A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

במאמר זה אנו מתארים את הבידוד, התרבית והאינדוקציה האידיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם בשברי כלי דם סטרומה מרקמת השומן הפריאו-אורטית של עכבר, מה שמאפשר לחקור את תפקוד רקמת השומן הפריווסקולרית ואת הקשר שלה עם תאי כלי הדם.

Abstract

רקמת שומן פריווסקולרית (PVAT) היא מחסן רקמת שומן המקיף כלי דם ומציג את הפנוטיפים של אדיפוציטים לבנים, בז' וחומים. תגליות אחרונות שפכו אור על התפקיד המרכזי של PVAT בוויסות הומאוסטזיס כלי הדם והשתתפות בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם. הבנה מקיפה של תכונות PVAT ורגולציה היא בעלת חשיבות רבה לפיתוח טיפולים עתידיים. תרביות ראשוניות של אדיפוציטים פריאורטיים הן בעלות ערך לחקר תפקוד PVAT וההצלבה בין אדיפוציטים פריאורטיים ותאי כלי דם. מאמר זה מציג פרוטוקול חסכוני וישים לבידוד, תרבית ואינדוקציה אדיפוגנית של פרדיפוציטים שמקורם במקטע כלי דם סטרומה מרקמת שומן פריאורטית של עכבר, אשר יכול להיות שימושי למידול אדיפוגנזה או ליפוגנזה במבחנה. הפרוטוקול מתאר עיבוד רקמות והתמיינות תאים לגידול אדיפוציטים פריאורטיים מעכברים צעירים. פרוטוקול זה יספק את אבן הפינה הטכנולוגית בצד הספסל לחקירת תפקוד PVAT.

Introduction

רקמת שומן פריווסקולרית (PVAT), מבנה פריווסקולרי המורכב מתערובת של אדיפוציטים בוגרים ומקטע כלי דם סטרומה (SVF), הוא האמין אינטראקציה עם דופן כלי הדם הסמוך באמצעות ההפרשה שלהparacrineally 1. כמווסת קריטי של הומאוסטזיס כלי דם, תפקוד לקוי של PVAT מעורב בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם 2,3,4. SVF של רקמת השומן מורכב ממספר אוכלוסיות תאים צפויות, כולל תאי אנדותל, תאי חיסון, תאי מזותליום, תאים עצביים ותאי גזע ותאי אב שומניים (ASPCs)5,6. ידוע היטב כי ASPCs השוכנים ב- SVF של רקמת השומן יכולים להצמיח אדיפוציט....

Protocol

הפרוטוקולים של בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים בבית החולים החזה בשנחאי המסונף לבית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנגחאי (מספר אישור: KS23010) ועמדו בתקנות האתיות הרלוונטיות. יש להעדיף עכברי C57BL/6 זכרים ונקבות בגילאי 4-8 שבועות לניסוי זה.

1. הכנת כלים כירורגיים, חוצצים ומדיה תרבותית

  1. כלים כירורגיים אוטוקלאביים (למשל, מספריים כירורגיים ומלקחיים סטנדרטיים) בטמפרטורה של 121°C למשך 30 דקות. חיטוי מכשירים מיקרוכירורגיים עם 75% אלכוהול.
  2. הכינו מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS) בתוספת 1% v/v פניצילין-סטרפטומיצין ועוד 10 מ"ל של PBS בתוספת 10% v/v פניצילין-סטרפטומיצין.
    הערה: בס....

תוצאות

באמצעות פרוטוקול זה שתואר לעיל, בודדנו בקפידה PVAT סביב אבי העורקים החזי של עכבר (איור 1A-D). לאחר שטיפה וטחינה של PVAT לחתיכות קטנות באמצעות מספריים סטריליים (איור 1E,F), שברי רקמות עוכלו בתמיסת עיכול שהכילה collagenase מסוג 1 (1 מ"ג/מ"ל) ו-dispase II (4 מ"ג/מ"ל) והודגרו .......

Discussion

אנו מציעים גישה מעשית וישימה לבידוד ואינדוקציה אדיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם ב-SVF מרקמת שומן פריאורטית של עכבר. היתרונות של פרוטוקול זה הם שהוא פשוט וחסכוני. מספר מספיק של עכברים הוא קריטי לבידוד מוצלח, שכן רקמה לא מספקת עלולה לגרום לצפיפות SVF נמוכה ולמצב גדילה ירוד, מה שבסופו של דבר מ?.......

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים, כספיים או אחרים, להצהיר.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82130012 ו -81830010) ופרויקטי טיפוח למחקר בסיסי של בית החולים לחזה בשנחאי (מספר מענק: 2022YNJCQ03).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.2 μm syringe filtersPALL4612
12-well plate Labselect11210
15 mL centrifuge tubeLabserv310109003
3,3',5-triiodo-L-thyronine (T3)Sigma-AldrichT-28771 nM
50 mL centrifuge tubeLabselectCT-002-50A
anti-adiponectinAbcamab225541:1,000 working concentration
anti-COX IVCST48501:1,000 working concentration
anti-FABP4CST21201:1,000 working concentration
anti-PGC1αAbcamab1918381:1,000 working concentration
anti-PPARγInvitrogenMA5-148891:1,000 working concentration
anti-UCP1Abcamab109831:1,000 working concentration
anti-α-ActininCST64871:1,000 working concentration
BSABeyotimeST023-200g1%
C57BL/6 mice aged 4-8 weeks of both sexesShanghai Model Organisms Center, Inc.
Cell Strainer 70 µm, nylonFalcon352350
Collagen from calf skinSigma-AldrichC8919
Collagenase, Type 1WorthingtonLS0041961 mg/mL
DexamethasoneSigma-AldrichD17561 μM
Dispase IISigma-AldrichD4693-1G4 mg/mL
Fetal bovine serum Gibco16000-04410%
HEPESSigma-AldrichH4034-25G20 mM
High glucose DMEMHycloneSH30022.01
IBMX Sigma-AldrichI70180.5 mM
Incubator with orbital shakerShanghai longyue Instrument Eruipment Co.,Ltd.LYZ-103B
Insulin (cattle) Sigma-Aldrich11070-73-81 μM
IsofluraneRWDR510-22-10
Krebs-Ringer's SolutionPricella PB180347protect from light 
Microsurgical forcepsBeyotimeFS233
Microsurgical scissorBeyotimeFS217
Oil Red O Sangon Biotech (Shanghai) Co., LtdA600395-0050
PBS (Phosphate-buffered saline)Sangon Biotech (Shanghai) Co., LtdB548117-0500
Penicillin-StreptomycinGibco15140122
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch 115-035-1461:5,000 working concentration
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch 111-035-1441:5,000 working concentration
RosiglitazoneSigma-AldrichR24081 μM
Standard forcepsBeyotimeFS225
Surgical scissorBeyotimeFS001

References

  1. Akoumianakis, I., Antoniades, C. The interplay between adipose tissue and the cardiovascular system: is fat always bad. Cardiovascular Research. 113 (9), 999-1008 (2017).
  2. Huang, C. L., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

PVATPVATPVATCrosstalk

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved