Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Temsili Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Geleneksel Çin tıbbı araştırmalarında yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi analizini ve moleküler yerleştirmeyi entegre eden genel bir protokolü açıklıyoruz.

Özet

İstenilen kimyasal bileşenlerin ayrılması ve analizi, geleneksel Çin tıbbının (TCM) temel araştırması için önemli konulardır. Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi dört kutuplu uçuş süresi tandem kütle spektrometresi (UPLC-Q-TOF-MS/MS), TCM bileşenlerinin tanımlanması için yavaş yavaş lider bir teknoloji haline gelmiştir. Gynura iki renkli DC. Çin'de ilaç ve gıda için kullanılan çok yıllık sapsız bir bitki olan (BFH), ısıyı temizlemek, akciğeri nemlendirmek, öksürüğü hafifletmek, stazı dağıtmak ve şişliği gidermek gibi tıbbi etkilere sahiptir. Polifenoller ve flavonoidler, BFH'deki karmaşık bileşiklerin tanımlanmasını engelleyen çok sayıda izomer içerir. Bu makale, solvent ekstraksiyonu ve UPLC-Q-TOF-MS aracılığıyla entegre verilere dayalı olarak BFH'nin kimyasal bileşenlerini incelemek için sistematik bir protokol sunmaktadır.

Burada açıklanan yöntem, numune ön işlemi, MS kalibrasyonu, MS elde etme, veri işleme ve sonuçların analizi için sistematik protokolleri içerir. Numune ön işlemi, toplama, temizleme, kurutma, kırma ve ekstraksiyonu içerir. MS kalibrasyonu, çok noktalı ve tek noktalı düzeltmeden oluşur. Veri işleme, veri içe aktarma, yöntem oluşturma, analiz işleme ve sonuç sunumunu içerir. Gynura bicolor DC'deki fenolik asitlerin, esterlerin ve glikozitlerin tipik parçalanma modelinin temsili sonuçları bu yazıda sunulmuştur. Ek olarak, organik çözücü seçimi, ekstraksiyon, veri entegrasyonu, çarpışma enerjisi seçimi ve yöntem iyileştirme ayrıntılı olarak tartışılmaktadır. Bu evrensel protokol, TCM'deki karmaşık bileşikleri tanımlamak için yaygın olarak kullanılabilir.

Giriş

Geleneksel Çin tıbbı (TCM), Çin'de binlerce yıldır klinik olarak uygulanmaktadır ve Çin halkının sağlığının korunmasında hayati bir rol oynamaktadır1. TCM'nin bileşimi çeşitli ve karmaşıktır ve TCM, kimyasal bileşim2'ye odaklanan birçok kalitatif çalışmada geniş çapta rapor edilmiştir. TCM'deki kimyasal bileşenler kabaca alkaloidler, organik asitler, fenilpropanoidler, kumarinler, lignanlar, kinonlar, flavonoidler, terpenoidler, triterpenoid saponinler, steroid saponinler, kardiyak glikozitler ve tanenler gibi aşağıdaki kategorilere ayrılabilir3. TCM'deki çok sayı....

Protokol

1. Numune ön işlemi

  1. BFH'nin tüm bitkisini, görünür tortu ve kirlilik kalmayana kadar saf suda yıkayın. Temiz BFH'yi bir tabağa koyun ve ardından fırına koyun (Şekil 1B). Fırını 24 saat boyunca 50 °C'ye ayarlayın.
    NOT: BFH fabrikasının tamamı Çin'in Sichuan Eyaletinde toplandı.
  2. Kurutulmuş BFH'yi yüksek hızlı, çok işlevli bir kırıcıda ezin. Kaba tozu 50 gözenekli bir eleğe aktarın (Şekil 1C). İnce tozu hava geçirmez bir torbada toplayın ve bir kurutma kulesinde saklayın.
  3. Her biri 0,25 g'lık altı BFH örneğini doğru bir şekilde ta....

Temsili Sonuçlar

BFH'nin kimyasal bileşim tanımlaması, temsili sonuçları göstermek için bir model olarak kullanıldı. Solvent ekstrakte edilmiş Gynura bicolor DC'nin baz tepe kromatogramları. Ek Dosya 1-Ek Şekil S1-S6'da gösterilmiştir ve gözlemlenen tutma süresi (RT), bileşen adı, formül, kütle-yük oranı (m/z) ve kütle hatası Tablo S1-S6'da listelenmiştir. ZBTK'da, 35 çeşit bileşiğin tümü, UPLC-TOF-MS'deki ayrılmış piklerden tanımlandı.

Tartışmalar

Su kaynatma12'nin yanı sıra, organik çözücü ekstraksiyonu, TCM ön işleminin13 başka bir yaygın yöntemidir. Benzer faz çözünmesi ilkesine göre, çeşitli organik çözücülerin14 kombinasyonu ile çok sayıda bileşen ekstrakte edilmiştir. Ultrasonik destekli ekstraksiyon, TCM15'te bileşen elde etmek için kullanılan ana yöntemlerden biridir. Süperkritik karbondioksit ekstr.......

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden hiçbir mali çıkar beyan etmemektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82104881), TCM Bağışıklık Hastalıklarının Tedavisi Kalıtım ve İnovasyon Ekibi, Chongqing Tıbbi Bilimsel Araştırma Projesi (Chongqing Sağlık Komisyonu ve Bilim ve Teknoloji Bürosu'nun ortak projesi) (2022DBXM007), Chongqing Bilimsel Araştırma Enstitüsü'nün performans teşviki ve rehberliği için özel bir proje (cstc2022jxjl120005), Chongqing Doktora Sonrası Bilim Vakfı için özel bir proje (2022CQBSHTB3035), Yong ve Orta Yaşlılar için Chongqing Kıdemli Tıbbi Yetenekler Programı, Chongqing Bilimsel Kurumları Programı (bağımsız araştırma projesi No.2022GDRC015).

....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
chloroformSinopharm Chemical ReagentCo., LtdCAS 67-66-3
ethanolChuandongChemicalCAS 64-17-5
ethyl acetateChuandongChemicalCAS 141-78-6
liquid chromatographWatersACQUITY Class 1 plus
MassLynxWatersV4.2MS control software
n-butyl alcoholChuandongChemicalCAS 71-36-3
petroleum etherChuandongChemicalCAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometryWatersSYNAPT XS
UNIFIWatersData analysis software

Referanslar

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Anahtar Kelimeler Y ksek z n rl kl Tandem K tle SpektrometresiKimyasal Bile enlerGynura Bicolor DCGeleneksel in T bbUPLC Q TOF MS MSPolifenollerFlavonoidlerNumune n lemeVeri lemeFenolik AsitlerEsterlerGlikozitler

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Araştırma

Eğitim

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır