Wellcome Trust para a concessão de financiamento de Acesso Livre na Universidade de Oxford. Robert Deacon é um membro do grupo de Oxford OXION, financiado pelo Wellcome Trust conceder WT084655MA.

1. Introdução: Camundongos e ratos, inicialmente consumir apenas pequenas quantidades de um novo alimento. Isto é pensado para ser, porque são susceptíveis de envenenamento devido à sua incapacidade de vomitar. A única exceção a isso é se eles já se deparou com outro animal que tenha comido esse alimento; se sentir o cheiro no ar exalado de seus pares, eles vão classificá-lo como 13 seguro. Isto é porque o odor dos alimentos está emparelhado com dissulfeto de carbono em 12 o rato do outro fôlego. De fato, dissulfeto de carbono por si só aumenta o consumo de alimentos em ambos os ratos e camundongos 17. O fenômeno é chamado de &quot;transmissão social das preferências alimentares&quot; e pode ser usado como um paradigma de aprendizagem simples olfativo 22. Isto foi relatado para ser sensíveis às lesões do hipocampo 3, mas outros estudos não conseguiram replicar 5 este achado. Tem sido sugerido que o sistema colinérgico neocortical, particularmente a componente orbitofrontal 19 de maio ser mais importante do que o sistema colinérgico do hipocampo para a transmissão social. Transmissão social foi mostrado mesmo para monitorar perda de memória em ratos idosos, provavelmente mediada por CREB diminuiu (cAMP-resposta proteína elemento de ligação) de transmissão no hipocampo de 7. A facilidade com que os roedores adquirir uma preferência alimentar por transmissão social tem fortes implicações para os testes hyponeophagia. Quando o autor estava realizando um teste com hyponeophagia hipocampo ratos lesados ​​e controle, ele acidentalmente colocou um rato testado hipocampo (que tinha comido o milho doce) na gaiola do rato próximo controle devido para o teste 8. Ele comeu dentro de 14 s, não o controle só para ter uma latência de 300 s. Grande cuidado deve ser tomado para evitar a transmissão social, de odores de alimentos durante os testes hyponeophagia. Se o teste hyponeophagia primeira não resultar em um resultado claro e inequívoco, vários outros testes podem ser realizados. Figuras 1-4 ilustram exemplos de aparelhos diferentes. O número de situações de teste que podem ser criados é limitado apenas pela imaginação do experimentador. Resultados são analisados ​​por ANOVA medidas repetidas. Desde hyponophagia dados geralmente é muito variável, não conformes a distribuição de Gauss e, muitas vezes distorcida, com alguns animais dando latências muito tempo, ele deve primeiro ser transformado; uma raiz quadrada ou transformação log é particularmente útil para truncar as latências mais extremas. 2. Aparelhos: Figuras 1-4 são apresentados como exemplos de hyponeophagia teste set-ups. As combinações específicas de novos alimentos e meio ambiente não são críticos, embora a comida bem mostrado na Figura 1 é, obviamente, mais adequada para conter líquidos, embora um niblet de milho doce também pode ser colocado nela. Em geral, é uma boa idéia ter a maior parte do chão do aparelho coberto com a comida. Não só os animais parecem encontrar esta superfície incomum aversivo, esta técnica também elimina confunde devido à exploração antes de encontrar o alimento. Assim, uma droga sedativa podem aparecer ansiogênicas porque aumentou a latência para encontrar e comer a comida porque deprimido locomoção, não porque era ansiogênicas. Por exemplo, uma publicação aconselhou colocar o alimento no centro de um campo aberto 2. Não só este resultado na latência de alimentação sendo confundidos por exploratória tempo, ela também apresenta uma faceta adicional de ansiedade, abra a aversão ao campo ou seja, área central, uma medida clássica de ansiedade campo mediada aberto, o que tem sido relacionado para evitar risco de predação em habitats naturais 14. No entanto, em algumas situações isso pode realmente ser uma característica desejada do experimento. Outra desvantagem do experimento descrito no 2 foi que a isca era padrão laboratório comida no centro do campo aberto. Isto tem a desvantagem dupla que não é romance, e também não é extremamente palatável, ao contrário de alimentos como o milho doce ou leite condensado. Temos sempre achei que o uso de iscas de palatabilidade extrema não só aumenta o conflito sobre se a comer ou evitar o alimento, mas também os animais não precisam ser excessivamente privados de alimentos antes do teste, apenas a privação leve é ​​necessário, para esse aspecto dos protocolos aqui apresentados reflete o &quot;Requinte&quot; aspecto dos 3Rs de Russell e Burch 20. 2,1 procedimento: Ração dos ratos durante a noite. Remova toda a comida da tremonha gaiola à noite antes de testar em seguida, dar 1 g / mouse da dieta comum, que é aproximadamente um terço do que normalmente comem. Se eles estão alojados em grupo se certificar de que as peças são pequenas, para que todos os ratos podem comer partes iguais. Testá-losna manhã seguinte e substituir seus alimentos, assim como o teste está terminado. Configurar o aparelho de teste escolhido hyponeophagia, também uma fileira de pequenas gaiolas em que os ratos da gaiola grupo são colocados individualmente, antes e durante o teste. (Isso evita o aumento da ansiedade em camundongos remanescente na gaiola grupo, que pode ocorrer se você eliminar progressivamente os ratos a partir de um grupo, também transmissão social das preferências alimentares. Também auxilia na normalização do teste (entre o grupo e os animais alojados individualmente) e garante que os animais são perfeitamente alerta. Coloque o mouse em um aparelho de teste. Medir a latência para comer. Esta é definida como comer / beber continuamente por 2-3 s. Muitas vezes, os ratos vão cheirar ou lamber o alimento brevemente no início, mas só depois começar a comer continuamente, sem inibição. Outras medidas também podem ser tomadas. O tempo gasto comer durante um determinado período, por exemplo, 2 min após a alimentação começa a primeira, e possivelmente também a quantidade de alimentos consumidos durante este período, também pode ser medido. Lesões cerebrais às vezes afetar estas medidas diferencialmente 4. 