Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מתארים פרוטוקול למיקרוסקופ לוקליזציה של אולטרסאונד (ULM), שמשיג רזולוציה מרחבית של 12.5 מיקרומטר כדי לדמות את המיקרו-כלי דם במוח בחולדות. הוא מאפשר הדמיה מפורטת של כיוון ומהירות זרימת הדם, ומציע כלי רב עוצמה לקידום מחקרים על זרימת המוח והפרעות בכלי הדם.

Abstract

כלי הדם המיקרו-מוחיים יוצרים רשת מורכבת של כלי דם החיוניים לשמירה על תפקוד המוח. מחלות כמו שבץ מוחי, מחלת אלצהיימר, גליומות ודמנציה וסקולרית עלולות לשבש באופן עמוק את המערכת המיקרו-וסקולרית. למרבה הצער, שיטות ההדמיה הרפואיות הנוכחיות מציעות רק תצפיות עקיפות בקנה מידה זה. בהשראת מיקרוסקופיה אופטית, מיקרוסקופ לוקליזציה אולטרסאונד (ULM) מתגבר על הפשרה הקלאסית בין עומק חדירה לרזולוציה מרחבית. על ידי לוקליזציה ומעקב אחר מיקרו-בועות מוזרקות בודדות (MBs) עם דיוק תת-אורכי גל, ניתן ליצור מפות כלי דם ומהירות בקנה מידה מיקרומטרי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול חזק להדמיה ברזולוציה גבוהה של המיקרו-כלי דם במוח in vivo בחולדות באמצעות פלטפורמת אולטרסאונד מסחרית. שיטה זו משיגה רזולוציה מרחבית של 12.5 מיקרומטר, משחזרת את הארכיטקטורה המיקרו-וסקולרית ומספקת מידע מפורט על כיוון ומהירות זרימת הדם, מה שמשפר מאוד את הבנתנו את המיקרו-סירקולציה המוחית. ניתן להרחיב את הפרוטוקול למודלים של מחלות חולדות, ולהציע כלי רב עוצמה לאבחון מוקדם וטיפול במחלות נוירו-וסקולריות.

Introduction

המיקרו-כלי דם במוח, המורכב מנימים, עורקים וורידים, חיוני לשמירה על תפקוד המוח על ידי הקלה על אספקת חומרים מזינים, חילופי חמצן ופינוי פסולת 1,2. שיבושים ברשת זו מעורבים בהפרעות נוירולוגיות כגון שבץ מוחי3, מחלת אלצהיימר4, גליומות5 ודמנציה וסקולרית6, מה שמוביל לליקויים בפיזיולוגיה של המוח. שינויים מיקרו-וסקולריים מקדימים לעתים קרובות את הופעת התסמינים הקליניים, מה שהופך אותם למטרה קריטית להתערבויות אבחנתיות וטיפוליות 7,8. הבנה מקיפה של שינויים בכלי הדם הן ברמה המבנית והן ברמה התפקודית היא המפתח לקידום אסטרטגיות מחקר וטיפול.

עם זאת, הדמיה של כלי הדם המיקרו-מוחיים מאתגרת במיוחד בשל גודלו הקטן ומיקומו העמוק בחלקו בתוך המוח. שיטות הדמיה קונבנציונליות כמו הדמיית תהודה מגנטית (MRI)9 וטומוגרפיה ממוחשבת (CT)10, למרות שהן מתאימות ללכידת שינויים בכלי הדם בקנה מידה גדול, מציעות רזולוציה מרחבית (~100 מיקרומטר) שהיא גסה מדי להדמיית כלי דם קטנים. שיטות אופטיות כמו מיקרוסקופיה דו-פוטונית11 מספקות רזולוציה מרחבית מצוינת (עד 1 מיקרומטר) להדמיית נימים בודדים, אך הן מונעות על ידי שדה ראייה מוגבל ועומק חדירה (פחות מ-1 מ"מ), מה שמגביל את יכולתם לצלם אזורים עמוקים במוח. כטכניקה מבוססת אולטרסאונד, דופלר12, בעוד שהוא מציע הערכת זרימת דם בזמן אמת, נותר מוגבל על ידי רזולוציה של 50-200 מיקרומטר, לא מספיק לפרטים מיקרו-וסקולריים. בסך הכל, אין כיום שיטה אחת העומדת בדרישה הכפולה של רזולוציה מרחבית גבוהה וחדירה מספקת למוח הדרושה להדמיית מיקרו-כלי דם במוח.

בהשראת מיקרוסקופיה אופטית13,14, מיקרוסקופ לוקליזציה אולטראסוני (ULM) מאפשר הדמיה של מבנים עדינים בקנה מידה מיקרוני על ידי איתור מיקרו-בועות בודדות מוזרקות (MBs) ומעקב אחר תזוזתן ברזולוציה של תת-אורך גל15. זה עוקף את הפשרה הקלאסית בין חדירה לרזולוציה בהדמיית אולטרסאונד16. מחקר זה מפרט פרוטוקול חזק ליישום ULM במודל חולדה חיה ובכך מאפשר הדמיה ברזולוציה גבוהה של כלי הדם במוח באמצעות פלטפורמת האולטרסאונד הזמינה מסחרית. הפרוטוקול לא רק מספק שחזור מקיף של המבנה המיקרו-וסקולרי, אלא גם מספק מידע מפורט על כיוון ומהירות זרימת הדם, דבר שאינו אפשרי בטכניקות הדמיה קונבנציונליות. למרות שהפרוטוקול אומת בחולדות רגילות, הוא ניתן להרחבה למודלים של מחלות חולדות, ומציע אפשרויות למחקרים מותאמים אישית במצבים פתולוגיים שונים.

Protocol

כל הניסויים בבעלי חיים המבוצעים בעבודה זו מאושרים על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת פודאן (מספר אישור: 2022JS-004). הפרוטוקול עוקב בקפדנות אחר הנחיות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת פודאן כדי להבטיח יחס הומני לבעלי חיים. לפני תחילת הניסוי, יש לאפשר לחולדות תקופה של שבוע להתאקלמות סביבתית, במהלכה הן מקבלות מספיק מזון ומים. הפוטופריוד מווסת בקפידה בהתאם למקצבים הביולוגיים שלהם כדי להבטיח שמירה על מצבים פיזיולוגיים תקינים. בסיום הניסוי מתבצעת המתת חסד באמצעות מנת יתר של איזופלורן בשאיפה.

הערה: מערך הניסוי מוצג באיור 1A-H.

1. הכנת בעלי חיים להדמיית ULM

  1. הרדמה
    1. לגרום להרדמה בחולדה על ידי מתן תערובת של 3.5% איזופלורן ו-100% חמצן בקצב זרימה של 3 ליטר לדקה. לאחר כ-4 דקות, הוציאו את החיה מהתא והניחו אותה על משטח הדמיה שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס. אשר את עומק ההרדמה על ידי היעדר רפלקס נסיגה על צביטת הבוהן המוצקה של הגפה האחורית של החולדה.
    2. הניחו את אף החולדה במסכת נשימה המחוברת למערכת ההרדמה. שמור על טשטוש יציב על ידי מתן תערובת של 1.5% איזופלורן ו-100% חמצן בקצב זרימה של 1.5 ליטר לדקה.
      הערה: שיטות ומינונים של הרדמה מקפידים על הנחיות היצרן.
  2. הכנת בעלי חיים לפני ניתוח
    1. אבטח את החותכות העליונות של החולדה בחריץ של המוט החותך, ומקם את הלסת התחתונה מתחת למוט. השתמשו בסורגי אוזניים כדי לייצב את ראש החולדה על ידי מיקומם בשקע הגרמי מעט קדמי ומעל תעלת האוזן (ניתן למישוש ביד), מה שמבטיח שכל פני הגולגולת נשארים אופקיים (איור 1A).
    2. בדוק בעדינות את יציבות הקיבוע על ידי הפעלת כמות קטנה של לחץ על חלקים שונים של הראש. ודא שאין תזוזה או החלקה מהמיקום המקורי.
    3. כוונן את גובה פלטפורמת ההדמיה והתאם בקפידה את זווית ראש החולדה על ידי הרמה או הורדה של חריץ המוט החותך כדי להבטיח נשימה ללא הפרעה.
    4. מרחו משחת אריתרומיצין או תמיסת גליצרין 30% על עיני החולדה כדי למנוע נזק מחשיפה ממושכת לאורות כירורגיים וכדי לשמור על לחות העיניים בהרדמה. בנוסף, השתמש בפינצטה עם קצה עגול כדי למשוך בעדינות את לשון החולדה לצד אחד של הפה כדי למנוע חנק במהלך הניתוח.
    5. השתמשו בקוצץ חשמלי ידני וגלחו את ראש החולדה כנגד כיוון צמיחת השיער (מאחור לפנים), בדרך כלל בין האוזניים, מהעיניים ועד לתחילת הצוואר (איור 1B). נקו את האזור המגולח בתמיסת יוד 1% כדי להתכונן לחתך הניתוחי.
  3. קרניוטומיה של חולדות
    1. בצע חתך לאורך התפר הסגיטלי של גולגולת החולדה, החל ממש מאחורי העצם העורפית ונמשך כ -4 ס"מ קדימה. השתמשו בהמוסטטים כדי למשוך את העור משני הצדדים (איור 1C). לחלופין, יש לכרות לחלוטין את העור מעל הגולגולת כדי לספק גישה כירורגית גדולה יותר, אך הדבר עלול להגביר את הסיכון לזיהום.
    2. השתמש במספריים קטנים כדי להסיר את הפריאוסטאום מהגולגולת, תוך חשיפה מלאה של שכבת העצם הקשה.
    3. בצע את הגולגולת באמצעות מקדחה מיני גולגולת ידנית המצוידת במקדח כדורי (איור 1D). התחל עם מקדח גס (קוטר 2.5 מ"מ) והקש בעדינות כדי לשחוק את העצם, החל את המקדחה למשך 2-3 שניות בכל פעם. מתחילים באזור המרכזי ומתקדמים לעבר האזורים העבים יותר בצדדים.
      הערה: דימום מוגזם במהלך קרניוטומיה משפיע על זרימת הדם, וכתוצאה מכך חוסר שחזור כלי דם באזורים בקליפת המוח (איור 1H).
    4. השהה כל 2-3 שניות כדי למנוע התחממות יתר, וכל 2 דקות, הזריק כ-1 מ"ל של 0.9% NaCl לאזור הקידוח באמצעות מזרק כדי לקרר ולשטוף פסולת.
    5. ברגע שרקמת העצם הלבנה כבר לא נראית מחוברת באופן עקבי, עבור למקדח עדין יותר (קוטר 1 מ"מ). המשיכו לקדוח עד שכלי הדם העיקריים המרכזיים נראים בבירור כחום כהה, והאזור שמסביב נראה ורוד, עם מיקרו-כלי דם שנראים מעט אדמדמים (איור 1F).
      הערה: טווח הגולגולת הסופי הוא מברגמה +3 מ"מ עד למבדה קדמית-אחורית ו-7 מ"מ בכל צד לאורך קו האמצע של הגולגולת (איור 1E). לאחר סיום הניתוח, אפשר לחולדה לנוח כ-10 דקות כדי להבטיח תנאים פיזיולוגיים יציבים יחסית לפני תחילת איסוף הנתונים.

2. הגדרה לפני איסוף הנתונים

  1. הכנה והזרקה של חומר ניגוד
    1. יש להמיס את חומר הניגוד (בקבוקון אחד המכיל 59 מ"ג גז SF6 ו-25 מ"ג אבקה ליופילית), לפי ההנחיות הרשמיות, ב-5 מ"ל של 0.9% NaCl. מנערים את התערובת במרץ ליצירת תרחיף MB. הריכוז הסופי של SF6 במתלה הוא 8 μL/mL.
    2. משוך 0.8 מ"ל ממתלה ה-MB למזרק של 1 מ"ל ואבטח אותו למשאבת מיקרו-הזרקה שתוכנתה להחדיר ב-100 מיקרוליטר לדקה.
    3. הכניסו מחט שוכנת 26 גרם עם קטטר המחובר לווריד הזנב של החולדה (איור 1G).
  2. בחירת מישור ההדמיה
    1. התקן בדיקה בתדר מרכזי של 15.625 מגה-הרץ על זרוע המניפולטור של המכשיר הסטריאוטקסי במוח, מצויד במהדק (טווח תנועה: אנכי, אופקי וקדמי-אחורי עד 80 מ"מ; דיוק קריאה: 0.1 מ"מ).
    2. מקם את בדיקת האולטרסאונד ישירות מעל מוח החולדה החשוף. מרחו ג'ל צימוד על משטח המוח החשוף כדי להבטיח העברת אותות אופטימלית.
    3. פתח את הממשק הראשי של התוכנה, המשלב אטלס מוח של חולדה עם תוכניות בקרת תנועה מוטורית.
    4. הגדר את נקודת ברגמה כמקור. ממשק התוכנה מספק תצוגה בזמן אמת של מסלול הגשושית ומיקום פרוסת המוח המתאימה של חולדה. בחר את מישור הדמיית המטרה; לדוגמא, ברגמה -1 מ"מ.

3. איסוף נתונים (תזמון ~ 20 דקות)

הערה: Verasonics (מערכת אולטרסאונד) מספקת את סקריפטי MATLAB המקוריים לשימוש עם מערכת Vantage ולא שונה.

  1. הפעלת תוכנה
    1. הפעל את תוכנת MATLAB 2021a.
    2. הזן את סקריפט רכישת הנתונים ב-MATLAB 2021a.
    3. בספריית הבסיס, הקלד הפעל בחלון שורת הפקודה כדי להפעיל את סביבת זמן הריצה.
  2. תצורת פרמטרים ורכישת אותות RF
    1. הגדר את עומק ההתחלה והסיום של איסוף הנתונים באורכי גל של 5 ו-120 , בהתאמה, כדי ללכוד ביעילות את אזור העניין.
      הערה: יש לבצע התאמות על סמך מישור ההדמיה והחיה הספציפית הנחקרת.
    2. הגדר את זוויות ההיגוי של שידור גל מישור מ-5° ל-5° במרווחים של 2.5° כדי לשפר את רזולוציית התמונה והניגודיות.
      הערה: כוונן הגדרות אלה בהתאם לדרישות ההדמיה הספציפיות ולמאפייני היעד.
    3. הגדר את מתח השידור ל-20 V כדי להבטיח חדירה נאותה ויחס אות לרעש אופטימלי עבור אזור העניין.
    4. לחץ על כפתור ההפעלה כדי להתחיל באיסוף נתונים ולשמור את אותות תדר הרדיו (RF) בפורמט קובץ .mat.
      הערה: התחל באיסוף נתונים 30 שניות לאחר הפעלת משאבת המיקרו-הזרקה כדי להבטיח חלוקת MB אחידה ויציבה בגוף החולדה.

4. עיבוד וניתוח נתונים (תזמון ~ 8 שעות)

  1. עיבוד נתונים
    1. ייבא את נתוני ה-RF ל-MATLAB 2021a ודה-מודולציה שלהם כדי ליצור נתוני פאזה וריבוע (I/Q) (ראה טבלת חומרים).
    2. לחץ על כפתור ההפעלה כדי להשתמש באלגוריתם Delay-and-Sum (DAS) ליצירת אלומה על נתוני I/Q (ראה טבלת חומרים).
      הערה: קצב פריימים לאחר הרכבה של 800 הרץ, עם סה"כ 120,000 פריימים.
  2. הדמיית ULM
    1. החל את אלגוריתם הסינון המרחבי-זמני של פירוק ערך יחיד (SVD)17 על נתוני IQ כדי להסיר רעשי רקע ועומס. כל 800 פריימים מאוחסנים כבלוק נתונים, וסף SVD מוגדר ל-[15, 800].
    2. אתר את המרכז של כל מגה-בייט באמצעות אלגוריתם ההתאמה הגאוסי18.
    3. השתמש באלגוריתם Kuhn-Munkres כדי לעקוב אחר מסלולי MB על פני מסגרות עוקבות על סמך מיקומם (ראה טבלת חומרים).
    4. מפה מסלולי MB על רשת דגימה מוגברת פי 8, באמצעות מפת צבע חמה כדי להציג את מספר מסלולי ה-MB ומפת צבע סילון לקידוד מהירות הזרימה על ידי מיפוי המהירות המחושבת בכל מיקום בתוך המיקרו-כלי דם.
    5. החילו ערכת צבעים מותאמת אישית כדי להבחין בין כיווני זרימה כלפי מעלה וכלפי מטה, והתוצאה היא תמונות ברזולוציה גבוהה לתצוגה חזותית משופרת.
    6. פצלו באופן אקראי את מסלולי ה-MB המקוריים לשתי קבוצות כדי ליצור שתי תת-תמונות, לבצע התמרת פורייה על כל אחת מהן, ולחשב את מתאם טבעת פורייה (FRC) כמתאם המנורמל של הספקטרום שלהם. הגדר את הרזולוציה כהיפוך של התדר המרחבי שבו ה-FRC נופל מתחת לסף19.

תוצאות

איור 1 ממחיש את המערך המפורט להדמיית ULM מיקרו-וסקולרית במוח in vivo בחולדות, כאשר כל אלמנט תוכנן בקפידה כדי למזער את השונות הניסויית ולהבטיח רכישת נתונים מדויקת לתוצאות הדמיה אמינות ברזולוציה גבוהה.

איור 2A מציג את המבנה ה?...

Discussion

פרוטוקול זה השתמש בהצלחה ב-ULM כדי לבצע הדמיה ברזולוציה גבוהה של מיקרו-כלי דם במוח של חולדות in vivo. בהשוואה לשיטות הדמיה אחרות, ULM מתאים בו זמנית הן לרזולוציה מרחבית והן לעומק החדירה. מוח החולדה החשוף צולם ולא דרך הגולגולת, ונמנע הנחתה ועיוות הנגרמים על ידי נוכחות עצם. תחת מת?...

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי תוכנית המחקר והפיתוח הלאומית של סין במסגרת מענק 2023YFC2410903, הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענקים 12274092, 12034005), תוכנית האקספלורר של שנחאי (מענק 21TS1400200), התוכנית הבינלאומית לשיתוף פעולה במדע וטכנולוגיה של שנחאי (מענק 24490710400), וקרן AI למדע של אוניברסיטת פודאן (מענק FudanX24AI016).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AlcoholDICHANGhttps://www.dehsm.com/goods-17187.html75%
Beamforming programInstitute of Biomedical Engineering at the University of MontrealMatlab Ultrasound Toolbox 3.4 version
Body temperature maintenance deviceRWD Life Science Co., Ltd.69026
Brain stereotaxic instrumentRWD Life Science Co., Ltd.71000-RAdaptable to breathing mask
Cranial Microinjection Surgical Instrument KitRWD Life Science Co., Ltd.SP0005-R
Digital microscopeRWD Life Science Co., Ltd.DOM-1001
Drug delivery catheterRWD Life Science Co., Ltd.https://www.rwdls.com/product-solutions/life-sciences/administration/draw-blood
Erythromycin ointmentRenhe PharmaH360200181% x 15 g
Gas anesthesia machineRWD Life Science Co., Ltd.R500IEIncludes breathing mask
Handheld electric clipperGUAZHOUMUMJD-DTJ02
Handheld mini cranial drillRWD Life Science Co., Ltd.78001
Indwelling needleKindly EnterpriseDevelopment Group Co., LTDPositive Pressure Model 26 G
Iodine solutionHYNAUThttps://www.hainuocn.com/index/detail/524.html4.5–5.5 g/L
IQ demodulation programInstitute of Biomedical Engineering at the University of MontrealMatlab Ultrasound Toolbox 3.4 version
IsofluraneRWD Life Science Co., Ltd.R510-22-10
MATLAB softwareMathWorksVersion R2021a
Microinjection pumpRWD Life Science Co., Ltd.R462
Sodium chloride injectionSHENG'AO animals pharmaceutical Co., Ltd.2700714600.90%
SonoVueBraccohttps://www.bracco.com/en-se/product/sonovue
Spherical drill bitRWD Life Science Co., Ltd.HM1027/HM1010
Supporting Positioning SoftwareRWD Life Science Co., Ltd.V2.0.0.30400
SyringeKindly EnterpriseDevelopment Group Co., Ltd.RWLB1 mL
Tracking programJean-Yves Tinevez2016 version
Ultrasound gelJunkang Medical Equipment Co., Ltd.Model DS-1
Ultrasound probeVERASONICS, INC.L22-14vX LF
Verasonics Ultrasound SystemVERASONICS, INC.Vantage-256ultrasound platform

References

  1. Sweeney, M. D., Ayyadurai, S., Zlokovic, B. V. Pericytes of the neurovascular unit: Key functions and signaling pathways. Nat Neurosci. 19 (6), 771-783 (2016).
  2. Wardlaw, J. M., Smith, C., Dichgans, M. Mechanisms of sporadic cerebral small vessel disease: Insights from neuroimaging. Lancet Neurol. 12 (5), 483-497 (2013).
  3. Fang, J., Wang, Z., Miao, C. -. Y. Angiogenesis after ischemic stroke. Acta Pharmacol Sin. 44 (7), 1305-1321 (2023).
  4. Zlokovic, B. V. Neurovascular pathways to neurodegeneration in Alzheimer's disease and other disorders. Nat Rev Neurosci. 12 (12), 723-738 (2011).
  5. Kane, J. R. The role of brain vasculature in glioblastoma. Mol Neurobiol. 56 (9), 6645-6653 (2019).
  6. Iadecola, C. The pathobiology of vascular dementia. Neuron. 80 (4), 844-866 (2013).
  7. Ren, B., et al. Cerebral small vessel disease: Neuroimaging features, biochemical markers, influencing factors, pathological mechanism and treatment. Front Neurol. 13, 843953 (2022).
  8. Bradley, C. P., Berry, C. Microvascular arterial disease of the brain and the heart: A shared pathogenesis. QJM. 116 (10), 829-834 (2023).
  9. Baltes, C., Radzwill, N., Bosshard, S., Marek, D., Rudin, M. Micro MRI of the mouse brain using a novel 400 MHz cryogenic quadrature RF probe. NMR Biomed. 22 (8), 834-842 (2009).
  10. Brancaccio, R., Bettuzzi, M., Morigi, M. P., Casali, F., Ragazzini, L. Image quality and dose assessment in inner ear computed tomography imaging with a flat panel-based system. J Comput Assist Tomogr. 39 (2), 232-239 (2015).
  11. Svoboda, K., Yasuda, R. Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience. Neuron. 50 (6), 823-839 (2006).
  12. Osmanski, B. -. F., et al. Ultrafast Doppler imaging of blood flow dynamics in the myocardium. IEEE T Med Imaging. 31 (8), 1661-1668 (2012).
  13. Rust, M. J., Bates, M., Zhuang, X. Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy (storm). Nat Methods. 3 (10), 793-796 (2006).
  14. Hess, S. T., Girirajan, T. P., Mason, M. D. Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy. Biophys J. 91 (11), 4258-4272 (2006).
  15. Christensen-Jeffries, K., et al. Super-resolution ultrasound imaging. Ultrasound Med Biol. 46 (4), 865-891 (2020).
  16. Couture, O., Hingot, V., Heiles, B., Muleki-Seya, P., Tanter, M. Ultrasound localization microscopy and super-resolution: A state of the art. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 65 (8), 1304-1320 (2018).
  17. Demené, C., et al. Spatiotemporal clutter filtering of ultrafast ultrasound data highly increases Doppler and fUltrasound sensitivity. IEEE Trans Med Imaging. 34 (11), 2271-2285 (2015).
  18. Errico, C., et al. Ultrafast ultrasound localization microscopy for deep super-resolution vascular imaging. Nature. 527 (7579), 499-502 (2015).
  19. Banterle, N., Bui, K. H., Lemke, E. A., Beck, M. Fourier ring correlation as a resolution criterion for super-resolution microscopy. J Struct Biol. 183 (3), 363-367 (2013).
  20. Lowerison, M. R., et al. Super-resolution ultrasound reveals cerebrovascular impairment in a mouse model of Alzheimer's disease. J Neurosci. 44 (9), e1251232024 (2024).
  21. Zhang, G., et al. ULM-MBCNRT: In vivo ultrafast ultrasound localization microscopy by combining multi-branch CNN and recursive transformer. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. , (2024).
  22. Zhang, G., et al. In vivo ultrasound localization microscopy for high-density microbubbles. Ultrasonics. 143, 107410 (2024).
  23. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Lab Anim. 48 (1), 6-14 (2014).
  24. Lenz, C., Rebel, A., Van Ackern, K., Kuschinsky, W., Waschke, K. F. Local cerebral blood flow, local cerebral glucose utilization, and flow-metabolism coupling during sevoflurane versus isoflurane anesthesia in rats. Anesthesiology. 89 (6), 1480-1488 (1998).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE217

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved