JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מתארים שיטה להמרת תאי T אנושיים עם לוציפראז כדי להקל על מעקב in vivo אחר סחר בתאי T המושרה על ידי נוגדנים דו-ספציפיים לגידולים במחקרים כדי להעריך את היעילות והמנגנון נגד גידולים של נוגדנים דו-ספציפיים העוסקים בתאי T.

Abstract

נוגדנים דו-ספציפיים העוסקים בתאי T (T-BsAbs) נמצאים בשלבים שונים של פיתוח פרה-קליני ובדיקות קליניות לגידולים מוצקים. גורמים כגון ערכיות, סידור מרחבי, מרחק בין-תחומי ומוטציות Fc משפיעים על היעילות האנטי-סרטנית של טיפולים אלה, בדרך כלל על ידי השפעה על הביות של תאי T לגידולים, מה שנותר אתגר גדול. כאן, אנו מתארים שיטה להתמרה של תאי T אנושיים פעילים עם לוציפראז, המאפשרת מעקב in vivo של תאי T במהלך מחקרי טיפול T-BsAb. היכולת של T-BsAbs להפנות תאי T לגידולים ניתנת להערכה כמותית במספר נקודות זמן במהלך הטיפול, מה שמאפשר לחוקרים לקשר את היעילות האנטי-סרטנית של T-BsAbs והתערבויות אחרות עם ההתמדה של תאי T בגידולים. שיטה זו מקלה על הצורך להקריב בעלי חיים במהלך הטיפול כדי להעריך היסטולוגית את חדירת תאי T וניתן לחזור עליה במספר נקודות זמן כדי לקבוע את הקינטיקה של סחר בתאי T במהלך הטיפול ולאחריו.

Introduction

נוגדנים דו-ספציפיים העוסקים בתאי T (T-BsAbs) הם נוגדנים מהונדסים המשמשים למתן ספציפיות מלאכותית לתאי T רב-שבטיים על ידי הפעלת תאי T דרך זרוע קשירה אחת ואנטיגן גידולי דרך זרוע קושרת אחרת. טכנולוגיה זו יושמה בהצלחה על סרטן המטולוגי (CD19-targeting blinatumomab1), ומספר רב של T-BsAbs נמצאים בפיתוח פרה-קליני וקליני עבור מגוון גידולים מוצקים כמו גם2. T-BsAbs מפעילים תאי T רב-שבטיים באופן בלתי תלוי בקומפלקס היסטו-תאימות (MHC), ולכן אפילו גידולים שמפחיתים את הרגולציה של אנטיגנים לויקוציטים אנושיים (HLAs) רגישים לסוג זה של טיפול 3,4. T-BsAbs פותחו בעשרות פורמטים שונים, עם הבדלים בערכיות ובסידור המרחבי של תא T וזרועות קשירת גידולים, מרחקים בין תחומים, והכללת תחום Fc, המשפיע על מחצית החיים ויכול לגרום לפונקציות אפקט אם קיים5. עבודות קודמות במעבדה שלנו הראו כי גורמים אלה משפיעים באופן משמעותי על היעילות נגד גידולים של T-BsAbs, עם הבדלים של עד פי 1,000 בעוצמה6. באמצעות עבודה זו, זיהינו את פורמט IgG-[L]-scFv כפלטפורמה האידיאלית עבור T-BsAbs (ראה סעיף תוצאות מייצגות לפרטים נוספים לגבי פורמטים של T-BsAb), ויישמנו פלטפורמה זו על מטרות כולל GD2 (נוירובלסטומה), HER2 (סרטן השד ואוסטאוסרקומה), GPA33 (סרטן המעי הגס), STEAP1 (יואינג סרקומה), CD19 (ממאירויות תאי B) ו- CD33 (ממאירויות תאי B)7, 8,9,10,11,12,13.

אחד האתגרים העיקריים ביישום מוצלח של טיפול T-BsAb בגידולים מוצקים הוא התגברות על מיקרו-סביבה של גידולים מדכאי חיסון (TME) כדי להניע סחר בתאי T לגידולים14. הגורמים המשפיעים על יעילות T-BsAb שתוארו לעיל משפיעים באופן משמעותי על היכולת של T-BsAbs לגרום ביעילות לביות תאי T לגידולים, אך קשה להעריך השפעה זו במערכת in vivo בזמן אמת. כתב יד זה מספק תיאור מפורט של השימוש בתאי T מותמרים לוציפראז במחקרים פרה-קליניים של T-BsAbs כדי להעריך סחר בתאי T לרקמות שונות במודלים ניסיוניים של עכברים מדוכאי חיסון במהלך הטיפול. המטרה הכוללת של שיטה זו היא לספק אמצעי להערכת חדירת תאי T לגידולים ולרקמות אחרות, כמו גם תובנה בזמן אמת לגבי קינטיקה והתמדה של ביות תאי T, ללא צורך להקריב בעלי חיים במהלך הטיפול. עבור המספר ההולך וגדל של חוקרים המתמקדים באימונותרפיה תאית, היכולת לעקוב אחר תאי T in vivo במודלים פרה-קליניים של בעלי חיים היא קריטית. אנו שואפים לספק תיאור יסודי ומפורט של השיטה בה השתמשנו למעקב אחר תאי T מותמרים של לוציפראז כדי לאפשר לחוקרים אחרים לשכפל בקלות טכניקה זו.

Protocol

ההליכים הבאים הוערכו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של Memorial Sloan Kettering.

1. טרנספקציה של תאי 293T עם לוציפראז וקציר של supernatant ויראלי

  1. תרבית של 293T תאים
    1. הכן מדיה על ידי הוספת הדברים הבאים לליטר DMEM כל אחד: 110 מ"ל של סרום בקר עוברי מומת בחום (FBS), 11 מ"ל של פניצילין-סטרפטומיצין.
    2. הפשיר 5 x 106 293T תאים ולהעביר אותם לתוך בקבוק T175 עם מדיה מוכן כמתואר לעיל.
    3. פצל את תאי 293T 1:10 כל 3 ימים למשך 6 ימים. אל תאפשר לתאים להיות יותר מ 90% confluent.
  2. טרנספקציה של תאי 293T
    הערה: הכמויות הבאות של ריאגנטים מחושבות עבור הדבקת בקבוק T175 אחד של 293T תאים. התאימו בהתאם אם רוצים להמיר צלוחיות נוספות.
    1. העבר 1.5 מ"ל של מדיה לכל אחד משני צינורות 50 מ"ל באמצעות פיפטה. לצינור אחד, הוסיפו 10 מיקרוגרם של פלסמיד VSV-G, 20 מיקרוגרם של Gag/pol ו-20 מיקרוגרם של פלסמיד לוציפראז עגבניות TD אדומות של חיפושית קליק (CBR-TDR) וערבבו. לצינור השני, להוסיף 100 μL של DNA במבחנה transfection מגיב ולערבב. יש לדגור על שני הצינורות בטמפרטורת החדר (RT) למשך 5 דקות.
      הערה: כל הפלסמידים המתוארים בכתב יד זה סופקו על ידי ד"ר ולדימיר פונומרב.
    2. מעבירים את המדיה המכילה את מגיב הטרנספקציה החוץ-גופית של הדנ"א בטיפה לצינור המכיל את פלסמידים הדנ "א (מעל 30 שניות בקירוב) ומערבבים בעדינות עם פיפטה. יש לדגור ב-RT במשך 20 דקות.
    3. במהלך דגירה זו של 20 דקות, נתקו את תאי 293T על ידי הוספת 5-10 מ"ל של 0.05% טריפסין. לאחר ניתוק התאים, הוסף 10 מ"ל של מדיה וצנטריפוגה ב 800 x גרם למשך 5 דקות. להשעות את התאים ב 1.5 מ"ל של מדיה.
    4. הוסף את המדיה המכילה את מגיב הטרנספקציה של DNA במבחנה ואת פלסמידים DNA לתאי 293T ודגור ב 37 ° C במשך 30 דקות.
    5. מעבירים לבקבוק T175 ומוסיפים 18 מ"ל מדיה. לדגור ב 37 °C (77 °F) במשך הלילה.
    6. למחרת, בזהירות לשאוף את התקשורת עם פיפטה זכוכית מבלי לנתק את התאים. החלף עם 18 מ"ל של מדיה טרייה. יש לדגור ב-37 מעלות צלזיוס למשך הלילה באינקובטור.
  3. קצירת סופרנאטנט ויראלי
    1. מוציאים את הסופרנאטנט הנגיפי בעזרת פיפטה שמונחת על קרח. צנטריפוגה ב 800 x גרם במשך 5 דקות כדי לגלול את התאים ואת הפסולת.
      הערה: אם גלולת התא גדולה, סביר להניח שהתאים שובשו מהבקבוק כאשר הסופרנאטנט הוסר. תאים אלה יכולים להיות מצופים שוב בקבוק חדש עם מדיה טרייה.
    2. סננו את הסופרנאטנט הנגיפי באמצעות מסנן של 0.22 מיקרומטר.
    3. השתמש supernatant ויראלי מיד. שמרו אותו על קרח או בטמפרטורה של 4°C למשך עד 24 שעות, או הקפיאו אותו בטמפרטורה של -80°C לאחסון לטווח ארוך.

2. הרחבה והתמרה של תאי T אנושיים מופעלים עם לוציפראז

  1. הפעלה של תאי T אנושיים במבחנה
    1. שטפו את החרוזים על ידי הוספת 10 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS) המכיל 0.1% אלבומין בסרום בקר (BSA) ו-2 מילימטר חומצה אתילאנדיאמיןטטראצטית (EDTA) לצינור סטרילי של 15 מ"ל, הוספת חרוזים (חרוז אחד לכל שני תאי T), הנחת במדף מגנטים למשך 2 דקות ושיבת PBS.
    2. הכינו חומרי הדפסה כמתואר בשלב 1.1.1, ולאחר מכן הוסיפו IL-2 לריכוז סופי של 30 IU/mL והוסיפו את החרוזים השטופים. צור 2.5 מ"ל של מדיה עבור כל שני מיליון תאי T שיופעלו.
    3. ספרו את תאי ה-T (שטוהרו או טוהרו בעבר, הוקפאו, הופשרו ונשטפו) באמצעות המוציטומטר וכתם כחול טריפאן. הוסף תאי T למדיה שהוכנה בשלב 2.1.2 והפוך בעדינות את הצינור כדי לערבב. תאי T יתרחבו לפחות פי 20 בהתאם למקור ולבריאות הכללית של התאים. קבע את מספר תאי T שיש להפעיל על ידי חישוב המספר הדרוש לטיפול בעכברים וחלוקה ב- 20. כאן, 20 x 106 תאי T לכל עכבר שימשו על בסיס ניסויים ראשוניים.
    4. צלחת 2.5 מ"ל של מדיה המכילה שני מיליון תאי T, חרוזים ו- IL-2 בכל באר של צלחת תרבית רקמה בת 24 בארות. תרבית ב 37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח 5% CO2 .
    5. בחן את תאי T תחת מיקרוסקופ 20x כל יום במשך 3 הימים הבאים כדי לקבוע מתי להתמיר עם luciferase. התאים מוכנים כאשר הם מתקבצים יחד ומרוקנים את המדיה, והופכים אותה מאדומה/ורודה לכתומה בהירה.
  2. הכנת צלחות רטרונקטין
    הערה: רטרונקטין משמש לציפוי הלוחות המשמשים להתמרה מכיוון שהוא משפר את התמרה גנטית15.
    1. הוסף 2 מ"ל של 20 מיקרוגרם / מ"ל רטרונקטין ב- PBS לבאר של צלחת 6 בארות לא מטופלת. יש לדגור במשך שעתיים ב-RT או שעה אחת ב-37°C. באר אחת מצופה רטרונקטין נדרשת לכל שני מיליון תאי T כדי לעבור טרנספורמציה.
    2. שאפו את הרטרונקטין מבלי לגרד את תחתית הצלחת.
    3. הוסף 3 מ"ל של 2% BSA ב- PBS (מסונן סטרילי) לכל באר בצלחת 6 הקידוחים. דגירה במשך 30 דקות ב- RT.
  3. ספינוקולציה
    1. שאפו את ה-BSA מבלי לגרד את תחתית הצלחת.
    2. לשטוף את הבארות פעם אחת עם 3 מ"ל של PBS לכל באר. המשיכו או החליפו ב-PBS טרי והשאירו את הצלחת מכוסה ב-4°C למשך הלילה.
    3. הוסף 2 מ"ל של CBR-TDR luciferase viral supernatant (נאסף בשלב 1.3) לכל באר.
    4. צנטריפוגה ב-1,240 x גרם למשך 90 דקות ב-32°C.
  4. התמרה
    1. ספור את תאי T.
    2. שאפו את הסופרנאטנט הוויראלי מבלי לגרד את תחתית הצלחת.
    3. צלחת שני מיליון תאי T לבאר ב 6 מ"ל של תווך הנשר המעובד של דולבקו (DMEM) המכיל 30 IU/mL IL-2 אנושי.
    4. בדוק את תאי T מדי יום. תאי T מוכנים להרחבה כאשר הם כמעט נפגשים, בדרך כלל לאחר יומיים.
    5. כאשר התאים כמעט נפגשים, שטפו אותם בעדינות מתחתית הצלחת באמצעות פיפטה והעבירו כל באר לצלוחית T75 נפרדת. הוסף 9 מ"ל של מדיה עבור סך של 15 מ"ל של מדיה לכל בקבוק.
    6. למחרת, להוסיף עוד 15 מ"ל של מדיה. התאים צריכים להיות מוכנים להזרקה לעכברים יום לאחר תוספת זו של מדיה. אשר התמרה מוצלחת על ידי ביצוע ציטומטריית זרימה (מבנה הלוציפראז מכיל פלואורופור עגבניות TD הנראה בערוץ PE)16.

3. השתלת תאי T מותמרים של לוציפראז בעכברים מדוכאי חיסון

  1. הכינו וספרו את תאי ה-T להזרקה.
    1. הסר את תאי T מהצלוחיות וספור. התאים מוכנים להזרקה כאשר הם התרחבו פי 20-30, בדרך כלל ביום השביעי לאחר ההפעלה.
    2. צנטריפוגה את תאי T ב 800 x גרם במשך 5 דקות. השהה מחדש ב -2 מ"ל של מדיה והסר את החרוזים באמצעות מתלה מגנט.
    3. בניסויים שבהם תאי T יוזרקו בנפרד מנוגדנים דו-ספציפיים, ספרו את תאי ה-T והשהו מחדש כך שהריכוז הסופי יהיה 20 מיליון תאי T לכל 100 מיקרוליטר מדיה. דלג לשלב 3.2. עבור ניסויים באמצעות תאי T חמושים ex vivo (EATs), דלג לשלב 3.1.4.
    4. עבור ניסויים המשתמשים בתאי T חמושים ex vivo , ספרו את תאי T והפרידו אותם לצינורות בודדים של 1.5 מ"ל עבור כל קבוצה, עם 20 מיליון תאים לכל עכבר. לדוגמה, אם יש שלוש קבוצות של חמישה עכברים כל אחת, להכין שלוש צינורות 1.5 מ"ל עם 100 מיליון תאי T כל אחד.
    5. צנטריפוגה את צינורות 1.5 מ"ל ב 800 x גרם במשך 5 דקות. הסר את המדיה בזהירות מבלי להפריע לגלולת תא T. יש להשהות מחדש בלא יותר מ-50 מיקרוליטר של מדיה המכילה את הנוגדנים הדו-ספציפיים. יש לדגור ב-RT למשך 30 דקות.
      הערה: לצורך ניסויים שנערכו במחקר זה, נעשה שימוש בנוגדנים דו-ספציפיים קנייניים מסוג IgG-[L]-scFv T העוסקים בתאי T שנוצרו במעבדה. לחימוש תאי T, יש להשתמש ב-5 מיקרוגרם נוגדנים לכל 20 x 106 תאי T. ניתן להשתמש גם בנוגדנים דו-ספציפיים הזמינים מסחרית.
    6. שטפו נוגדנים עודפים על ידי הוספת 1,450 מיקרוליטר של מדיה לכל צינור. צנטריפוגה ב 800 x גרם במשך 5 דקות, בזהירות לשאוף את התקשורת, ולהשהות מחדש בריכוז של 20 מיליון תאי T חמושים לכל 100 μL מדיה.
  2. הזרקה והשתלה לעכברים
    1. מרדימים את העכברים בתא המספק איזופלורן בשאיפה של 3.5% (v/v) בחמצן של ליטר/דקה. העכברים מורדמים לחלוטין כאשר רפלקס הנסיגה של דוושת הגפה האחורית נעלם.
      הערה: ספק תמיכה תרמית לאורך כל ההליך.
    2. באמצעות מחט של 26 גרם, הזריקו 20 מיליון תאי T ב-100 מיקרוליטר של מדיה רטרואורביטלית לכל עכבר.
    3. מתן 1,000 U רקומביננטי IL-2 תת עורית לתמיכה בהישרדות תאי T in vivo.
    4. מתן הנוגדנים הדו-ספציפיים באופן רטרואורביטלי (לעין שאינה משמשת להזרקת תאי T) או תוך צפקית. אפשרו לעכברים להתאושש מההרדמה ולחזור לכלובים.
      הערה: שוב, כאן, נעשה שימוש בנוגדנים קנייניים שנוצרו במעבדה, אך ניתן להשתמש בנוגדנים זמינים מסחרית במקום. בניסויים כאן ניתנו 0.3-10 מק"ג נוגדנים לעכבר למנה. הנוגדנים ניתנו פעמיים בשבוע במשך 3-4 שבועות.

4. הדמיה In vivo של עכברים שהושתלו בהם תאי T מותמרים של לוציפראז

הערה: שלב זה יבוצע ביום ההדמיה, שאינו בהכרח אותו יום שבו תאי T ו/או נוגדנים ניתנים לעכברים. בדרך כלל, אנו מבצעים הדמיה 24 שעות לאחר מתן תאי T מותמרים לוציפראז.

  1. הכנת D-luciferin
    1. להמיס 1 גרם של D-luciferin ב 33.3 מ"ל של PBS סטרילי (ריכוז סופי: 30 מ"ג / מ"ל).
    2. Aliquot מומס D-luciferin לתוך 33 x 1.5 מ"ל צינורות microcentrifuge ולשמור על צינורות ב -20 °C.
    3. ביום ההדמיה, להפשיר מספיק aliquots של 30 מ"ג / מ"ל D-luciferin עבור מספר בעלי החיים להיות תמונה. צינור אחד מספיק עבור 10 בעלי חיים.
      הערה: יש להקפיא מחדש את שארית D-לוציפרין לאחר השימוש. D-luciferin יציב לפחות חמישה מחזורי הקפאה/הפשרה.
  2. מתן D-luciferin לעכברים
    הערה: לפני מתן D-luciferin לעכברים, פתח את תוכנת ההדמיה ואתחל את המערכת. המצלמה עשויה להימשך מספר דקות כדי להתקרר, וזה צריך להיעשות לפני העכברים מוזרקים עם D-luciferin כדי להבטיח כי הדמיה יכולה להתרחש 5 דקות לאחר מתן המצע.
    1. יש להרדים עד חמישה עכברים בתא המספק איזופלורן בשאיפה של 3.5% (v/v) בחמצן של ליטר/דקה. העכברים מורדמים לחלוטין כאשר רפלקס הנסיגה של דוושת הגפה האחורית נעלם.
    2. לאחר הרדמה מלאה של העכברים, יש לתת 100 מיקרוליטר של 30 מ"ג/מ"ל D-לוציפרין לעכבר (3 מ"ג לעכבר) על ידי הזרקה רטרואורביטלית עם מחט 26 גרם. דמיינו את קבוצת העכברים הזו לפני מתן D-luciferin לקבוצה הבאה. הניחו את קבוצת העכברים הבאה בתא האיזופלורן להרדים בזמן שהקבוצה הקודמת נמצאת בתמונה.
  3. הדמיה של תאי T מותמרים של לוציפראז
    1. העבירו את העכברים המורדמים לתא האטום לאור של מכשיר ההדמיה והמשיכו לתת איזופלורן 3% ב-0.5 ליטר/דקה. הניחו את העכברים על צידיהם כך שהאגף הנושא את הקסנוגרפט פונה כלפי מעלה לכיוון המצלמה. צלם קבוצה נוספת של תמונות עם העכברים במצב שכיבה כדי להעריך את נוכחות תאי T בריאות.
    2. בלוח הבקרה של הרכישה, בחר זוהר, תצלום ושכבת-על. הגדר את זמן החשיפה לאוטומטי, את האיגוד לבינוני ואת F/Stop ל- 1. רכוש תמונות. לאחר התמונה הראשונה, הגדירו את זמן החשיפה כך שיתאים לזמן שחושב אוטומטית לתמונה הראשונה, כך שניתן יהיה להשוות ישירות בין התמונות הבאות. כדאי לצלם תמונות עם זמני חשיפה מרובים כדי לקבוע את זמן החשיפה המיטבי להשגת האות הבהיר ביותר ללא רוויית פיקסלים.
    3. הוציאו את העכברים מהאיזופלורן, חזרו לכלובים שלהם והתבוננו עד שהם ערים ואמבולטוריים.
    4. חזור על השלבים משלב 4.2.1 עד שכל הקבוצות יצולמו.

