用于研究双色 DC 化学成分的高分辨率串联质谱法

摘要

我们描述了一种在中医研究中整合高分辨率质谱分析和分子对接的通用方案。

摘要

所需化学成分的分离和分析是中医 （TCM） 基础研究的重要课题。超高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱法 （UPLC-Q-TOF-MS/MS） 已逐渐成为鉴定中药成分的领先技术。 双色 Gynura DC. （BFH） 是一种多年生无茎草本植物，在中国用于医药和食品，具有清热、润肺、止咳、散瘀、消肿等药用功效。多酚和类黄酮含有许多异构体，这阻碍了 BFH 中复杂化合物的鉴定。本文提出了一种基于溶剂萃取和通过 UPLC-Q-TOF-MS 整合数据研究 BFH 化学成分的系统方案。

此处描述的方法包括用于样品预处理、MS 校准、MS 采集、数据处理和结果分析的系统方案。样品预处理包括收集、清洁、干燥、粉碎和提取。MS 校准包括多点和单点校正。数据处理包括数据导入、方法构建、分析处理和结果呈现。本文介绍了 Gynura bicolor DC. （BFH） 中酚酸、酯和糖苷的典型碎裂模式的代表性结果。此外，还详细讨论了有机溶剂的选择、萃取、数据集成、碰撞能量选择和方法改进。这种通用方案可广泛用于鉴定中医中的复杂化合物。

引言

中医 （TCM） 在中国已有数千年的临床实践，它在维护中国人的健康方面发挥着至关重要的作用¹。中医的成分多样复杂，中医在许多以化学成分为重点的定性研究中被广泛报道²。中医中的化学成分大致可分为以下几类，如生物碱、有机酸、苯丙素类、香豆素、木脂素、醌类、黄酮类、萜类、三萜类皂苷、类固醇皂苷、强心苷和单宁³。鉴于中医中存在大量未知成分和难以区分的异构体，所需化学成分的分离和分析是中医⁴ 基础研究的重要课题。

超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱法 （UPLC-Q-TOF-MS） 已用于分析中药 （TCM） 中的物质，可通过超高效液相色谱法分离 ^5,6。MS 的高分辨率可提供广泛的离子信息，用于数据库分析，误差小于 5 ppm⁷。开启碰撞能量后，二级 MS 模式可以获得二级碎片离子，其强度和数量受能量大小⁸ 的影响。

双色 Gynura DC. （....

研究方案

1. 样品前处理

1. 用纯水清洗 BFH 的整个草药，直到没有可见的沉积物和杂质。将干净的 BFH 放入盘子中，然后将其放入烤箱中（图 1B）。将烤箱设置为 50 °C 24 小时。
   注：BFH 的整个工厂收集于中国四川省。
2. 在高速多功能破碎机中粉碎干燥的 BFH。将粗粉末转移到 50 目筛子中（图 1C）。将细粉收集在密封袋中，并储存在干燥塔中。
3. 准确称取 6 个 BFH 样品，每个样品 0.25 g，并将它们放入 6 个锥形瓶中。向每个锥形瓶中加入 30 mL 有机溶剂（50% 乙醇-水、70% 乙醇-水、氯仿、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇）（图 1D）。
4. 将混合物转移到超声浴超声仪中，在 25 °C 下提取 30 分钟。 将样品以 14,000 x g 离心 5 分钟。准备注射注射器和 0.22 μm 有机微孔膜过滤器。将所有上清液过滤到 2 mL 样品瓶中。

2. MS 校准

1. 使用 1,000 μL 量程移液器，将 500 μL 0....

讨论

除饮水¹² 外，有机溶剂萃取是中医前处理¹³ 的另一种常用方法。根据相似相溶解的原理，通过混合各种有机溶剂提取了许多成分¹⁴。超声辅助提取是 TCM¹⁵ 中用于获取成分的主要方法之一。超临界二氧化碳萃取适用于提取某些种类的物质，如木脂素¹⁶。此外，研究了离子液体 （IL） 中.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software