Wellcome Trust עבור מימון גישה פתוחה אוניברסיטת אוקספורד. רוברט דיקון הוא חבר בקבוצה OXION אוקספורד, הממומן על ידי Wellcome Trust מענק WT084655MA.

1. מבוא: עכברים וחולדות יהיה בתחילה לצרוך רק כמויות קטנות של מזון רומן. זה נחשב כי הם עלולים הרעלה עקב חוסר יכולתם להקיא. החריג היחיד לכך הוא אם הם נתקלו בעבר חיה אחרת אשר אכלה את המזון, אם הם להריח אותו באוויר נשף מעמיתיהם, הם יוכלו לסווג את זה בתור 13 בטוח. זה בגלל ריח המזון יחד עם פחמן disulphide על 12 נשימה של החולדה אחרים. ואכן, פחמן disulphide עצמו מגביר צריכת המזון בשתי עכברים וחולדות 17. התופעה נקראת &quot;שידור החברתיים של העדפות מזון&quot; והוא יכול לשמש כפרדיגמה למידה פשוט הריח 22. זו דווחה להיות רגישים נגעים של ההיפוקמפוס 3, אך מחקרים אחרים לא הצליחו לשכפל 5 ממצא זה. הוצע כי מערכת cholinergic neocortical, במיוחד את מרכיב orbitofrontal 19 מאי להיות חשוב יותר מאשר מערכת cholinergic בהיפוקמפוס להעברת חברתית. שידור חברתית יש אפילו הוכח לעקוב ליקוי זיכרון אצל חולדות בנות, מתווכת כנראה על ידי CREB ירד (cAMP תגובה אלמנט מחייב חלבון) שידור בהיפוקמפוס בגיל 7. הקלות שבה מכרסמים לרכוש מזון העדפה על ידי העברת חברתית יש השלכות חזקות לבדיקות hyponeophagia. כאשר המחבר היה ביצוע הבדיקה hyponeophagia עם חולדות lesioned ושליטה בהיפוקמפוס, הוא בטעות לשים עכברוש בהיפוקמפוס נבדק (אשר אכלו תירס מתוק) לכלוב של חולדה הבקרה הבא בשל לבדיקה 8. זה אכל בתוך ים 14, שליטה לא רק להיות חביון של 300 s. בזהירות רבה ולכן יש לנקוט כדי למנוע העברת חברתיות כגון ריחות של מזון במהלך הבדיקה hyponeophagia. אם המבחן הראשון hyponeophagia אינה מניבה תוצאה ברורה שאינה משתמעת לשתי פנים, בדיקות נוספות מרובות ניתן לבצע. איורים 1-4 להמחיש דוגמאות של מנגנון שונה. מספר מצבי מבחן זה יכול להיות המציאו מוגבל רק על ידי הדמיון של הנסיין. התוצאות נותחו על ידי ANOVA דו סטרי צעדים חוזרים ונשנים. מאז hyponophagia נתונים היא בדרך כלל משתנה מאוד, לא העומדות הפצה גאוס ו סוטים לעתים קרובות, עם כמה חיות מתן latencies ארוך מאוד, הוא צריך קודם להיות טרנספורמציה, שורש ריבועי או שינוי יומן שימושית במיוחד עבור מקצץ latencies יותר קיצוניים. 2. Apparatus: איורים 1-4 מובאים כדוגמאות מבחן hyponeophagia בחר קופצים. שילובים מסוימים של מזון בסביבה הרומן לא קריטי, אם כי המזון הראו היטב באיור 1 הוא ללא ספק המתאים ביותר המכיל נוזלים, למרות niblet של תירס מתוק יכול להיות גם להציב אותו. באופן כללי, זה רעיון טוב שיש רוב הקומה של המנגנון מכוסה המזון. לא רק בעלי חיים מופיעים למצוא את השטח יוצא דופן מרתיעה, טכניקה זו מבטלת גם בלבול בשל חקירה לפני מציאת מזון. לכן תרופה הרגעה עלולה להופיע anxiogenic כי זה הגדיל את חביון למצוא לאכול את האוכל כי זה מדוכא תנועה, לא כי זה היה anxiogenic. לדוגמה, פרסום אחד מומלץ לשים את האוכל במרכז 2 שדה פתוח. לא רק תוצאה זו חביון האכלה להיות נבוך בזמן גישוש, זה גם מציג פן נוסף של חרדה, דהיינו שדה פתוח סלידה אזור מרכזי, אמצעי קלאסי של חרדה בתחום בתיווך פתוח, אשר היה קשור למנוע סיכון טריפה ב בתי גידול טבעיים 14. עם זאת, במצבים מסוימים זה עשוי בעצם להיות תכונה הרצויה של הניסוי. חיסרון נוסף של הניסוי המתואר 2 היה הפיתיון היה תקן מעבדה הלעיסה במרכז השדה הפתוח. זה החיסרון הכפול כי אין זה רומן, וגם לא טעים מאוד, שלא כמו מזון כגון תירס מתוק או חלב מרוכז ממותק. מצאנו כי תמיד באמצעות פיתיונות של palatability קיצוני לא רק מגדיל את הסכסוך בשאלה אם לאכול או להימנע מזון הרומן, אלא גם החיות לא צריך להיות מוגזם מזון מקופח לפני הבדיקה, רק מחסור מתון הוא הכרחי, ולכן היבט זה הפרוטוקולים המוצגים כאן משקף את &quot;חידוד&quot; היבט של 3Rs של ראסל Burch 20. 2.1 נוהל: מנת המזון של העכברים לילה. הסר את כל המזון קוטף את הכלוב בערב לפני הבדיקה ואז לתת 1 גרם / עכבר של דיאטה רגילה, המהווה כשליש ממה שהם אוכלים בדרך כלל. אם הם הקבוצה שוכנו לוודא כי החלקים הם קטנים, כך שכל העכברים יכולים לאכול בחלקים שווים. מבחן אותםלמחרת בבוקר ולהחליף את האוכל שלהם ברגע בדיקות נגמר. הגדרת הבדיקה שנבחר hyponeophagia המנגנון, גם שורה של כלובים קטנים שבהם העכברים מהכלוב בבית הקבוצה ממוקמים בנפרד לפני ובמהלך בדיקה. (זה ימנע את הגדלת חרדה בעכברים הנותרים שמאל בכלוב הקבוצה, אשר יכול להתרחש אם בהדרגה להסיר העכברים מקבוצה, גם שידור החברתיים של העדפות מזון. כמו כן, מסייע סטנדרטיזציה הבדיקה (בין קבוצת וחיות שוכנו בנפרד) ומבטיח כי בעלי חיים הם ערניים בצורה אופטימלית. המקום עכבר במנגנון הבדיקה. מדוד את חביון לאכול. זה מוגדר לאכול / לשתות ברציפות 2-3 s. לעתים קרובות העכברים יהיה להריח או ללקק את המזון בקצרה בהתחלה, אבל רק מאוחר יותר להתחיל לאכול ברציפות ללא עיכוב. אמצעים אחרים יכולים גם להילקח. השעה בילה אכילה במהלך תקופה מוגדרת, למשל 2 דקות לאחר ההנקה מתחיל הראשון, ואולי גם את כמות המזון הנצרך בתקופה זו, ניתן גם למדוד. נגעים המוח לפעמים להשפיע על אמצעים אלה דיפרנציאלי 4. 2.2 פרטים ספציפיים של הפעלת בדיקה hyponeophagia עם מנגנון שמוצג באיור 1: קנקן פלסטיק שקוף (נפח משוער 1.5 ליטר, קוטר 15 ס&quot;מ עם זרבובית בולטת נוספת 2 ס&quot;מ) הוא מנגנון הבדיקה. השתמש קרם חלב מרוכז ממותק מלא (מותג נסטלה הציפורנים מצוין) 50:50 מדולל במים (כדי להקל על הטיפול בו) כמזון את הרומן. כדי להכיל את העכבר על בסיס ולאפשר חקירה של החלב, במקום כד הפוך עם זרבובית יוצרים גומחה קטנה על האוכל היטב. זו מתמקדת תשומת הלב של העכבר על הבאר את החלב, כדי למזער את ההשפעות של טיפולים שעשויים להשפיע על תפיסת, או נטייה ל, מקור המזון. העכבר ממוקם מול מן הבאר את הכד הוא הוריד בעדינות למקומה, נזהרת שלא מלכודת הזנב של העכבר. חביון מ שיוצבו במנגנון להתחיל לשתות כמו שצריך הוא נלקח. מרחרח את החלב לא נחשבים, שתי שניות לפחות של שתייה אמור להתרחש. ספירת כל boli צואתיים ושים לב כל הטלת שתן (אך מציינים כי הצעדים הללו תושפע הזמן במנגנון). בפעם חתוכים הוא 2 דקות. אם העכבר יש לא שיכור עד אז, להסיר אותו מנגנון הבדיקה עוד אחד או שניים בעכברים, ולאחר מכן לבדוק שוב את אחד נכשל לשתות כ 3 דקות מאוחר יותר. הפעם הוא כנראה האופטימלי עבור רמות החרדה לירידה תוך שמירה על מצב של התרגלות למכשיר. מחזור זה מבחן מנוחה, בדוק שוב, לנוח, בדוק שוב יכול להיות נמשך עד העכבר אוכל או מספר מוגדר של הניסויים בוצעו. מקסימום 3 ניסויים צריך לגרום ביותר לעכברים לשתות מבלי לבצע את הניסוי זמן רב מדי. הפרמטר הבדיקה היא חביון (מצטבר) לשתות. כמו מבחנים אחרים בהם ריח יכול לשחק תפקיד משמעותי, הלא ניסיונית עכברים צריך להיות ממוקם במנגנון לפני תחילת הבדיקה. עקבו פרוטוקול ניקוי סטנדרטי בין כל העכברים. הסר שתן / צואה, יש לנגב את המזון היטב את בסיס פלסטיק עם לח ואחריו בד יבש / רקמות. מילוי המזון היטב עם חלב (כ 0.2 מ&quot;ל, אל שפת הבאר). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. קנקן פלסטיק המקומי המרה לשימוש כיחידה בדיקות hyponeophagia. חלב מרוכז ממותק יכול להיות ממוקם בתוך המזון קטנה הממוקמת היטב בתוך זרבובית, שבו בנוחות מפנה את תשומת הלב של העכבר ישר אליו. המשקל להוביל מודבק לבסיס של כד הפוך מסייעת לייצב אותו כנגד כל תנועה של העכבר על הקירות. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. קאמרית תצפית המכיל שני לבן (מעוררי חרדה) מוסיף לבן לבדיקות hyponeophagia. תירס מתוק יכול לשמש מזון את הרומן. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. נוספת יחידת מבחן hyponeophagia. האוכל הרומן הוא לטפל לערבב קוף. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. נוספת יחידת מבחן hyponeophagia. האוכל המוצג הינו אגוזים קצוצים מעורבים. 3. הרצת מספר רב של ניסויים hyponophagia: המבחן הראשון hyponeophagia לא יכול לתת תוצאה חד משמעית. זה קורה לעתים קרובות, והוא לעתים קרובות בשל (שליטה) ערכי הבסיס להיות גבוה או נמוך מדי, וכתוצאה מכך תופעות תקרה או רצפה. תופעות קומה נתקלו כאשר בדיקות עכברים lesioned בהיפוקמפוס 10, נראה כי ערך השליטה היה צריך להיות גבוה מספיק כדי observדואר מופחת hyponeophagia. זה יכול להיות קשה לשפוט את aversiveness נדרש המצב הבדיקה. אם העכברים נבדקו כבר מספר פעמים (לא בהכרח על משימות הקשורות חרדה) רמת הרגשנות שלהם יהיה נמוך יותר מאשר אם הם na יש בדיקות התנהגותיות מבחן anxiogenic יותר יידרש. זה לעתים קרובות יכול להיות מסופק על ידי הסביבה מבחן גבוהות (כמו איור 4). רעש מרתיעה ניתן להוסיף המצב הבדיקה, למשל רדיו לשחק בווליום רם או מחולל רעש לבן. תאורה בהירה גם להגדיל הסביבה aversiveness הבדיקה. לכן, אם התוצאה הראשונה hyponeophagia אינו משמעותי, נסה כמה מצבים מבחן יותר לבצע ANOVA צעדים חוזרים ונשנים. זהו עיצוב ניסיוני מאוד חזקים. 4. תוצאות צפויות: נגעים בהיפוקמפוס לייצר ירידה חזקה hyponeophagia בעכברים 10 עבודות שלא פורסמו לאחרונה הראו כי זה, כמו החולדה 1, בשל האזור הגחוני של ההיפוקמפוס. עכברים החסרים את למקטע ערוץ KATP Kir6.2 הראו עלייה hyponeophagia במבחן אחד, אבל עוד פחות 9, תוצאה מבלבל אבל אף אחד המשמש את הדגש כי ההבדלים בסביבה הבדיקה יכולה להיות השפעה ניכרת על התוצאה, וגם מצביע על התועלת ביצוע בדיקות מרובות. עכברים 129S2/SvHsd היו hyponeophagic יותר C57BL/6JolaHsd 6. ואכן, השוואה של מספר זנים טהורים עכבר הראה המסומנים הבדלים בין זן 21.

<ol>
	<li>Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P., McHugh, S. B., Deacon, R. M. J., Yee, B. K., Bast, T., Zhang, W. -. N., Pothuizen, H. H. J., Feldon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+dissociations+within+the+hippocampus+-+memory+and+anxiety.">Regional dissociations within the hippocampus - memory and anxiety.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 28, 273-283 (2004).</li><li>Britton, D. R., Thatcher-Britton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+open-field+measure+of+anxiolytic+drug+activity.">A sensitive open-field measure of anxiolytic drug activity.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 15, 577-582 (1981).</li><li>Bunsey, M., Eichenbaum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+damage+to+the+hippocampal+region+blocks+long-term+retention+of+a+natural+and+non-spatial+stimulus-stimulus+association.">Selective damage to the hippocampal region blocks long-term retention of a natural and non-spatial stimulus-stimulus association.</a> Hippocampus. 5, 546-556 (1995).</li><li>Burns-Lindsay, H., Annett, L., Kelley, A. E., Everitt, B. J., Robbins, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+lesions+to+amygdala,+ventral+subiculum,+medial+prefrontal+cortex,+and+nucleus+accumbens+on+the+reaction+to+novelty:+Implication+for+limbic-striatal+interactions.">Effects of lesions to amygdala, ventral subiculum, medial prefrontal cortex, and nucleus accumbens on the reaction to novelty: Implication for limbic-striatal interactions.</a> Behav. Neurosci. 110, 60-73 (1996).</li><li>Burton, S., Murphy, D., Qureshi, U., Sutton, P., O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Lesions+of+Hippocampus+and+Subiculum+Do+Not+Produce+Deficits+in+a+Nonspatial+Social+Olfactory.">Combined Lesions of Hippocampus and Subiculum Do Not Produce Deficits in a Nonspatial Social Olfactory.</a> J. Neurosci. 20, 5468-5475 (2000).</li><li>Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+129S2/SvHsd+and+C57BL/6JOlaHsd+mice+on+a+test+battery+assessing+sensorimotor,+affective+and+cognitive+behaviours:+implications+for+the+study+of+genetically+modified+mice.">A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice.</a> Behav. Brain Res. 124, 33-46 (2001).</li><li>Countryman, R. A., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+forgetting+of+social+transmission+of+food+preferences+in+aged+rats:+Relationship+to+hippocampal+CREB+activation.">Rapid forgetting of social transmission of food preferences in aged rats: Relationship to hippocampal CREB activation.</a> Learn. Mem. 14, 350-358 (2007).</li><li>Deacon, R. M. J., Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiolytic+effects+of+cytotoxic+hippocampal+lesions+in+rats.">Anxiolytic effects of cytotoxic hippocampal lesions in rats.</a> Behavioral Neuroscience. 116, 494-497 (2002).</li><li>Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+phenotyping+of+mice+lacking+the+KATP+channel+subunit+Kir6.2.">Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2.</a> Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).</li><li>Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+cytotoxic+lesion+effects+on+species-typical+behaviors+in+mice.">Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice.</a> Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).</li><li>File, S. E., Elliot, J. M., Heal, D. J., Marsden, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+detection+of+anxiolytic+action.">Behavioural detection of anxiolytic action.</a> Experimental approaches to anxiety and depression. , 25-44 (1992).</li><li>Galef, B. G., Mason, J. R., Preti, G., Bean, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+disulfide:+A+semiochemical+mediating+socially-induced+diet+choice+in+rats.">Carbon disulfide: A semiochemical mediating socially-induced diet choice in rats.</a> Physiol. Behav. 42, 119-124 (1988).</li><li>Glickman, S. E., Morrison, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+behavioral+and+neural+correlates+of+predation+susceptibility+in+mice.">Some behavioral and neural correlates of predation susceptibility in mice.</a> Commun. Behav. Biol. A. 4, 261-267 (1969).</li><li>Gray, J. A., McNaughton, N., N, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neuropsychology of anxiety. , (2000).</li><li>Holmes, A., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+exposure+to+the+elevated+plus-maze+sensitizes+mice+to+the+acute+behavioral+effects+of+fluoxetine+and+phenelzine.">Prior exposure to the elevated plus-maze sensitizes mice to the acute behavioral effects of fluoxetine and phenelzine.</a> Eur. J. Pharmacol. 459, 221-230 (2003).</li><li>Mason, J. R., Bean, N. J., Bennett, G., Galef, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attractiveness+of+carbon+disulfide+to+wild+Norway+rats.">Attractiveness of carbon disulfide to wild Norway rats.</a> Proceedings of the Thirteenth Vertebrate Pest Conference. , 94-97 (1988).</li><li>Ramos, A., Berton, O., Mormede, P., Chauloff, F., F, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multipletest+study+of+anxiety-related+behaviours+in+six+inbred+rat+strains.">A multipletest study of anxiety-related behaviours in six inbred rat strains.</a> Behav. Brain Res. 85, 57-69 (1997).</li><li>Ross, R. S., McGaughy, J., Eichenbaum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholine+in+the+orbitofrontal+cortex+is+necessary+for+the+acquisition+of+a+socially+transmitted+food+preference.">Acetylcholine in the orbitofrontal cortex is necessary for the acquisition of a socially transmitted food preference.</a> Learn. Mem.. 12, 302-306 (2005).</li><li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The principles of humane experimental technique. , (1959).</li><li>Trullas, R., Skolnick, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+fear+motivated+behaviors+among+inbred+mouse+strains.">Differences in fear motivated behaviors among inbred mouse strains.</a> Psychopharmacology. 111, 323-331 (1993).</li><li>Wrenn, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+Transmission+of+Food+Preference+in+Mice.">Social Transmission of Food Preference in Mice.</a> Curr. Prot. Neurosci. , (2004).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הדמויות חביון בבדיקת hyponeophagia הם בדרך כלל משתנה מאוד. הטכניקה המתוארת כאן, של הטלת פרק זמן שנקבע בעלי חיים כדי לאכול, אז retesting מאוחר יותר אם היא לא מצליחה לאכול, משמש כדי למזער את הסיכון של אולטרה ארוך latencies וחוסך את זמן הניסוי. אחד היתרונות של hyponeophagia על בדיקות חרדה כמו מבוך פלוס, היא שאם תוצאות הבדיקה הראשונה לא מצליחים להשיג מובהקות סטטיסטית, מבחן נוסף ניתן להפעיל באמצעות רומן שונים בסביבת מבחן ומזון, כאל סוג של חרדה הנמדדים נראה אותו דבר ולא שינה איכותית על ידי בדיקות ריצה בעבר, שלא כמו ב-במבוך פלוס 16. צעדים חוזרים ונשנים ANOVA לאחר מכן ניתן להשתמש כדי להעריך את סדרת הבדיקה. כיום ידוע כי היבטים שונים של רגשנות מכוסים על ידי &quot;חרדה&quot; מונח מטריה 11,15,18. עכברים מראה שינויים hyponeophagia לא בהכרח להראות שינויים בשדה פתוח, מוגבה פלוס מבוך אור או חושך בדיקות קופסה. אז את מערכות המוח הבסיסית הביצועים במבחנים אלה חייב להיות לפחות שונה במקצת. לדוגמה, ההיפותלמוס אמיגדלה עשויים להשתתף hyponeophagia כפי שהם עוסקים (בין השאר) ויסות צריכת המזון.

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

לפני היום, כאשר נברנים מהיר משחק חזק כמו אלפא chloralose עדיין לא היו בשימוש, עבודתם של בקרי הדברה הכביד לעתים קרובות על ידי תופעה המכונה &quot;ביישנות הפיתיון&quot;. עכברים וחולדות לא יכול להקיא, בגלל אטימות של הלב הסוגר של הקיבה, ולכן כדי להתגבר על בעיה של הרעלת מזון פוטנציאל הם פיתחו אסטרטגיה של הראשון בליעת רק כמויות קטנות מאוד של חומרים חדשים. הסכומים לבלוע ואז להעלות בהדרגה עד שהחיה קבעה אם החומר הוא בטוח ומזין. אז הישן לוכדי עכברושים תחילה לשים חומר טעים כגון שיבולת שועל, אשר היה אמור להיות רכב עבור הרעלן, באזור שורץ. רק כאשר כמויות גדולות היו להישרף בקלות הם היו ולאחר מכן להוסיף את הרעל, בסכומים לא מחושב כדי להשפיע על הטעם של הרכב. פיתיון מורעל, אשר בעלי החיים היו עכשיו בקלות אכילה בכמויות גדולות, היה אז במהירות לבצע את תפקידו. ביישנות פיתיון זה משמש כיום כאמצעי למדידת חרדה במעבדה התנהגותיות. חומר טעים מאוד אבל הרומן, כגון תירס, אגוזי מתוק או חלב מרוכז ממותק, מוצע העכברים (או חולדות) במצב הרומן, כמו כלוב חדש. חביון לצרוך כמות מוגדרת של מזון החדש נמדד אז. רוברט MJ דיקון ניתן להגיע בשעה <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

Watch this Scientific Journal Video about Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse at JoVE.com

Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

עכברים וחולדות, בשל הזהירות הטבעית שלהם, הם בתחילה איטית לצרוך מזון רומן, במיוחד במקום רומן. Hyponeophagia זה יכול בקלות למדוד במעבדה, למרות בחיות מעבדה הם הרבה פחות חרדים מאשר עמיתיהם בטבע שלהם

Hyponeophagia: מידה של חרדה העכבר

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

hyponeophagia-a-measure-of-anxiety-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.8K Views.  University of Oxford. עכברים וחולדות, בשל הזהירות הטבעית שלהם, הם בתחילה איטית לצרוך מזון רומן, במיוחד במקום רומן. Hyponeophagia זה יכול בקלות למדוד במעבדה, למרות בחיות מעבדה הם הרבה פחות חרדים מאשר עמיתיהם בטבע שלהם

Video: Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

דרך פשוטה למדוד את רגישות אתנול זבובים

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

כימות של פעילות Cis-Regulatory אלמנטים ברשתית עכבר ידי electroporation Explant

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

עכבר בכפייה לשחות מבחן

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

תגובת Optokinetic כמדד כמותי של חדות ראייה בדג הזברה

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various neurological deficits. The current ex vivo live imaging of motile ependymal cilia technique allows for a detailed study of ciliary dynamics following several steps. These steps include: mice euthanasia with carbon dioxide according to protocols of The University of Toledo&#8217;s Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC); craniectomy followed by brain removal and sagittal brain dissection with a vibratome or sharp blade to obtain very thin sections through the brain lateral ventricles, where the ependymal cilia can be visualized. Incubation of the brain&#8217;s slices in a customized glass-bottom plate containing Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)/High-Glucose at 37 &#176;C in the presence of 95%/5% O2/CO2 mixture is essential to keep the tissue alive during the experiment. A video of the cilia beating is then recorded using a high-resolution differential interference contrast microscope. The video is then analyzed frame by frame to calculate the ciliary beating frequency. This allows distinct classification of the ependymal cells into three categories or types based on their ciliary beating frequency and angle. Furthermore, this technique allows the use of high-speed fluorescence imaging analysis to characterize the unique intracellular calcium oscillation properties of ependymal cells as well as the effect of pharmacological agents on the calcium oscillations and the ciliary beating frequency. In addition, this technique is suitable for immunofluorescence imaging for ciliary structure and ciliary protein localization studies. This is particularly important in disease diagnosis and phenotype studies. The main limitation of the technique is attributed to the decrease in live motile cilia movement as the brain tissue starts to die.

Using high-resolution differential interference contrast (DIC) microscopy, an ex vivo observation of the beating of motile ependymal cilia located within the mouse brain ventricles is demonstrated by live-imaging. The technique allows a recording of the unique ciliary beating frequency and beating angle as well as their intracellular calcium oscillation pacing properties.

הדמיה חיה של צילה Ependymal בחדרים לרוחב של מוח העכבר

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי Enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

Assay למדוד Nucleocytoplasmic התחבורה בזמן אמת בתוך מוטורי נוירון כמו NSC-34 תאים

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

הכוח של מרווח Interstimulus להערכה של זמני עיבוד בחולדות

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...