תוצאות

כפי שמתואר בשלב 4.3, עכברים יכולים להיות מכוונים בתנוחות שונות במהלך ההדמיה כדי להעריך את נוכחותם של תאי T ברקמות שונות. מיקום שכיבה מאפשר הערכה של תאי T בריאות, דבר שכיח בנקודות זמן מוקדמות לאחר ההזרקה. מיקום רוחבי עם xenograft תת עורית פונה כלפי מעלה משמש כדי להעריך בצורה הטובה ביותר את הסחר בתא?...

Discussion

בעוד T-BsAb blinatumomab אושר עבור ממאירויות המטולוגיות חיוביות CD19, היישום המוצלח של T-BsAbs בגידולים מוצקים הוכח הרבה יותר קשה. Catumaxomab, T-BsAb המכוון נגד מולקולת הידבקות תאי אפיתל (EPCAM), אושר לטיפול במיימת ממאירה בחולות סרטן השחלות, אך ייצור התרופה הופסק לאחר מכן מסיבות מסחריות19. T-BsAbs אחרים ל?...

Disclosures

NKC מדווחת על קבלת מענקי מחקר מסחריים מחברת Y-mAbs Therapeutics. NKC היא הממציאה והבעלים של פטנטים שהונפקו ברישיון על ידי MSK ל-Y-mAbs Therapeutics, Biotec Pharmacon/Lallemand ו-Abpro-labs. ל-MSK ול-NKC יש אינטרס כלכלי ב-Y-mAbs. NKC מדווחת על קבלת אופציות למניות מחברת Eureka Therapeutics. ל-HFG ול-MEC אין גילויים רלוונטיים.

Acknowledgements

המחברים רוצים להודות לד"ר ולדימיר פונומרב על שיתוף מבני הלוציפראז המשמשים בניסויים המתוארים בסעיף התוצאות המייצגות במאמר זה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
293T cellsATCCCRL-11268
BSASigma AldrichA7030-10G
CD3/CD28 beadsGibco (ThermoFisher)11161D
D-Luciferin, Potassium SaltGoldbioLUCK-1G
DMEMGibco (ThermoFisher)11965092
DNA in vitro transfection reagent (polyjet)SignaGen LaboratoriesSL100688
EDTASigma AldrichE9884-100G
FBSGibco (ThermoFisher)10437028
Gag/pol plasmidAddgene14887
GFP plasmidAddgene11150-DNA.cg
Penicilin-StreptomycinGibco (ThermoFisher)15140122
Recombinant human IL-2R&D Systems202-IL-010/CF
RetronectinTakaraT100B
TrypsinGibco (ThermoFisher)25-300-120
VSV-G plasmidAddgene8454

References

  1. Gökbuget, N., et al. Blinatumomab for minimal residual disease in adults with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Blood. 131 (14), 1522-1531 (2018).
  2. Runcie, K., Budman, D. R., John, V., Seetharamu, N. Bi-specific and tri-specific antibodies- the next big thing in solid tumor therapeutics. Molecular Medicine. 24 (1), 50 (2018).
  3. Dreier, T., et al. T Cell costimulus-independent and very efficacious inhibition of tumor growth in mice bearing subcutaneous or leukemic human B cell lymphoma xenografts by a CD19-/CD3- Bispecific single-chain antibody construct. The Journal of Immunology. 170 (8), 4397-4402 (2003).
  4. Offner, S., Hofmeister, R., Romaniuk, A., Kufer, P., Baeuerle, P. A. Induction of regular cytolytic T cell synapses by bispecific single-chain antibody constructs on MHC class I-negative tumor cells. Molecular Immunology. 43 (6), 763-771 (2006).
  5. Santich, B. H., Cheung, N. V., Klein, C. Editorial: Bispecific antibodies for T-cell based immunotherapy. Frontiers in Oncology. 10, 628005 (2020).
  6. Santich, B. H., et al. Interdomain spacing and spatial configuration drive the potency of IgG-[L]-scFv T cell bispecific antibodies. Science Translational Medicine. 12 (534), eaax1315 (2020).
  7. Wang, L., Hoseini, S. S., Xu, H., Ponomarev, V., Cheung, N. K. Silencing Fc domains in T cell-engaging bispecific antibodies improves T-cell trafficking and antitumor potency. Cancer Immunology Research. 7 (12), 2013-2024 (2019).
  8. Park, J. A., Cheung, N. V. GD2 or HER2 targeting T cell engaging bispecific antibodies to treat osteosarcoma. Journal of Hematology & Oncology. 13 (1), 172 (2020).
  9. Wu, Z., Guo, H. F., Xu, H., Cheung, N. V. Development of a tetravalent anti-GPA33/anti-CD3 bispecific antibody for colorectal cancers. Molecular Cancer Therapeutics. 17 (10), 2164-2175 (2018).
  10. Lin, T. Y., Park, J. A., Long, A., Guo, H. F., Cheung, N. V. Novel potent anti-STEAP1 bispecific antibody to redirect T cells for cancer immunotherapy. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (9), e003114 (2021).
  11. Hoseini, S. S., Espinosa-Cotton, M., Guo, H. F., Cheung, N. V. Overcoming leukemia heterogeneity by combining T cell engaging bispecific antibodies. Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (2), e001626 (2020).
  12. Hoseini, S. S., Guo, H., Wu, Z., Hatano, M. N., Cheung, N. V. A potent tetravalent T-cell-engaging bispecific antibody against CD33 in acute myeloid leukemia. Blood Advances. 2 (11), 1250-1258 (2018).
  13. Hoseini, S. S., et al. T cell engaging bispecific antibodies targeting CD33 IgV and IgC domains for the treatment of acute myeloid leukemia. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002509 (2021).
  14. Li, H., Er Saw, P., Song, E. Challenges and strategies for next-generation bispecific antibody-based antitumor therapeutics. Cellular and Molecular Immunology. 17 (5), 451-461 (2020).
  15. Rajabzadeh, A., Hamidieh, A. A., Rahbarizadeh, F. Spinoculation and retronectin highly enhance the gene transduction efficiency of Mucin-1-specific chimeric antigen receptor (CAR) in human primary T cells. BMC Molecular and Cell Biology. 22 (1), 57 (2021).
  16. Kleeman, B., et al. A guide to choosing fluorescent protein combinations for flow cytometric analysis based on spectral overlap. Cytometry Part A. 93 (5), 556-562 (2018).
  17. Park, J. A., Santich, B. H., Xu, H., Lum, L. G., Cheung, N. V. Potent ex vivo armed T cells using recombinant bispecific antibodies for adoptive immunotherapy with reduced cytokine release. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002222 (2021).
  18. Park, J. A., Wang, L., Cheung, N. V. Modulating tumor infiltrating myeloid cells to enhance bispecific antibody-driven T cell infiltration and anti-tumor response. Journal of Hematology & Oncology. 14 (1), 142 (2021).
  19. Ströhlein, M. A., Heiss, M. M. The trifunctional antibody catumaxomab in treatment of malignant ascites and peritoneal carcinomatosis. Future Oncology. 6 (9), 1387-1394 (2010).
  20. Rabinovich, B. A., et al. Visualizing fewer than 10 mouse T cells with an enhanced firefly luciferase in immunocompetent mouse models of cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (38), 14342-14346 (2008).
  21. Skovgard, M. S., et al. Imaging CAR T-cell kinetics in solid tumors: Translational implications. Molecular Therapy Oncolytics. 22, 355-367 (2021).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195TTxenografts

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved