JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь мы описываем метод трансдукции Т-клеток человека люциферазой для облегчения отслеживания in vivo индуцированного биспецифическими антителами транспорта Т-клеток к опухолям в исследованиях для оценки противоопухолевой эффективности и механизма биспецифических антител, вовлекающих Т-клетки.

Аннотация

Биспецифические антитела, вовлекающие Т-клетки (T-BsAbs), находятся на различных стадиях доклинической разработки и клинических испытаний на солидные опухоли. Такие факторы, как валентность, пространственное расположение, междоменное расстояние и мутации Fc, влияют на противоопухолевую эффективность этих методов лечения, обычно влияя на самонахождение Т-клеток в опухолях, что остается серьезной проблемой. Здесь мы описываем метод трансдукции активированных Т-клеток человека люциферазой, позволяющий in vivo отслеживать Т-клетки во время исследований терапии T-BsAb. Способность T-BsAb перенаправлять Т-клетки на опухоли может быть количественно оценена в несколько моментов времени во время лечения, что позволяет исследователям коррелировать противоопухолевую эффективность T-BsAbs и других вмешательств с персистенцией Т-клеток в опухолях. Этот метод избавляет от необходимости приносить в жертву животных во время лечения для гистологической оценки инфильтрации Т-клеток и может повторяться в несколько моментов времени для определения кинетики торговли Т-клетками во время и после лечения.

Введение

Биспецифические антитела, вовлекающие Т-клетки (T-BsAbs), представляют собой сконструированные антитела, используемые для обеспечения искусственной специфичности к поликлональным Т-клеткам путем вовлечения Т-клеток через одно связывающее плечо и опухолевого антигена через другое связывающее звено. Эта технология была успешно применена к гематологическим раковым заболеваниям (блинатумомаб1, нацеленный на CD19), и многочисленные T-BsAb находятся в доклинической и клинической разработке для различных солидных опухолей2. T-BsAb вовлекают поликлональные Т-клетки независимым от основного комплекса гистосовместимости (MHC) образом, и поэтому даже опухоли, которые подавляют лейкоцитарные антигены человека (HLA), восприимчивы к этому типу терапии 3,4. T-BsAb были разработаны в десятках различных форматов, с различиями в валентности и пространственном расположении плеч связывания Т-клеток и опухоли, междоменных расстояниях и включении Fc-домена, который влияет на период полувыведения и может индуцировать эффекторные функции, если они присутствуют5. Предыдущая работа в нашей лаборатории показала, что эти факторы значительно влияют на противоопухолевую эффективность T-BsAbs, с 1000-кратными различиями в потенции6. В ходе этой работы мы определили формат IgG-[L]-scFv как идеальную платформу для T-BsAb (см. Раздел «Репрезентативные результаты» для получения более подробной информации о форматах T-BsAb) и применили эту платформу к мишеням, включая GD2 (нейробластома), HER2 (рак молочной железы и остеосаркома), GPA33 (колоректальный рак), STEAP1 (саркома Юинга), CD19 (злокачественные новообразования В-клеток) и CD33 (злокачественные новообразования В-клеток)7, 8,9,10,11,12,13.

Одной из основных проблем для успешного внедрения терапии T-BsAb в солидных опухолях является преодоление иммуносупрессивного микроокружения опухоли (TME) для стимулирования транспортировки Т-клеток к опухолям14. Факторы, влияющие на эффективность T-BsAb, описанные выше, оказывают значительное влияние на способность T-BsAb эффективно индуцировать самонаведение Т-клеток к опухолям, но этот эффект трудно оценить в системе in vivo в режиме реального времени. Эта рукопись содержит подробное описание использования трансдуцированных люциферазой Т-клеток в доклинических исследованиях T-BsAb для оценки трафика Т-клеток в различные ткани на экспериментальных моделях мышей с ослабленным иммунитетом во время лечения. Общая цель этого метода состоит в том, чтобы предоставить средства для оценки инфильтрации Т-клеток в опухолях и других тканях, а также понимание кинетики и персистенции Т-клеток в режиме реального времени без необходимости приносить в жертву животных во время лечения. Для растущего числа исследователей, специализирующихся на клеточной иммунотерапии, способность отслеживать Т-клетки in vivo на доклинических моделях животных имеет решающее значение. Мы стремимся предоставить тщательное, подробное описание метода, который мы использовали для отслеживания Т-клеток, трансдуцированных люциферазой, чтобы другие исследователи могли легко воспроизвести этот метод.

