Spectrométrie de masse en tandem haute résolution pour l’étude des constituants chimiques de Gynura bicolor DC

Résumé

Nous décrivons un protocole général qui intègre l’analyse par spectrométrie de masse à haute résolution et l’amarrage moléculaire dans la recherche en médecine traditionnelle chinoise.

Résumé

La séparation et l’analyse des composants chimiques souhaités sont des sujets importants pour la recherche fondamentale de la médecine traditionnelle chinoise (MTC). La chromatographie liquide à ultra-haute performance et la spectrométrie de masse en tandem quadripolaire à temps de vol (UPLC-Q-TOF-MS/MS) est progressivement devenue une technologie de pointe pour l’identification des ingrédients de la MTC. Gynura bicolor DC. (BFH), une plante vivace sans tige utilisée pour la médecine et l’alimentation en Chine, a des effets médicinaux tels que l’élimination de la chaleur, l’humidification des poumons, le soulagement de la toux, la dispersion de la stase et le soulagement de l’enflure. Les polyphénols et les flavonoïdes contiennent de nombreux isomères, ce qui entrave l’identification des composés complexes dans la BFH. Cet article présente un protocole systématique pour l’étude des constituants chimiques de la BFH basé sur l’extraction par solvant et les données intégrées via UPLC-Q-TOF-MS.

La méthode décrite ici comprend des protocoles systématiques pour le prétraitement des échantillons, l’étalonnage MS, l’acquisition MS, le traitement des données et l’analyse des résultats. Le prétraitement de l’échantillon comprend la collecte, le nettoyage, le séchage, le broyage et l’extraction. L’étalonnage MS consiste en une correction multipoint et monopoint. Le traitement des données comprend l’importation de données, l’établissement de méthodes, le traitement de l’analyse et la présentation des résultats. Des résultats représentatifs du modèle de fragmentation typique des acides phénoliques, des esters et des glycosides chez Gynura bicolor DC (BFH) sont présentés dans cet article. De plus, la sélection des solvants organiques, l’extraction, l’intégration des données, la sélection de l’énergie de collision et l’amélioration de la méthode sont discutées en détail. Ce protocole universel peut être largement utilisé pour identifier des composés complexes en MTC.

Introduction

La médecine traditionnelle chinoise (MTC) est pratiquée cliniquement en Chine depuis des milliers d’années et joue un rôle essentiel dans le maintien de la santé des Chinois¹. La composition de la MTC est diverse et complexe, et la MTC a été largement rapportée dans de nombreuses études qualitatives axées sur la composition chimique². Les composants chimiques de la MTC peuvent être grossièrement divisés dans les catégories suivantes telles que les alcaloïdes, les acides organiques, les phénylpropanoïdes, les coumarines, les lignanes, les quinones, les flavonoïdes, les terpénoïdes, les sa....

Protocole

1. Prétraitement de l’échantillon

1. Lavez toute l’herbe de BFH dans de l’eau pure jusqu’à ce qu’il n’y ait plus de dépôts et d’impuretés visibles. Placez le BFH propre dans un plat, puis placez-le au four (Figure 1B). Réglez le four à 50 °C pendant 24 h.
   REMARQUE : La plante entière de BFH a été récoltée dans la province du Sichuan, en Chine.
2. Broyage séché BFH dans un broyeur multifonction à grande vitesse. Transférez la poudre grossière dans un tamis de 50 mailles (Figure 1C). Recueillez la poudre fine dans un sac hermétique et stockez-l....

Discussion

Outre la décoction d’eau¹², l’extraction par solvant organique est une autre méthode courante de prétraitement MTC¹³. Selon le principe de la dissolution de phase similaire, de nombreux composants ont été extraits par la combinaison de divers solvants organiques¹⁴. L’extraction assistée par ultrasons est l’une des principales méthodes utilisées pour obtenir des composants dans la MTC^.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software