גלולה ידי resuspending התא גלולה באותו הנפח, כמו בשימוש בצעד 1.2.1, של פתרון formate אמוניום, המדמה את osmolarity של המדיום לתרבות. פתרון formate אמוניום equiosmolar מונע lyses התא במהלך השטיפה של התאים.

הערה: כביסה התאים יש צורך להסיר מלחים המצויים במדיום לתרבות. זה חשוב במיוחד עבור ניתוח של חומצות שומן באצות ימיות בגלל ריכוזי מלח גבוהים במדיום התרבות שלהם. אם מלחים עדיין יהיו נוכחים, זה עלול לגרום להערכת יתר של כמות המשקל יבש תא שבו תיקבע בהמשך בtהפרוטוקול שלו. formate אמוניום משמש כדי לשטוף תאים משום שפתרון זה יתאדה לחלוטין במהלך lyophilization ולא להשאיר שום שאריות.

4. השעיה אצות צנטריפוגה supernatant ונזרק.
5. Lyophilize התא גלולה.
6. שוקל 5-10 אבקת microalgae lyophilized מ"ג לתוך צינור מקצף חרוז. רשום את המשקל המדויק.

2. שיבוש תא ויפידים הפקה

הערה: סעיף זה מתאר הליך שיבוש תא נרחב. אולי, חלק מהצעדים השיבוש הסלולרי הם מיותרים והפרעה תא פחות נרחבת עשויה להניב את אותן תוצאות לכמה מיני אצות חד או לביומסה נגזרת מתנאי גידול מסוימים. זה היית צריך אימות לכל מצב ספציפי עם זאת. לכן פרוטוקול השיבוש הנרחב המוצע מומלץ כשיטת אוניברסלית מתאימה לכל חומר microalgal.

1. שוקל כמות מדויקת של tripentadecanoin (TRiacylglycerol המכיל שלוש C15: 0 חומצות שומן) ולהוסיף אותו לסכום בדיוק ידוע של 04:05 v כלורופורם (/ V): מתנול. בדרך זו הריכוז של tripentadecanoin ידוע בדיוק. לשאוף לריכוז של 50 מ"ג / ל ' Tripentadecanoin משמש כתקן לכימות חומצת שומן הפנימי.
2. הוסף 1 מיליליטר כלורופורם: מתנול 04:05 (V / V) מכיל tripentadecanoin על צינור אחד מכות (שצוין בחומרים הכימיים וציוד שולחן). בדוק שאין חרוזים שנותרו בתוך הכובע של צינור beadbeater, זה יגרום לדליפה של הצינורות. השתמש פיפטה תזוזה חיובית לתוספת מדויקת של ממסים.
3. חרוז לנצח את צינורות מקצף חרוז 8x ב2,500 סל"ד 60 שניות, בכל פעם עם שניות 120 פנימיות בין כל מכות.
4. מעביר את הפתרון מצינורות מקצף חרוז לצינור נקי ועמיד בפני חום 15 מיליליטר צנטריפוגות זכוכית עם בורג כובעים להוסיף טפלון. הקפד להעביר את כל חרוזים מצינור מקצף חרוז גם כן.
5. להיהשעות צינור מקצף חרוז, להוסיף 1 מיליליטר כלורופורם: מתנול 04:05 (V / V) מכיל tripentadecanoin לתוך צינור חרוז המקצף, קרוב הכובע ולערבב, ולהעביר את הפתרון הזה לאותו צינור הזכוכית מצעד 2.4. שטוף את הצינור שלוש פעמים (בסך הכל 4 מיליליטר של כלורופורם: מתנול 04:05 (V / V) tripentadecanoin המכיל משמש לדגימה - 1 מיליליטר הוסיף בשלב 2.2 ו3 מיליליטר ל3 שלבי כביסה).
6. ורטקס צינורות הזכוכית עבור 5 שניות וsonicate באמבט sonication 10 דקות.
7. הוסף 2.5 מיליליטר מים MilliQ, המכיל 50 מ"מ 2-אמינו-2-hydroxymethyl-פרופאן-1 ,3-דיאול (טריס) ו1 M NaCl, אשר מוגדר ל-pH 7 באמצעות פתרון HCl. זה יגרום להפרדת פאזות בין כלורופורם ומתנול: מים. 1 M NaCl משמש כדי לשפר את שיווי המשקל של שומנים לקראת שלב כלורופורם.
8. וורטקס למשך 5 שניות ולאחר מכן sonicate 10 דקות.
9. צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 1,200 x גרם.
10. להעביר את כל שלב כלורופורם (שלב תחתון) לשפופרת זכוכית נקייה באמצעות pipett פסטר זכוכיתדואר. ודא שלא להעביר את כל שלבי ביניים או בשלב עליון.
11. Re-לחלץ את המדגם על ידי הוספת כלורופורם 1 מיליליטר לצינור ישן (המכילה מתנול: פתרון מים).
12. וורטקס למשך 5 שניות ולאחר מכן sonicate 10 דקות.
13. צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 1,200 x גרם.
14. לאסוף את שלב כלורופורם (שלב תחתון) באמצעות פיפטה פסטר זכוכית ובריכה עם בר כלורופורם הראשון מצעד 2.10.
15. אם קשיים מנוסים באיסוף כל שבריר כלורופורם בשלב הקודם, חזור על שלבים 2.11-2.14. אחרת להמשיך עם צעד 2.16.
16. להתאדות כלורופורם מהצינור בזרם גז חנקן. לאחר ניתן לאחסן דגימות שלב זה ב -20 מעלות צלזיוס מתחת אווירת גז חנקן.

3. Transesterification לשומן מתיל אסטרים חומצה

1. הוסף 3 מיליליטר מתנול המכיל 5% (v / v) חומצה גופרתית לצינור המכיל שומנים המיובשים חילוץ (צינור במקור המכיל את שבר כלורופורם) ולסגור את הצינור בחוזקה.
2. וורטקס למשך 5 שניות.
3. דגירה דגימות עבור 3 שעות ב 70 מעלות צלזיוס בתנור אבן או אמבט מים. מעת לעת (כל ± 30 דקות) להבטיח כי הדגימות לא רותחים (שנגרם על ידי מכסה סגור בצורה לא נכונה) וצינורות מערבולת. במהלך תגובה זו חומצות שומן מפוגלות לאסטרים חומצת שומן מתיל (fames).
4. דגימות מצנן לטמפרטורת חדר ולהוסיף 3 מיליליטר MilliQ מים ו3 מיליליטר n-הקסאן.
5. וורטקס למשך 5 שניות ומערבבים במשך 15 דקות עם מסובב מבחנה.
6. צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 1,200 x גרם.
7. לאסוף 2 מיליליטר של שלב הקסאן (למעלה) ולשים בשפופרת זכוכית טריות באמצעות זכוכית פיפטה פסטר.
8. מוסיף מים 2 מיליליטר MilliQ לשלב הקסאן נאסף כדי לשטוף אותו.
9. וורטקס למשך 5 שניות ו צנטריפוגות במשך 5 דקות ב 1,200 x גרם. לאחר שלב זה ניתן לאחסן את הדגימות ב-20 מעלות צלזיוס תחת אווירת חנקן גזים (הפרדת פאזות לא הכרחית).

4. כימות fames Uסינג גז כרומטוגרפיה

1. מלא בקבוקוני GC עם שלב הקסאן (עליון שלב) באמצעות זכוכית פיפטה פסטר.
2. מניחים את כובעים על בקבוקוני GC. ודא כובעים אטומים לחלוטין, ולא יכולים להיות מופעל, כדי למנוע אידוי מהבקבוקון.
3. למלא את הממסים לשטוף GC (הקסאן), רוקן את הבקבוקונים פסולת, ולשים את הבקבוקונים במדגם האוטומטי סמפלר. לפני הפעלת הדגימות בפועל על GC, הריצה ראשונה 2 כדורי סרק המכילים רק הקסאן ב-GC.
4. הפעל את הדגימות על GC-FID עם עמודת Nukol (30 MX 0.53 מ"מ x 1.0 מיקרומטר). השתמש בטמפרטורת כניסה של 250 ° C ולהשתמש הליום כגז מוביל, לחץ של 81.7 kPa ויחס פיצול של 0.1:1, סך הכל קצב זרימה: 20 מיליליטר / דקה. טמפרטורת גלאי FID של C ° 270 עם H ₂ קצב זרימה של 40 מיליליטר / דקה, קצב זרימת האוויר של 400 מיליליטר / דקה והוא קצב זרימה של 9.3 מיליליטר / דקה. הגדרת נפח הזרקה ל1 μl / מדגם. הזרקה לפני ואחרי שטיפה עם n-הקסאן. טמפרטורת תנור ראשונית מוגדרת 90 מעלות צלזיוס במשך 0.5 דקות ולאחר מכן העלתה שנינות20 ° עד טמפרטורת תנור של 200 ° C הוא הגיע C / דקת שעות. טמפרטורת תנור לאחר מכן שמור על C ° 200 ל39 דקות. זמן ריצה כולל הוא 45 דקות.

תוצאות

הכרומתוגרמה טיפוסית המתקבלת באמצעות תהליך זה מוצגת באיור 1. Fames מופרדים לפי גודל ומידת הרוויה לפי עמודת GC והפרוטוקול המשמש. יש חומצות קצרות שרשרת אורך שומן וחומצות שומן רווי יותר (קשרים כפולים פחות) פעמים שמירה קצרות יותר. עמודת GC משמש ופרוטוקול לא מתכוונים ל...

Discussion

השיטה המתוארת יכולה לשמש כדי לקבוע את התוכן כמו גם את הרכב חומצות שומן בסך הכל קיימים ביומסה microalgal. חומצות שומן הנגזרות מכל מעמדות השומנים בדם, לרבות אחסון (TAG), כמו גם שומני קרום (פוספוליפידים וglycolipids), מזוהות. ניתן לאתר בכל אורכי חומצת שומן השרשרת והמעלות של רוויה שנמצ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
tripentadecanoin (C15:0 TAG)	Sigma Aldrich	T4257	CAS Number 7370-46-9
TAG or FAME standards of all fatty acids expected in sample	Sigma Aldrich
TAG or FAME standards of all fatty acids expected in sample	Lipidox
TAG or FAME standards of all fatty acids expected in sample	Larodan
Beadbeater	Bertin Technologies	Precellys 24
beadbeater tubes	MP Biomedicals	Lysing matrix E 116914500
GC-FID	Hewlett-Packer	HP6871
GC column	Supelco	Nukol 25357
Positive displacement pipette 100-1000μl	Mettler Toledo	MR-1000
Positive displacement pipet tips C-1000	Mettler Toledo	C-1000
Pipetvuller, Pi-Pump 2 ml	VWR	612-1925
glass tubes	VWR	SCERE5100160011G1
TUBE 16 X 100 MM BOROSILICATE 5.1 1 * 1.000	VWR	SCERE5100160011G1
Teflon coated screw-caps	VWR	SCERKSSR15415BY10
STUART SCIENTIFIC SB2 test tube rotator	VWR	445-2101
Heated Evaporator/Concentrator	Cole-Parmer	YO-28690-25