протокол

Следующие процедуры были оценены и одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Memorial Sloan Kettering.

1. Трансфекция 293Т-клеток люциферазой и сбор вирусной надосадочной жидкости

  1. Культура клеток 293Т
    1. Приготовьте среду, добавив в литр DMEM по 110 мл инактивированной теплом эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), 11 мл пенициллина-стрептомицина.
    2. Разморозьте 5 x 106 ячеек 293T и перенесите их в колбу T175 с подготовленным носителем, как описано выше.
    3. Разделите клетки 293T 1:10 каждые 3 дня в течение 6 дней. Не допускайте, чтобы клетки сливались более чем на 90%.
  2. Трансфекция 293Т-клеток
    ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие количества реагентов рассчитаны для трансфекции одной колбы T175 из 293Т-клеток. Отрегулируйте соответствующим образом, если необходимо преобразовать больше колб.
    1. Перенесите 1,5 мл среды в каждую из двух пробирок по 50 мл с помощью пипетки. В одну пробирку добавьте 10 мкг плазмиды VSV-G, 20 мкг Gag/pol и 20 мкг плазмиды люциферазы красного томата-щелкуна TD (CBR-TDR) и перемешайте. В другую пробирку добавьте 100 мкл реагента для трансфекции ДНК in vitro и перемешайте. Инкубируйте обе пробирки при комнатной температуре (RT) в течение 5 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Все плазмиды, описанные в этой рукописи, были предоставлены доктором Владимиром Пономаревым.
    2. Перенесите среду, содержащую реагент для трансфекции ДНК in vitro , по каплям в пробирку, содержащую плазмиды ДНК (в течение примерно 30 с), и аккуратно перемешайте пипеткой. Инкубировать при РТ в течение 20 мин.
    3. Во время этой 20-минутной инкубации отделяют клетки 293T, добавляя 5-10 мл 0,05% трипсина. После того, как клетки отсоединились, добавьте 10 мл среды и центрифугу при 800 x g в течение 5 мин. Ресуспендируют клетки в 1,5 мл среды.
    4. Добавьте среду, содержащую реагент для трансфекции ДНК in vitro и плазмиды ДНК, в клетки 293T и инкубируйте при 37 ° C в течение 30 мин.
    5. Переложите в колбу T175 и добавьте 18 мл среды. Инкубировать при температуре 37 °C в течение ночи.
    6. На следующий день тщательно аспирируйте среду стеклянной пипеткой, не отрывая клетки. Замените 18 мл свежего носителя. Инкубировать при 37 °C в течение ночи в инкубаторе.
  3. Заготовка вирусной надосадочной жидкости
    1. Удалите вирусную надосадочную жидкость с помощью пипетки, поставленной на лед. Центрифугу при 800 x g в течение 5 мин для гранулирования клеток и мусора.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если клеточная гранула большая, клетки, вероятно, были разрушены из колбы при удалении надосадочной жидкости. Эти ячейки могут быть снова помещены в новую колбу со свежим носителем.
    2. Отфильтруйте вирусную надосадочную жидкость с помощью фильтра 0,22 мкм.
    3. Немедленно используйте вирусную надосадочную жидкость. Храните его на льду или при температуре 4 ° C до 24 часов или заморозьте при температуре -80 ° C для длительного хранения.

2. Экспансия и трансдукция активированных Т-клеток человека люциферазой

  1. Активация Т-клеток человека in vitro
    1. Промойте шарики, добавив 10 мл фосфатного буферизованного физиологического раствора (PBS), содержащего 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), в стерильную пробирку объемом 15 мл, добавив шарики (один шарик на две Т-клетки), поместив в магнитную стойку на 2 минуты и отсосав PBS.
    2. Приготовьте среду, как описано на шаге 1.1.1, затем добавьте IL-2 до конечной концентрации 30 МЕ/мл и добавьте промытые шарики. Сделайте 2,5 мл среды на каждые два миллиона Т-клеток, которые будут активированы.
    3. Подсчитайте Т-клетки (свежеочищенные или ранее очищенные, замороженные, размороженные и промытые) с помощью гемоцитометра и окрашивания трипановым синим. Добавьте Т-клетки в среду, приготовленную на шаге 2.1.2, и осторожно переверните пробирку для перемешивания. Т-клетки будут расширяться как минимум в 20 раз в зависимости от источника и общего состояния клеток. Определите количество Т-клеток для активации, вычислив количество, необходимое для лечения мышей, и разделив на 20. Здесь на основе предварительных экспериментов было использовано 20 х 106 Т-клеток на мышь.
    4. Планшет 2,5 мл среды, содержащей два миллиона Т-клеток, шариков и IL-2 в каждой лунке 24-луночной пластины для культивирования тканей. Культивируют при 37 °С в увлажненном 5% инкубатореСО2 .
    5. Исследуйте Т-клетки под 20-кратным микроскопом каждый день в течение следующих 3 дней, чтобы определить, когда проводить трансдукцию люциферазой. Клетки готовы, когда они слипаются и истощают среду, превращая ее из красно-розовой в светло-оранжевую.
  2. Приготовление ретронектиновых пластин
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ретронектин используется для покрытия пластин, используемых в трансдукции, поскольку он усиливает трансдукциюгенов 15.
    1. Добавьте 2 мл 20 мкг/мл ретронектина в PBS в лунку необработанной 6-луночной пластины. Инкубировать в течение 2 ч при RT или 1 ч при 37 °C. На каждые два миллиона Т-клеток требуется одна лунка, покрытая ретронектином.
    2. Аспирируйте ретронектин, не царапая дно тарелки.
    3. Добавьте 3 мл 2% BSA в PBS (стерильный фильтрованный) на лунку в 6-луночную пластину. Инкубировать в течение 30 мин при РТ.
  3. Спинокуляция
    1. Аспирируйте BSA, не царапая дно пластины.
    2. Промойте лунки один раз 3 мл PBS на лунку. Продолжайте или замените свежим PBS и оставьте тарелку закрытой при температуре 4 ° C на ночь.
    3. Добавьте 2 мл вирусной надосадочной жидкости CBR-TDR люциферазы (собранной на этапе 1.3) в лунку.
    4. Центрифуга при 1,240 x g в течение 90 мин при 32 °C.
  4. Трансдукция
    1. Подсчитайте Т-клетки.
    2. Аспирируйте вирусную надосадочную жидкость, не царапая дно пластины.
    3. Планшет два миллиона Т-клеток на лунку в 6 мл модифицированной среды Дульбекко Игла (DMEM), содержащей 30 МЕ / мл человеческого IL-2.
    4. Ежедневно исследуйте Т-клетки. Т-клетки готовы к расширению, когда они почти сливаются, обычно через 2 дня.
    5. Когда ячейки почти сливаются, аккуратно смойте их со дна тарелки с помощью пипетки и переложите каждую лунку в отдельную колбу T75. Добавьте 9 мл среды, чтобы получить в общей сложности 15 мл среды на колбу.
    6. На следующий день добавьте дополнительно 15 мл среды. Клетки должны быть готовы к введению мышам на следующий день после добавления среды. Подтвердите успешную трансдукцию, выполнив проточную цитометрию (конструкция люциферазы содержит флуорофор томата TD, который виден в канале PE)16.

3. Приживление Т-клеток, трансдуцированных люциферазой, у мышей с ослабленным иммунитетом

  1. Подготовьте и подсчитайте Т-клетки для инъекции.
    1. Удалите Т-клетки из колб и посчитайте. Клетки готовы к инъекции, когда они расширяются в 20-30 раз, обычно к 7-му дню после активации.
    2. Центрифугируйте Т-клетки при 800 x g в течение 5 мин. Ресуспендировать в 2 мл среды и удалить шарики с помощью магнитной стойки.
    3. Для экспериментов, в которых Т-клетки будут вводиться отдельно от биспецифических антител, подсчитайте Т-клетки и ресуспендируйте так, чтобы окончательная концентрация составила 20 миллионов Т-клеток на 100 мкл среды. Перейдите к шагу 3.2. Для экспериментов с использованием Т-клеток ex vivo (EAT) перейдите к шагу 3.1.4.
    4. Для экспериментов с использованием Т-клеток, вооруженных ex vivo , подсчитайте Т-клетки и разделите их на отдельные пробирки по 1,5 мл для каждой группы, с 20 миллионами клеток на мышь. Например, если есть три группы по пять мышей в каждой, подготовьте три пробирки объемом 1,5 мл со 100 миллионами Т-клеток в каждой.
    5. Центрифугируйте пробирки по 1,5 мл в дозе 800 x g в течение 5 мин. Осторожно удалите носитель, не повреждая гранулы Т-клеток. Ресуспендировать не более чем в 50 мкл среды, содержащей биспецифические антитела. Инкубировать при РТ в течение 30 мин.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для целей экспериментов, проведенных в этом исследовании, использовались запатентованные биспецифические антитела IgG-[L]-scFv T-клеток, полученные в лаборатории. Для постановки Т-клеток используйте 5 мкг антител на 20 х 106 Т-клеток. Также могут быть использованы коммерчески доступные биспецифические антитела.
    6. Смойте излишки антител, добавив 1,450 мкл среды в каждую пробирку. Центрифугу при 800 x g в течение 5 мин, тщательно аспирируют среду и ресуспендируют в концентрации 20 миллионов вооруженных Т-клеток на 100 мкл среды.
  2. Инъекция и приживление мышей
    1. Анестезируют мышей в камере, поставляющей 3,5% (об./об.) вдыхаемого изофлурана в 1 л/мин кислорода. Мышей полностью обезболивают, когда исчезает рефлекс отвода педали задних конечностей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обеспечьте тепловую поддержку на протяжении всей процедуры.
    2. Используя иглу 26 G, введите 20 миллионов Т-клеток в 100 мкл среды ретроорбитально на мышь.
    3. Вводят 1,000 U рекомбинантного IL-2 подкожно для поддержки выживания Т-клеток in vivo.
    4. Вводят биспецифические антитела ретроорбитально (в глаз, не используемый для инъекции Т-клеток) или внутрибрюшинно. Дайте мышам оправиться от анестезии и вернуться в свои клетки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Опять же, здесь использовались запатентованные антитела, которые были сгенерированы в лаборатории, но вместо них можно было использовать коммерчески доступные антитела. В экспериментах здесь вводили 0,3-10 мкг антител на мышь на дозу. Антитела вводили два раза в неделю в течение 3-4 недель.

4. Визуализация in vivo мышей, привитых Т-клетками, трансдуцированными люциферазой

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг должен быть выполнен в день визуализации, который не обязательно совпадает с днем введения Т-клеток и/или антител мышам. Как правило, мы выполняем визуализацию через 24 часа после введения Т-клеток, трансдуцированных люциферазой.

  1. Приготовление D-люциферина
    1. Растворите 1 г D-люциферина в 33,3 мл стерильного PBS (конечная концентрация: 30 мг / мл).
    2. Аликвотируйте растворенный D-люциферин в микроцентрифужные пробирки объемом 33 x 1,5 мл и держите пробирки при -20 ° C.
    3. В день визуализации разморозьте достаточное количество аликвот 30 мг / мл D-люциферина для количества животных, подлежащих визуализации. Одной трубки хватает на 10 животных.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Повторно заморозьте оставшийся D-люциферин после использования. D-люциферин стабилен в течение как минимум пяти циклов замораживания/оттаивания.
  2. Введение D-люциферина мышам
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перед введением D-люциферина мышам откройте программное обеспечение для визуализации и инициализируйте систему. Камере может потребоваться несколько минут, чтобы остыть, и это должно быть сделано до того, как мышам будет введен D-люциферин, чтобы гарантировать, что визуализация может произойти через 5 минут после введения субстрата.
    1. Анестезируйте до пяти мышей в камере, обеспечивающей 3,5% (об./об.) вдыхаемого изофлурана в 1 л/мин кислорода. Мышей полностью обезболивают, когда исчезает рефлекс отвода педали задних конечностей.
    2. После того, как мыши будут полностью анестезированы, введите 100 мкл 30 мг / мл D-люциферина на мышь (3 мг на мышь) путем ретроорбитальной инъекции иглой 26 G. Представьте себе эту группу мышей, прежде чем вводить D-люциферин следующей группе. Поместите следующую группу мышей в камеру изофлурана для анестезии, в то время как предыдущая группа будет визуализирована.
  3. Визуализация Т-клеток, трансдуцированных люциферазой
    1. Переместите анестезированных мышей в светонепроницаемую камеру тепловизора и продолжайте вводить 3% изофлурана со скоростью 0,5 л/мин. Положите мышей на бок так, чтобы бок, несущий ксенотрансплантат, был обращен вверх к камере. Сделайте еще один набор изображений с мышами в положении лежа на спине, чтобы оценить присутствие Т-клеток в легких.
    2. С помощью панели управления сбором данных выберите « Люминесцентный», « Фотография» и «Наложение». Установите время экспозиции на авто, биннинг на среднее и F / Stop на 1. Получение изображений. После первого изображения установите время экспозиции, соответствующее тому, которое было автоматически рассчитано для первого изображения, чтобы последующие изображения можно было сравнивать напрямую. Может быть полезно снимать изображения с несколькими временами экспозиции, чтобы определить оптимальное время экспозиции для достижения самого яркого сигнала без насыщенности пикселей.
    3. Удалите мышей из изофлурана, вернитесь в их клетки и наблюдайте, пока они не проснутся и не начнут передвигаться.
    4. Повторяйте шаги, начиная с шага 4.2.1, до тех пор, пока не будут созданы образы всех групп.

Результаты

Как описано на шаге 4.3, мыши могут быть ориентированы в разных положениях во время визуализации для оценки присутствия Т-клеток в различных тканях. Положение лежа на спине позволяет оценить наличие Т-клеток в легких, что является обычным явлением в ранние моменты времени после инъекции....

Обсуждение

В то время как B-BsAb блинатумомаб был одобрен для CD19-положительных гематологических злокачественных новообразований, успешное внедрение T-BsAb в солидных опухолях оказалось гораздо более трудным. Катумаксомаб, T-BsAb, направленный против молекулы адгезии эпителиальных клеток (EPCAM), был одобр...

Раскрытие информации

NKC сообщает о получении коммерческих исследовательских грантов от Y-mAbs Therapeutics. NKC является изобретателем и владельцем выданных патентов, лицензированных центром MSK для Y-mAbs Therapeutics, Biotec Pharmacon/Lallemand и Abpro-labs. MSK и NKC имеют финансовую заинтересованность в Y-mAb. NKC сообщает о получении опционов на акции от Eureka Therapeutics. HFG и MEC не раскрывают соответствующую информацию.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Владимира Пономарева за то, что он поделился конструкциями люциферазы, используемыми в экспериментах, описанных в разделе репрезентативных результатов этой статьи.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
293T cellsATCCCRL-11268
BSASigma AldrichA7030-10G
CD3/CD28 beadsGibco (ThermoFisher)11161D
D-Luciferin, Potassium SaltGoldbioLUCK-1G
DMEMGibco (ThermoFisher)11965092
DNA in vitro transfection reagent (polyjet)SignaGen LaboratoriesSL100688
EDTASigma AldrichE9884-100G
FBSGibco (ThermoFisher)10437028
Gag/pol plasmidAddgene14887
GFP plasmidAddgene11150-DNA.cg
Penicilin-StreptomycinGibco (ThermoFisher)15140122
Recombinant human IL-2R&D Systems202-IL-010/CF
RetronectinTakaraT100B
TrypsinGibco (ThermoFisher)25-300-120
VSV-G plasmidAddgene8454

Ссылки

  1. Gökbuget, N., et al. Blinatumomab for minimal residual disease in adults with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Blood. 131 (14), 1522-1531 (2018).
  2. Runcie, K., Budman, D. R., John, V., Seetharamu, N. Bi-specific and tri-specific antibodies- the next big thing in solid tumor therapeutics. Molecular Medicine. 24 (1), 50 (2018).
  3. Dreier, T., et al. T Cell costimulus-independent and very efficacious inhibition of tumor growth in mice bearing subcutaneous or leukemic human B cell lymphoma xenografts by a CD19-/CD3- Bispecific single-chain antibody construct. The Journal of Immunology. 170 (8), 4397-4402 (2003).
  4. Offner, S., Hofmeister, R., Romaniuk, A., Kufer, P., Baeuerle, P. A. Induction of regular cytolytic T cell synapses by bispecific single-chain antibody constructs on MHC class I-negative tumor cells. Molecular Immunology. 43 (6), 763-771 (2006).
  5. Santich, B. H., Cheung, N. V., Klein, C. Editorial: Bispecific antibodies for T-cell based immunotherapy. Frontiers in Oncology. 10, 628005 (2020).
  6. Santich, B. H., et al. Interdomain spacing and spatial configuration drive the potency of IgG-[L]-scFv T cell bispecific antibodies. Science Translational Medicine. 12 (534), eaax1315 (2020).
  7. Wang, L., Hoseini, S. S., Xu, H., Ponomarev, V., Cheung, N. K. Silencing Fc domains in T cell-engaging bispecific antibodies improves T-cell trafficking and antitumor potency. Cancer Immunology Research. 7 (12), 2013-2024 (2019).
  8. Park, J. A., Cheung, N. V. GD2 or HER2 targeting T cell engaging bispecific antibodies to treat osteosarcoma. Journal of Hematology & Oncology. 13 (1), 172 (2020).
  9. Wu, Z., Guo, H. F., Xu, H., Cheung, N. V. Development of a tetravalent anti-GPA33/anti-CD3 bispecific antibody for colorectal cancers. Molecular Cancer Therapeutics. 17 (10), 2164-2175 (2018).
  10. Lin, T. Y., Park, J. A., Long, A., Guo, H. F., Cheung, N. V. Novel potent anti-STEAP1 bispecific antibody to redirect T cells for cancer immunotherapy. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (9), e003114 (2021).
  11. Hoseini, S. S., Espinosa-Cotton, M., Guo, H. F., Cheung, N. V. Overcoming leukemia heterogeneity by combining T cell engaging bispecific antibodies. Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (2), e001626 (2020).
  12. Hoseini, S. S., Guo, H., Wu, Z., Hatano, M. N., Cheung, N. V. A potent tetravalent T-cell-engaging bispecific antibody against CD33 in acute myeloid leukemia. Blood Advances. 2 (11), 1250-1258 (2018).
  13. Hoseini, S. S., et al. T cell engaging bispecific antibodies targeting CD33 IgV and IgC domains for the treatment of acute myeloid leukemia. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002509 (2021).
  14. Li, H., Er Saw, P., Song, E. Challenges and strategies for next-generation bispecific antibody-based antitumor therapeutics. Cellular and Molecular Immunology. 17 (5), 451-461 (2020).
  15. Rajabzadeh, A., Hamidieh, A. A., Rahbarizadeh, F. Spinoculation and retronectin highly enhance the gene transduction efficiency of Mucin-1-specific chimeric antigen receptor (CAR) in human primary T cells. BMC Molecular and Cell Biology. 22 (1), 57 (2021).
  16. Kleeman, B., et al. A guide to choosing fluorescent protein combinations for flow cytometric analysis based on spectral overlap. Cytometry Part A. 93 (5), 556-562 (2018).
  17. Park, J. A., Santich, B. H., Xu, H., Lum, L. G., Cheung, N. V. Potent ex vivo armed T cells using recombinant bispecific antibodies for adoptive immunotherapy with reduced cytokine release. Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002222 (2021).
  18. Park, J. A., Wang, L., Cheung, N. V. Modulating tumor infiltrating myeloid cells to enhance bispecific antibody-driven T cell infiltration and anti-tumor response. Journal of Hematology & Oncology. 14 (1), 142 (2021).
  19. Ströhlein, M. A., Heiss, M. M. The trifunctional antibody catumaxomab in treatment of malignant ascites and peritoneal carcinomatosis. Future Oncology. 6 (9), 1387-1394 (2010).
  20. Rabinovich, B. A., et al. Visualizing fewer than 10 mouse T cells with an enhanced firefly luciferase in immunocompetent mouse models of cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (38), 14342-14346 (2008).
  21. Skovgard, M. S., et al. Imaging CAR T-cell kinetics in solid tumors: Translational implications. Molecular Therapy Oncolytics. 22, 355-367 (2021).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

195

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены