טיפול בדיקור סיני במודל עכברי של תפקוד קוגניטיבי לקוי כרוני כתוצאה מהיפוקסיה

Summary

כאן, אנו מתארים פרוטוקול ליישום טיפול בהרדמה קלה ודיקור סיני על מודל עכבר היפוקסיה כרונית וביצוע בדיקות התנהגותיות כדי להעריך את השינויים הקוגנטיבים לאחר הטיפול.

Abstract

הטיפול בהפרעות עצבים מרכזיות מציב באופן עקבי אתגרים משמעותיים בפני התחום הרפואי. דיקור סיני, פרקטיקה לא תרופתית ששורשיה ברפואה הסינית המסורתית, כרוך בהחדרת מחטים עדינות לנקודות מדויקות בגוף ומשמש בדרך כלל לניהול מצבים מגוונים. לאחרונה, דיקור סיני התגלה כהתערבות טיפולית מבטיחה למגוון מחלות נוירולוגיות, כולל חרדה והפרעות נשימה. עם זאת, הפוטנציאל של דיקור סיני בטיפול בתפקוד קוגניטיבי לקוי הנגרם על ידי היפוקסיה כרונית עדיין לא נחקר. מאמר זה מציג פרוטוקול מקיף לביסוס מודל עכברי של ליקוי קוגניטיבי כרוני הנגרם כתוצאה מהיפוקסיה, מתן הרדמה קלה, ביצוע טיפול בדיקור סיני והערכת שינויים התנהגותיים ויכולות זיכרון באמצעות מבחני שדה פתוח ומבוכי מים. פרוטוקול שלב אחר שלב מספק הוראות מפורטות על איתור ומיקום מדויק של נקודות דיקור ומחטים לשיפור קוגניטיבי. על ידי שימוש בפרוטוקול זה, חוקרים יכולים לערוך מחקרים שיטתיים כדי להעריך ביסודיות את הפוטנציאל הטיפולי של דיקור סיני לבעיות קוגניטיביות.

Introduction

אוכלוסיית העולם מתמודדת כיום עם בעיית הזדקנות קריטית, וכתוצאה מכך עלייה מהירה בשכיחות של הפרעות קוגניטיביות. השכיחות העולמית של ליקוי קוגניטיבי היא כ 53.97 לכל 1000 שנות אדם¹. היפוקסיה מוחית כרונית הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של כלי הדם או הפרעות במחזור הדם / הנשימה נותרה אחד מגורמי הסיכון העיקריים לדמנציה הקשורה לגיל². מחקרים קודמים הוכיחו כי היפוקסיה מוחית יכולה להגביר את שקיעת β העמילואיד על ידי שינוי ביטוי BACE1³. בנוסף, היפוקסיה נקשרה לחוסר ויסות של תאי גליה ולדלקת עצבית ^4,5. למרות ההיקף ההולך וגדל של בעיה זו, תרופות מערביות יעילות למניעת ירידה קוגניטיבית כרונית הנגרמת על ידי היפוקסיה חסרות כיום. רפואה סינית מסורתית לא תרופתית, במיוחד דיקור סיני, משמשת מזה אלפי שנים לטיפול בהפרעות קוגניטיביות והראתה תוצאות מבטיחות בהקלה על מחלות נוירודגנרטיביות ^6,7. נקודות הדיקור Baihui, Shenting ו- Zusanli הן נקודות יעילות לטיפול בתפקוד קוגניטיבי^{לקוי 8,9}. מחקרים קליניים הוכיחו כי טיפול בדיקור סיני משפר באופן משמעותי את ציוני ההערכה הקוגניטיבית של מונטריאול (MoCA) ובדיקת מצב מיני-מנטלי (MMSE) בחולים עם ליקוי קוגניטיבי וסקולרי ומשפר ביעילות תפקוד קוגניטיבי^{לקוי 8}. למרות שמחקרים הראו כי דיקור סיני יכול לשפר באופן משמעותי את יכולת הזיכרון של חולדות עם קשירת עורקים - מודל היפוקסיה מוחית חריפה¹⁰, מודל היפוקסיה מוחית חריפה, אין דיווח על ההשפעות של דיקור סיני בכל מודל מכרסם עם הפרעות קוגניטיביות כרוניות הנגרמות על ידי היפוקסיה. היעדר מחקר על המנגנון פגע במידה ניכרת ביישומו הקליני.

מחקרים קודמים הראו כי חשיפת חולדות לסביבה היפוקסית לתקופה של 8 שבועות יכולה להעלות באופן משמעותי את רמות העקה החמצונית והדלקת במוח, וכתוצאה מכך ירידה בתפקוד הזיכרון¹¹. המחקר הנוכחי נועד לחקור את השפעת הדיקור על מודלים של מכרסמים על מנת לקדם את הבנתנו זו. ראוי לציין, עם זאת, כי הרדמה נדרשת בדרך כלל במהלך טיפול דיקור במכרסמים בשל הפוטנציאל לתסיסה במהלך גירוי חוזר. הרדמה ממושכת יכולה להשפיע באופן משמעותי על התפקוד הקוגניטיבי בעכברים, שכן רוב תרופות ההרדמה יכולות לדכא פעילות עצבית ולעכב עיבוד מידע, מה שמוביל לליקויים התנהגותיים¹². מספר מחקרים הראו כי מתן 2.5% sevoflurane למשך 6 שעות יכול לפגוע באופן משמעותי בזיכרון מרחבי, יכולת למידה ותשומת לב בעכברים¹³. יתר על כן, ראיות מצביעות על כך שמינונים גבוהים של הרדמה עלולים לגרום למוות עצבי או נזק עצבי בעכברים¹⁴. לכן, חובה לזהות גישה מתאימה כדי למזער את כמות ההרדמה הכוללת בשימוש. במחקר זה אנו מציגים שיטת דיקור יעילה לטיפול בעכברים עם ליקוי קוגניטיבי, יחד עם מבחנים התנהגותיים להערכת יכולות הזיכרון שלהם. חשוב לציין, אנו מציגים טכניקת הרדמה מותאמת לפני הטיפול שיכולה להפחית ביעילות את המינון הכולל של הרדמה הניתנת במהלך הניסוי.

Protocol

הניסויים בבעלי חיים נערכו באישור הוועדה למחקר ואתיקה בבעלי חיים של מכון המחקר הרפואי חביי יילינג (מספר אישור: N2022148). עכברי C57BL/6J זכרים במשקל 18-22 גרם (ראו טבלת חומרים) שוכנו במרכז החדש להערכת תרופות במכון המחקר הרפואי חביי יילינג. הם קיבלו מזון רגיל ומים נקיים ונחשפו לאור מלאכותי במשך 12 שעות ביום. החדרים שמרו על טווח טמפרטורות מבוקר של 20-26 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 40%-70%.

1. ביסוס מודל עכבר היפוקסיה כרונית (איור 1)

1. לפני תחילת הניסוי, הכינו כלובים של בעלי חיים בלחץ אטמוספרי רגיל וכלובים עם סביבה רציפה דלת חמצן. צור סביבה רציפה דלת חמצן על ידי שימוש במערכת בקרת גז אוטומטית כדי לשטוף את התא בתערובת של חמצן טהור וחנקן.
   הערה: מערכת זו מתוכנתת לשלוט במתג השסתום האלקטרומגנטי, ובכך להבטיח אספקה מדויקת של גז הן מבחינת זמן והן מבחינת ריכוז.
2. חלקו עכברים באופן אקראי לשלוש קבוצות: קבוצת ביקורת (Con), קבוצת מודל (CH) וקבוצת אלקטרו-אקופונקטורה (EA + CH). יש להניח עכברי בקרה ודגם/אלקטרו-דיקור בנפרד בשני הכלובים, עם 10 עכברים בכל כלוב. שמור על מחזור האור של 12 שעות/12 שעות (בהיר/כהה).
   הערה: לא נגרם טיפול או היפוקסיה בקבוצת הביקורת (Con). קבוצת המודל (CH) מורכבת מעכברים עם היפוקסיה כרונית. קבוצת הדיקור האלקטרו-אקופונקטורי (EA + CH) כוללת עכברים הנגרמים מהיפוקסיה וטופלו בדיקור חשמלי.
3. לפיתוח היפוקסיה כרונית, לקבוע את הפרמטרים של תא חמצן נמוך על ידי שימוש במד חמצן דיגיטלי כדי לווסת את קצב זרימת הגז ולשמור על ריכוז חמצן של 10%. הניחו את בעלי החיים בתוך תא דל חמצן בשעה 9:00 בבוקר והוציאו אותם בשעה 17:00, וכתוצאה מכך סך של 8 שעות של חשיפה רצופה לחמצן נמוך ליום במשך 3 חודשים.
   הערה: בעת הגדרת אספקת גז חנקן כדי להפחית את ריכוז החמצן, מומלץ להמשיך לאט כדי למנוע הכנסה מוגזמת של גז חנקן בבת אחת, כפי שהוא יוביל למוות בעלי חיים.
4. הערך את מודל התפקוד הקוגניטיבי הכרוני הנגרם על ידי היפוקסיה באמצעות בדיקה היסטולוגית ומבחנים התנהגותיים: מבחן שדה פתוח¹⁵ ומבחן מבוך מים¹⁶.

2. הרדמה (איור 2)

1. הכינו את מכונת ההרדמה לבעלי חיים קטנים (ראו טבלת חומרים) ואת כרית החימום בטמפרטורה קבועה.
   הערה: במהלך הרדמה, בעלי חיים רגישים להיפותרמיה, מה שמדגיש את הצורך להשתמש בכרית חימום בטמפרטורה קבועה לבידוד.
2. הכניסו את העכבר לקופסת השראת ההרדמה והכניסו במהירות איזופלורן של 2%-2.5% בחמצן (ראו טבלת חומרים) למשך כדקה.
   הערה: טיפול מקדים קצר טווח זה הוא צעד חיוני כדי להבטיח שעכברים יוכלו לשגשג תחת מינון בריכוז נמוך למשך פרק זמן ממושך.
3. ברגע שהרגישות שלהם פחתה, צבטו את בוהן העכבר כדי לבדוק את הרפלקס שלו. לאחר מכן, העבר את העכבר אל כרית חימום הטמפרטורה קבועה (37 ° C).
4. יש לכוונן את קצב זרימת ההרדמה לריכוז של כ-0.5%. חבר את מכונת ההרדמה לפה ולאף של העכבר. המשך בטיפול אלקטרו-אקופונקטורה תוך הבטחת תחזוקת ההרדמה.
   הערה: השפעת ההרדמה אושרה כאשר העכברים הפסיקו למצמץ. השפעת ההרדמה יכולה להימשך לפחות 30 דקות.

3. טיפול אלקטרו-אקופונקטורה

1. כדי לשפר ביעילות תפקוד קוגניטיבי, בחרו נקודות דיקור ספציפיות, כגון Baihui (GV20), Shenting (GV24) ו-Zusanli דו-צדדי (ST36), בהתבסס על תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית והניסיון הקליני (איור 3). יש לבצע טיפול בדיקור חשמלי שבועיים לפני השלמת תהליך הדוגמנות.
   1. אתר את נקודת הדיקור GV20 על קו האמצע של המצח, בנקודת האמצע של קו המחבר את קצות האוזניים⁷. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 2 מ"מ.
   2. אתר את נקודת הדיקור GV24 1.3 מ"מ ישירות מעל נקודת האמצע של עיני העכבר בקו האמצע של המצח¹⁷. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 2 מ"מ.
   3. אתר את נקודת הדיקור ST36 בצד החיצוני של מפרק הברך, כ -2 מ"מ מתחת לראש הפיבולה^18,19. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 3-4 מ"מ.
2. הכינו מחטי דיקור חד פעמיות (ראו טבלת חומרים) ומכשיר אלקטרו-אקופונקטורה (ראו טבלת חומרים) לצורך ההליך (איור 4).
3. הניחו את העכבר במצב נוטה תחת הרדמה קלה עם 0.5% איזופלורן, וודאו שראשיהם וגפיהם משותקים. החזק מחט נירוסטה (קוטר: 0.18 מ"מ; אורך: 7 מ"מ) ביד ימין, באמצעות האגודל, האצבע המורה והאצבע האמצעית.
4. בצע דיקור סיני בנקודות דיקור GV20 ו- GV24 לרוחב לעומק 2 מ"מ, הרם את העור על ראש העכבר ביד שמאל. נקב את נקודת הדיקור ST36 אנכית לעומק 3-4 מ"מ על ידי נגיעה בראש הפיבולרי בצד הצדדי של מפרק הברך של העכבר ולחץ על העור עם האגודל השמאלי.
   הערה: עבור נקודות הדיקור הממוקמות על הראש, מומלץ להכניס את המחטים ברצף של GV24 ואחריו GV20. הזמנה זו מאפשרת נוחות תפעולית. נקודות דיקור הן מיקומים אנטומיים בדידים ולא נקודות נייחות. כתוצאה מכך, סטיות קלות בזווית החדרת המחט אינן משפיעות על היעילות הטיפולית, כפי שניתן לראות בחולים המקבלים טיפול אלקטרו-אקופונקטורה במסגרות קליניות.
5. חברו את מכשיר הדיקור האלקטרוני למחטים, כאשר GV20 ו-ST36 השמאלי מחוברים למערכת אלקטרודות אחת ו-GV24 ו-ST36 הימני מחובר לאלקטרודה אחרת (איור 4). בחר את מצב הגל הרציף, עם עוצמת זרם חשמלי של 2 mA ותדר של 2 הרץ^20,21. אשר את הטיפול האידיאלי על ידי התבוננות ברעד קל מקומי בנקודות דיקור וסובלנות שקטה על ידי העכבר.
   1. בעת חיבור מכשיר הדיקור החשמלי, חבר את הקצה הפרוקסימלי של המחט. זה עוזר למזער את ההשפעה הנגרמת על ידי משקל קו החיבור וכתוצאה מכך משפר את מניעת ניתוק המחט. במידת הצורך, השתמש בסרט הדבקה כדי לאבטח את המחט המוחדרת אופקית ואת קו החיבור.
6. יש לנהל את הטיפול היומי במשך 30 דקות בכל יום במשך 6 ימים רצופים, עם יום מנוחה אחד בין כל מחזור טיפול.

4. בדיקת שדה פתוח (איור 5)

הערה: מבחן השדה הפתוח הוא שיטה קונבנציונלית המשמשת להערכת ההתנהגות האוטונומית, התנהגות חקרנית, יכולות קוגניטיביות והתנהגות חרדה של חיות ניסוי בסביבות חדשות ולא מוכרות²². הוא מורכב מתיבת תגובה בשדה פתוח ומכשיר הקלטה.

1. כדי לבצע את הבדיקה, הכינו קובייה לבנה בגודל 50 ס"מ × 50 ס"מ × 30 ס"מ, כאשר התחתית מחולקת ל -25 ריבועים שווים בגודל 10 ס"מ × 10 ס"מ.
2. הכנס את העכבר לתיבת התגובה בשדה הפתוח לצורך התאקלמות. אפשרו לעכבר לסייר בחדר הבדיקה ולהכיר את הסביבה החדשה במהלך תקופת ההתאקלמות. בצע את בדיקת השדה הפתוח לאחר התאקלמות העכבר לסביבת הניסוי למשך שעה אחת.
   הערה: זה מבטיח את מזעור החרדה או הלחץ הנגרמים על ידי שינויים בסביבה, ובכך מאפשר תוצאות מדויקות יותר במהלך ההערכות ההתנהגותיות הבאות.
3. הנח את העכבר במרכז הקופסה ונטר אותו במשך 10 דקות לאחר שאיפשר לעכבר להסתגל לסביבה למשך 2 דקות.
   1. השתמשו במערכת מעקב וידאו (ראו טבלת חומרים) כדי לתעד את מסלול התנועה של העכבר, את המרחק הכולל שעבר, את זמן השהייה באזור המרכזי, את מהירות חציית האזור המרכזי ואת מספר הכניסות לאזור המרכזי במהלך הבחינה.
   2. בצע את הפעולות הרלוונטיות בהתאם להוראות במדריך המוצר של מערכת מעקב הווידאו. כל עכבר עובר בדיקה אחת ומתחיל לחקור מאותו מיקום בתוך הקופסה.
   3. לאחר כל בדיקה, נקו את קופסת השדה הפתוח עם 75% אתנול כדי למנוע תוצאות שגויות הנגרמות כתוצאה מהפרעות ריח בעת שימוש בעכבר.

5. מבוך מים (איור 5)

הערה: מבחן מבוך המים משמש לעתים קרובות ככלי הערכה התנהגותית בניסויים המערבים עכברים כדי להעריך את יכולות הלמידה והזיכרון המרחביות שלהם²³.

1. הכינו מיכל מים עגול בקוטר 120 ס"מ ובעומק 30 ס"מ. חלק את הטנק לארבעה רבעים שווים: I, II, III ו- IV. אם משתמשים בעכברים שחורים בניסוי, השתמשו במיכל מים לבנים; עבור עכברים לבנים, השתמש במיכל מים שחורים.
2. הניחו וילונות סביב מיכל המים העגול כדי למנוע מהעכבר לראות את החוקרים במהלך הבדיקה.
3. מקם סמנים שונים על המשטח העליון של מכל המים כרמזים חזותיים להתמצאות מרחבית. ודא שסמנים אלה נשארים נייחים לאורך כל הניסוי כדי לשמור על עקביות.
4. מקמו משטח עגול בקוטר של 10 ס"מ ברביע III של מכל המים כאזור היעד המיועד. ודא שניתן להזיז ולאבטח את הפלטפורמה בקלות בכל מיקום רצוי.
5. במהלך הניסוי, להכניס מים לתוך המיכל תוך שמירה על טווח טמפרטורות של 22-24 מעלות צלזיוס.
   1. ודא שמפלס המים נשאר באופן עקבי 1 ס"מ מעל פלטפורמת המטרה. כלול ריכוז של 20% של דו תחמוצת טיטניום לא רעיל במים כדי להשיג ניגוד ברור בין העכברים השחורים לבין הרקע הלבן. ניגודיות זו מאפשרת למצלמה להקליט את תנועות העכבר ואת הפרמטרים הרלוונטיים.
6. בצע מבחן חקר מרחבי רציף בן 5 ימים על ידי מיקום רציף של כל עכבר ברבעים I, II, III ו- IV.
   1. מקם את העכבר עם הפנים לקיר. התרחק מהמבוך כדי למנוע מהעכבר להשתמש במיקום הנסיין כנקודת התייחסות. הקלט את הזמן שלוקח לעכבר למצוא את הפלטפורמה.
   2. אם העכבר לא מצליח לאתר את הפלטפורמה התת ימית תוך 90 שניות, הנחית את העכבר לפלטפורמה וספק תקופת למידה של 30 שניות. בנוסף, רשום את תקופת ההשהיה כ- 90 שניות.
   3. אם העכבר מאתר את הפלטפורמה התת-ימית תוך 90 שניות, הניחו לה להישאר על הרציף במשך 10 שניות ללמידה לפני הוצאותיה ממיכל המים.
   4. יבש את העכבר עם מגבת והחזיר אותו לכלוב שלו.
   5. סובב את המיקום של כל עכבר בכל רביע כל 20 דקות. תעד את מרחק השחייה, המהירות והזמן שלקח לכל עכבר למצוא את הפלטפורמה (תקופת ההשהיה) באמצעות מערכת מעקב הווידאו (ראה טבלת חומרים), ובצע את הפעולות הרלוונטיות בהתאם להוראות במדריך המוצר.
   6. הציבו את המשטח 1 ס"מ מעל פני המים ביום הראשון. הניחו את המצע בעומק של 1 ס"מ מתחת לפני המים בימים 2-5.
7. ביום 6, הסירו את האסדה מרביע המטרה וערכו מבחן חקר מרחבי.
   1. מקם את העכבר ברביע I כדי לסייר בחופשיות במשך 90 שניות. המחשב רושם את מסלול השחייה של העכבר, את הזמן שבילה ברביע המטרה ואת מספר הפעמים שהוא חוצה את הרציף.
      הערה: על מנת למזער טעויות ניסוי הנגרמות על ידי גורמים אנושיים, חשוב לשמור על מיקום נקודת הייחוס קבוע בניסוי מבוך המים. בנוסף, הנסיין צריך לסגת מיד לאחר הנחת העכבר במים. לאחר השלמת הניסוי, יש לייבש את העכברים במגבת ולהחזיר אותם לכלובים שלהם כדי לשמור על חום.

6. צביעת המטוקסילין ואאוזין (איור 6)

הערה: בדיקה היסטולוגית של אזור ההיפוקמפוס מסייעת בהערכת הקמת מודל ההיפוקסיה ובקביעת יעילות הטיפול בדיקור.

1. לאחר הניסוי ההתנהגותי, מרדימים את העכבר בזריקה תוך-צפקית של 20 מ"ג/ק"ג נתרן פנטוברביטל ומחוררים אותו בתמיסת 10% פרפורמלדהיד (ראו טבלת חומרים) כדי להבטיח זילוח גוף מלא. בודדו את רקמת המוח וטבלו אותה בתמיסת 10% פרפורמלדהיד בטמפרטורת החדר (RT) למשך 3 ימים כדי להשיג קיבוע.
2. הניחו את דגימות המוח בקופסת הטבעה. לאחר מכן, לשטוף את דגימות המוח המעובד עם מים זורמים במשך 6 שעות.
3. להעסיק מעבד רקמות אוטומטי כדי לייבש את הדגימות באמצעות סדרה של פתרונות אלכוהול עם ריכוזים הולכים וגדלים, כלומר, 60% אתנול במשך 1 שעות, 70% אתנול במשך 1 שעות, 90% אתנול במשך 1 שעות, 95% אתנול במשך 2 שעות, ולבסוף, 100% אתנול במשך 2 שעות.
4. לטבול את דגימות הרקמה בקסילן במשך 2 שעות כדי להשיג שקיפות. לאחר מכן, לאחר השלמת תהליך ההתייבשות, להעביר את הדגימות permeabilized שעווה פרפין מחומם ל 60 ° C במשך 3 שעות. לבסוף, להטביע אותם במעבד אוטומטי.
5. השתמש בכלי פריסה סיבובי כדי לקבל חתכים של 4 מיקרומטר. לאחר מכן, יש לצבוע את החלקים בהמטוקסילין למשך זמן שנע בין 3-8 דקות, ולאחר מכן להכתים את האאוזין למשך 1-3 דקות.
6. מעבירים ברצף את החלקים המוכתמים למיכלים נפרדים של אלכוהול טהור וקסילן. לאחר מכן, אטמו ואבטחו את החלקים המוכתמים עם חניכיים ניטרליות כהכנה לבדיקה פתולוגית תחת מיקרוסקופ אופטי.
7. השתמש בסורק שקופיות (ראה רשימת חומרים) כדי לסרוק את הפרוסות. לאחר מכן, השתמש בתוכנת הצפייה כדי לקבל את תוצאות צביעת HE עבור אזור ההיפוקמפוס. השווה את הסדר של נוירונים ואת עיבוי של גרעינים עצביים.

תוצאות

אפיון מסלולי תנועה של עכברים בניסוי השדה הפתוח
מפת המסלול מגלה כי עכברים בקבוצה הנורמלית מפגינים נטייה עמוקה לחקור בסביבות לא מוכרות. מסלולי הפעילות שלהם מרוכזים בעיקר בפינות תוך כיסוי כל השדה הפתוח (פאנל שמאלי). לעומת זאת, קבוצת מודל ההיפוקסיה ארוכת הטווח של עכברים מפגינה רצון...

Discussion

אקופונקטורה, פרקטיקה רפואית לא פרמקולוגית שמקורה בסין לפני למעלה מ -2,000 שנה, כוללת החדרת מחטים דקות לנקודות ספציפיות בגוף הידועות כנקודות דיקור. מאמינים כי נקודות אלה מחוברות על ידי ערוצים או מרידיאנים שדרכם זורמת האנרגיה החיונית של הגוף, או "צ'י",²⁴ . על ידי גירוי נקודות אלה, דיק...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% paraformaldehyde solution	Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd	RL3234
ANY-maze	Science	SA201	Video tracking system
C75BL/6J mice	BEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTD	No.110322220103041767	Gender: Male,  Weight: 18–22 g
Electroacupuncture device	Great Wall	KWD-808 I
Hwato acupuncture  needle	Suzhou Medical Appliance Factory	2655519
Isoflurane	RWD Life Science Co.,Ltd	R510-22
NanoZoomer Digital Pathology	Hamamatsu Photonics K. K	C9600-01
Small animal anesthesia machine	RWD	YL-LE-A106