Тандемная масс-спектрометрия высокого разрешения для изучения химических составляющих Gynura bicolor DC

Резюме

Мы описываем общий протокол, который объединяет масс-спектрометрический анализ высокого разрешения и молекулярный докинг в исследованиях традиционной китайской медицины.

Аннотация

Разделение и анализ желаемых химических компонентов являются важными предметами для фундаментальных исследований традиционной китайской медицины (ТКМ). Сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография квадрупольная времяпролетная тандемная масс-спектрометрия (UPLC-Q-TOF-MS/MS) постепенно стала ведущей технологией для идентификации ингредиентов ТКМ. Gynura bicolor DC. (BFH), многолетнее бесстебельное травянистое растение, используемое в медицине и пищу в Китае, обладает лечебными эффектами, такими как снятие тепла, увлажнение легких, облегчение кашля, рассеивание стазиса и снятие отеков. Полифенолы и флавоноиды содержат многочисленные изомеры, которые затрудняют идентификацию сложных соединений в БФГ. В данной работе представлен систематический протокол изучения химических составляющих BFH на основе экстракции растворителем и интегрированных данных с помощью UPLC-Q-TOF-MS.

Описанный здесь метод включает в себя систематические протоколы предварительной обработки образца, калибровки МС, сбора МС, обработки данных и анализа результатов. Предварительная обработка образцов включает в себя сбор, очистку, сушку, дробление и экстракцию. Калибровка MS состоит из многоточечной и одноточечной коррекции. Обработка данных включает в себя импорт данных, установление метода, обработку анализа и представление результатов. В данной работе представлены репрезентативные результаты типичной картины фрагментации фенольных кислот, сложных эфиров и гликозидов в Gynura bicolor DC. (BFH). Кроме того, подробно обсуждаются выбор органических растворителей, экстракция, интеграция данных, выбор энергии столкновений и совершенствование метода. Этот универсальный протокол может быть широко использован для идентификации сложных соединений в ТКМ.

Введение

Традиционная китайская медицина (ТКМ) клинически практикуется в Китае на протяжении тысячелетий, и она играет жизненно важную роль в поддержании здоровья китайцев^. Состав ТКМ разнообразен и сложен, и ТКМ широко освещалась во многих качественных исследованиях, посвященных химическому^{составу}. Химические компоненты ТКМ можно условно разделить на следующие категории, такие как алкалоиды, органические кислоты, фенилпропаноиды, кумарины, лигнаны, хиноны, флавоноиды, терпеноиды, тритерпеноидные сапонины, стероидные сапонины, сердечные гликозиды и дубильные^{вещества.} Учиты....

протокол

1. Предварительная обработка образца

1. Промойте всю траву БФГ в чистой воде до тех пор, пока не останется видимых отложений и загрязнений. Поместите чистый BFH в посуду, а затем поставьте в духовку (Рисунок 1B). Установите духовку на 50 °C на 24 часа.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Весь завод BFH был собран в провинции Сычуань, Китай.
2. Дробление высушенной BFH в высокоскоростной многофункциональной дробилке. Переложите крупный порошок в сито с плотностью 50 меш (рисунок 1C). Соберите мелкий порошок в герметичный пакет и храните его в сушильной башне.
<....

Результаты

Идентификация химического состава BFH была использована в качестве модели для отображения репрезентативных результатов. Базовые пиковые хроматограммы экстрагированной растворителем Gynura bicolor DC. показаны в Дополнительном файле 1-Дополнительный рисунок S1-S6

Обсуждение

Помимо водного отвара¹², еще одним распространенным методом^{предварительной обработки} ТКМ является экстракция органическим растворителем. В соответствии с принципом растворения в аналогичной фазе путем комбинации различных органических р?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software