Spettrometria di massa tandem ad alta risoluzione per lo studio dei costituenti chimici della ginenura bicolore DC

Riepilogo

Descriviamo un protocollo generale che integra l'analisi della spettrometria di massa ad alta risoluzione e il docking molecolare nella ricerca sulla medicina tradizionale cinese.

Abstract

La separazione e l'analisi dei componenti chimici desiderati sono argomenti importanti per la ricerca fondamentale della medicina tradizionale cinese (MTC). La cromatografia liquida ad altissime prestazioni con spettrometria di massa tandem a tempo di volo a quadrupolo (UPLC-Q-TOF-MS/MS) è diventata gradualmente una tecnologia leader per l'identificazione degli ingredienti della MTC. Gynura bicolor DC. (BFH), un'erba perenne senza stelo utilizzata per la medicina e il cibo in Cina, ha effetti medicinali come eliminare il calore, inumidire i polmoni, alleviare la tosse, disperdere la stasi e alleviare il gonfiore. I polifenoli e i flavonoidi contengono numerosi isomeri, che ostacolano l'identificazione dei composti complessi nel BFH. Questo articolo presenta un protocollo sistematico per lo studio dei costituenti chimici del BFH basato sull'estrazione con solvente e su dati integrati tramite UPLC-Q-TOF-MS.

Il metodo qui descritto include protocolli sistematici per il pretrattamento dei campioni, la calibrazione MS, l'acquisizione MS, l'elaborazione dei dati e l'analisi dei risultati. Il pretrattamento del campione comprende la raccolta, la pulizia, l'essiccazione, la frantumazione e l'estrazione. La calibrazione MS consiste nella correzione multipunto e a punto singolo. L'elaborazione dei dati include l'importazione dei dati, la definizione del metodo, l'elaborazione dell'analisi e la presentazione dei risultati. In questo articolo vengono presentati i risultati rappresentativi del tipico modello di frammentazione degli acidi fenolici, degli esteri e dei glicosidi nella Gynura bicolor DC. (BFH). Inoltre, vengono discussi in dettaglio la selezione dei solventi organici, l'estrazione, l'integrazione dei dati, la selezione dell'energia di collisione e il miglioramento del metodo. Questo protocollo universale può essere ampiamente utilizzato per identificare composti complessi nella MTC.

Introduzione

La medicina tradizionale cinese (MTC) è stata praticata clinicamente in Cina per migliaia di anni e svolge un ruolo vitale nel mantenimento della salute del popolo cinese¹. La composizione della MTC è varia e complessa e la MTC è stata ampiamente riportata in molti studi qualitativi incentrati sulla composizione chimica². I componenti chimici della MTC possono essere approssimativamente suddivisi nelle seguenti categorie come alcaloidi, acidi organici, fenilpropanoidi, cumarine, lignani, chinoni, flavonoidi, terpenoidi, saponine triterpenoidi, saponine steroidee, glicosidi cardiaci e tan....

Protocollo

1. Pretrattamento del campione

1. Lavare l'intera erba di BFH in acqua pura fino a quando non ci sono depositi visibili e impurità. Mettere il BFH pulito in una pirofila e poi metterlo in forno (Figura 1B). Impostare il forno a 50 °C per 24 ore.
   NOTA: L'intera pianta di BFH è stata raccolta nella provincia del Sichuan, in Cina.
2. Frantumare il BFH essiccato in un frantoio multifunzionale ad alta velocità. Trasferire la polvere grossolana in un setaccio da 50 maglie (Figura 1C). Raccogli la polvere fine in un sacchetto ermetico e conservala i....

Discussione

Oltre al decotto d'acqua¹², l'estrazione con solvente organico è un altro metodo comune di pretrattamento della MTC¹³. Secondo il principio della dissoluzione di fase simile, numerosi componenti sono stati estratti dalla combinazione di vari solventi organici¹⁴. L'estrazione assistita da ultrasuoni è uno dei principali metodi utilizzati per ottenere componenti in TCM¹⁵. L'estrazione con anid.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software