2,2 Os detalhes específicos de execução de um teste hyponeophagia com o aparelho mostrado na Figura 1: Um jarro de plástico translúcido (aproximado do volume de 1,5 l, 15 cm de diâmetro com um bico protuberante mais 2 cm) é o aparelho de teste. Use creme cheio de leite condensado (Nestlé marca Carnation é excelente) 50:50 diluído com água (para facilitar a manuseá-lo) como o novo alimento. Para conter o mouse sobre a base e facilitar a investigação do leite, coloque o jarro de cabeça para baixo com o bico formando uma pequena alcova sobre o alimento bem. Este centra a atenção do mouse sobre o bem eo leite, assim minimizar os efeitos de tratamentos que podem afetar a percepção de, ou orientação para a fonte de alimento. O mouse é colocado de costas para o bem e o jarro é suavemente abaixado em posição, tomando o cuidado para não prender o rabo do rato. A latência de ser colocado no aparelho para iniciar corretamente beber é tomada. Cheira a leite não contam, pelo menos dois segundos de beber deve ocorrer. Contar qualquer boli fecal e observe qualquer micção (mas note que estas medidas serão influenciadas pelo tempo no aparelho). O tempo de corte é de 2 min. Se um rato não tem bebido até então, retire-o do aparelho e testar mais um ou dois camundongos, teste novamente aquele que não beber cerca de 3 min mais tarde. Este tempo é, provavelmente, ideal para os níveis de ansiedade para diminuir ainda preservar um estado de habituação ao aparelho. Este ciclo de teste-reteste de descanso descanso-reteste pode ser continuado até que o rato come ou um determinado número de ensaios foram realizados. Um máximo de três ensaios deve resultar em mais ratos beber sem fazer a experiência muito longa. O parâmetro de teste é a latência (cumulativos) para beber. Como em outros testes onde o odor poderia desempenhar um papel significativo, não-experimental ratos deve ser colocado no aparelho antes do início do teste. Seguir um protocolo de limpeza padronizada entre todos os ratos. Remover urina / fezes, limpe bem os alimentos e da base de plástico com úmido seguido de pano seco / tecido. Recarga de alimentos do bem com o leite (cerca de 0,2 ml, até a borda do poço). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Um jarro de plástico doméstico convertidos para uso como uma unidade de teste hyponeophagia. Leite condensado pode ser colocado na comida pequeno bem localizado no interior do bico, que, convenientemente, direciona a atenção do mouse diretamente para ele. O peso de chumbo colado à base invertida do jarro ajuda a estabilizá-lo contra qualquer movimento do mouse contra as paredes. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Uma câmara de observação contendo duas brancas (que provoca ansiedade) insere branco para testar hyponeophagia. Milho doce pode ser usado como alimento. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Outra unidade de teste hyponeophagia. O alimento é misturar tratar macaco. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="Figura 4"/> Figura 4. Outra unidade de teste hyponeophagia. A comida apresentada é misturado nozes picadas. 3. Execução de experiências múltiplas hyponophagia: O teste hyponeophagia primeira não pode fornecer um resultado inequívoco. Isto acontece muitas vezes e é frequentemente devido à linha de base (controle) os valores serem muito altos ou baixos, resultando em efeitos de teto ou no chão. Efeitos de fundo foram encontrados quando testes hipocampo ratos lesados ​​10; parecia que o valor de controle tiveram que ser suficientemente alta para observávele redução hyponeophagia. Pode ser difícil para julgar a aversão exigido da situação de teste. Se os ratos foram testados várias vezes já (não necessariamente sobre a ansiedade relacionada com tarefas) o seu nível de emotividade será menor do que se eles são ingênuos para comportamentais testes e um teste mais ansiogênicas será necessária. Isso muitas vezes pode ser prestada por um ambiente de teste elevados (como na Figura 4). Ruído aversivo poderia ser acrescentado à situação de teste, por exemplo, um rádio tocando em um volume alto ou um gerador de ruído branco. Iluminação mais brilhante também aumentaria aversão ambiente de teste. Assim, se o resultado hyponeophagia primeiro não é significativo, tente mais diversas situações de teste e realizar uma ANOVA de medidas repetidas. Este é um projeto muito poderoso experimental. 4. Resultados esperados: As lesões do hipocampo produzem um forte decréscimo hyponeophagia em camundongos 10 e trabalhos inéditos recente tem mostrado que este é, como em ratos 1, devido à região ventral do hipocampo. Camundongos sem a subunidade do canal KATP Kir6.2 mostraram aumento hyponeophagia em um teste, mas menos em outro 9, um resultado confuso, mas uma que serve para enfatizar que as diferenças no ambiente de teste pode ter um efeito significativo sobre o resultado, e também aponta a utilidade de realizar múltiplos testes. 129S2/SvHsd ratos eram mais do que hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. De fato, uma comparação de várias linhagens de camundongos mostrou puras marcada inter-tensão diferenças 21.

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Não há conflitos de interesse declarados.

Os números da latência nos testes hyponeophagia são tipicamente altamente variável. A técnica descrita aqui, de impor um período de tempo definido para o animal para comer, então novos testes mais tarde, se ele não consegue comer, serve para minimizar o risco de ultra-longa latências e economiza o tempo experimentador. Uma vantagem de hyponeophagia sobre testes de ansiedade, como o labirinto, é que se os resultados do primeiro teste não atingiu significância estatística, outro teste pode ser executado usando um ambiente de teste diferentes romance e comida, como o tipo de ansiedade que está sendo medido parece ser o mesmo e não mudou qualitativamente pelos testes executados anteriormente, ao contrário do labirinto 16. Medidas repetidas ANOVA pode então ser usada para avaliar a série de testes. Sabe-se agora que vários aspectos diferentes de emotividade são cobertos pela &quot;ansiedade&quot; guarda-chuva prazo 11,15,18. Camundongos mostrando mudanças na hyponeophagia não necessariamente mostram mudanças em campo aberto, labirinto em cruz elevado ou testes de claro-escuro caixa. Assim, os sistemas cerebrais subjacentes desempenho nos testes deve ser de pelo menos um pouco diferente. Por exemplo, o hipotálamo ea amígdala podem muito bem participar hyponeophagia como eles estão preocupados com (entre outras coisas) a regulação da ingestão de alimentos.

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

Antes do dia de hoje, quando raticidas de ação rápida e potente, como alfa-Cloralose ainda não estavam em uso, o trabalho dos controladores de pragas foi muitas vezes dificultada por um fenômeno conhecido como &quot;timidez isca&quot;. Camundongos e ratos não pode vomitar, devido ao aperto do esfíncter cardíaco do estômago, de modo a superar o problema da toxicidade de alimentos potencial que eles têm desenvolvido uma estratégia de primeira ingerir apenas quantidades muito pequenas de substâncias novas. As quantidades ingeridas, em seguida, aumentar gradualmente até que o animal tenha determinado se a substância é segura e nutritiva. Então o velho caçadores de ratos em primeiro lugar colocar uma substância palatável como aveia, que era para ser o veículo para a toxina, na área infestada. Somente quando grandes quantidades estavam sendo consumidas prontamente que eles em seguida, adicione o veneno, em quantidades calculadas para não afetar o sabor do veículo. A isca envenenada, que os animais foram agora prontamente comer em grandes quantidades, então rapidamente executar sua função. Timidez isca é usado agora no laboratório de comportamento como uma forma de medir a ansiedade. A substância altamente palatável, mas novela, como o milho doce de frutas ou leite condensado, é oferecido a todos os ratos (ou animais) em uma situação nova, como uma nova gaiola. A latência de consumir uma quantidade definida de o novo alimento é, então, medido. Robert MJ Deacon pode chegar a <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

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Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Camundongos e ratos, devido à sua prudência inata, são inicialmente lento em consumir um alimento novo, particularmente em um lugar novo. Este hyponeophagia podem ser facilmente medidos em laboratório, apesar de animais de laboratório são muito menos ansiosos do que suas contrapartes selvagens

Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

hyponeophagia-a-measure-of-anxiety-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.8K visualizações.  University of Oxford. Camundongos e ratos, devido à sua prudência inata, são inicialmente lento em consumir um alimento novo, particularmente em um lugar novo. Este hyponeophagia podem ser facilmente medidos em laboratório, apesar de animais de laboratório são muito menos ansiosos do que suas contrapartes selvagens

Vídeo: Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

Uma maneira simples para medir a sensibilidade de etanol no Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Neurociência

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

Quantificar a atividade de Cis Elements-Regulação na retina do rato por Eletroporação Remoção

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

A dupla Tracer PET-MRI Protocolo para a medida quantitativa da Regional cérebro substratos energéticos Captação no Rato

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

A resposta optocinético como uma medida quantitativa da acuidade visual em Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer&#039;s Mouse Models

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

Utilizando biossensores baseados em Enzyme medir Tonic e Phasic glutamato na doença de Alzheimer rato Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

Ensaio para Medir o Transporte Nucleocitoplasmático em Tempo Real dentro de Células NSC-34 do tipo Motor-Neuron

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

O poder do intervalo de Interstimulus para a avaliação do processamento Temporal em roedores

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

Ensaio mecânico de prevenção de conflitos para medir o comportamento da dor em camundongos

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Social Isolation Model: A Noninvasive Rodent Model of Stress and Anxiety

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of patients achieve full remission. A critical step in developing a novel anxiolytic is to develop and utilize an animal model, such as mice, to study pathological changes and test drug target(s), efficacy, and safety. Current approaches include genetic manipulation, chronic administration of anxiety-inducing molecules, or the administration of environmental stress. These methods, however, may not realistically reflect anxiety induced throughout daily life. This protocol describes a novel anxiety model, which mimics the intentional or unintentional patterns of social isolation in modern life. The social isolation-induced anxiety model minimizes perceived distractions and invasiveness and utilizes wild type C57BL/6 mice. In this protocol, 6- to 8-week-old mice (male and female) are singly housed in opaque cages to visually block the external environment, such as neighboring mice, for 4 weeks. No environmental enrichments (such as toys) are provided, bedding material is reduced by 50%, any treatment of drug is administered as an agar form, and the exposure/handling of the mice is minimized. Socially isolated mice generated using this protocol exhibit greater anxiety-like behavior, aggression,&#160;as well as decreased cognition.

Presented here is a social isolation (SI)-induced anxiety mouse model that utilizes wild type C56BL/6J mice to induce stress and anxiety-like behavior with minimal handling and no invasive procedures. This model reflects modern life patterns of social isolation and is ideal for studying anxiety and related disorders.

Modelo de Isolamento Social: Um Modelo de Roedores Não Invasivo de Estresse e Ansiedade

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of ...