ספקטרומטריית מסות טנדם ברזולוציה גבוהה לחקר מרכיבים כימיים של Gynura bicolor DC

Summary

אנו מתארים פרוטוקול כללי המשלב ניתוח ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה ועגינה מולקולרית במחקר הרפואה הסינית המסורתית.

Abstract

ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצויים הם נושאים חשובים למחקר הבסיסי של הרפואה הסינית המסורתית (TCM). כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד Quadrupole זמן טיסה טנדם ספקטרומטריית מסה (UPLC-Q-TOF-MS/MS) הפכה בהדרגה לטכנולוגיה מובילה לזיהוי רכיבי TCM. Gynura bicolor DC. (BFH), צמח רב-שנתי ללא גזע המשמש לרפואה ולמזון בסין יש השפעות רפואיות כגון פינוי חום, הרטבת הריאה, הקלה על שיעול, פיזור קיפאון והקלה על נפיחות. פוליפנולים ופלבנואידים מכילים איזומרים רבים, המעכבים את זיהוי התרכובות המורכבות ב-BFH. מאמר זה מציג פרוטוקול שיטתי לחקר מרכיבים כימיים של BFH המבוסס על מיצוי ממס ונתונים משולבים באמצעות UPLC-Q-TOF-MS.

השיטה המתוארת כאן כוללת פרוטוקולים שיטתיים לטיפול מקדים בדגימה, כיול טרשת נפוצה, רכישת טרשת נפוצה, עיבוד נתונים וניתוח תוצאות. טיפול מקדים לדוגמה כולל איסוף, ניקוי, ייבוש, ריסוק ומיצוי. כיול טרשת נפוצה מורכב מתיקון רב-נקודתי וחד-נקודתי. עיבוד נתונים כולל ייבוא נתונים, הקמת שיטות, עיבוד ניתוח והצגת תוצאות. תוצאות מייצגות של דפוס הפיצול האופייני של חומצות פנוליות, אסטרים וגליקוזידים ב- Gynura bicolor DC. (BFH) מוצגות במאמר זה. בנוסף, בחירת ממס אורגני, מיצוי, שילוב נתונים, בחירת אנרגיית התנגשות ושיפור השיטה נדונים בפירוט. פרוטוקול אוניברסלי זה יכול להיות בשימוש נרחב לזיהוי תרכובות מורכבות ב- TCM.

Introduction

הרפואה הסינית המסורתית (TCM) מיושמת קלינית בסין כבר אלפי שנים, והיא ממלאת תפקיד חיוני בשמירה על בריאותם של הסינים¹. הרכב ה-TCM מגוון ומורכב, וה-TCM דווח רבות במחקרים איכותניים רבים המתמקדים בהרכב הכימי². ניתן לחלק באופן גס את המרכיבים הכימיים ברפואה סינית מסורתית לקטגוריות הבאות כגון אלקלואידים, חומצות אורגניות, פנילפרופנואידים, קומרין, ליגננים, קווינונים, פלבנואידים, טרפנואידים, ספונינים טריטרפנואידים, ספונינים סטרואידים, גליקוזידים לבביים וטאנינים³. בהתחשב במספר הגדול של רכיבים לא ידועים ואיזומרים בלתי ניתנים להבחנה ב- TCM, ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצ....

Protocol

1. טיפול מקדים לדוגמה

1. לשטוף את כל העשב של BFH במים טהורים עד שאין פיקדונות גלויים וזיהומים. הניחו את ה-BFH הנקי בתבנית ולאחר מכן הכניסו אותו לתנור (איור 1B). מכוונים את התנור ל-50 מעלות למשך 24 שעות.
   הערה: כל המפעל של BFH נאסף במחוז סצ'ואן, סין.
2. למחוץ BFH מיובש במגרסה רב תכליתית במהירות גבוהה. העבירו את האבקה הגסה למסננת בעלת 50 רשתות (איור 1C). אספו את האבקה הדקה בשקית אטומה, ואחסנו אותה במגדל ייבוש.
3. שקלו במדויק שש דגימות BFH של 0.25 גרם כל אחת, והניחו אותן בשש צלוחיות חרוטיות. הוסיפו 30 מ"ל של ממס אורגני (50% אתנול-מים, 70% ....

תוצאות

זיהוי ההרכב הכימי של BFH שימש כמודל להצגת התוצאות המייצגות. כרומטוגרמות שיא בסיס של Gynura bicolor DC שחולץ ממס. מוצגים בקובץ משלים 1-משלים איור S1-S6, וזמן השמירה שנצפה (RT), שם הרכיב, הנוסחה, יחס המסה לטעינה (m/z) ושגיאת המסה מפורטים בטבלאות S1-S6. ב-ZBTK זוהו כל 35 סוגי התרכובות .......

Discussion

מלבד מרתח מים¹², מיצוי ממס אורגני הוא שיטה נפוצה נוספת של טיפול מקדים^{TCM 13}. על פי העיקרון של פירוק פאזה דומה, רכיבים רבים הופקו על ידי שילוב של ממיסים אורגניים שונים¹⁴. מיצוי בסיוע אולטראסוני הוא אחת השיטות העיקריות המשמשות להשגת רכיבי?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software