Wellcome Trust per il finanziamento Open Access all&#39;Università di Oxford. Robert Deacon è un membro del gruppo di Oxford OXION, finanziato dal Wellcome Trust concedere WT084655MA.

1. Introduzione: Topi e ratti inizialmente consumare solo piccole quantità di un nuovo prodotto alimentare. Questo è pensato per essere quanto sono suscettibili di avvelenamento a causa della loro incapacità di vomitare. L&#39;unica eccezione a questa è se hanno incontrato in precedenza un altro animale che ha mangiato quel cibo, se l&#39;odore per l&#39;aria espirata dai loro coetanei, che lo classificano come sicuro 13. Questo perché l&#39;odore di cibo è accoppiato con solfuro di carbonio, il 12 respiro del ratto altri. Infatti, disolfuro di carbonio si aumenta il consumo di cibo sia in topi e ratti 17. Il fenomeno è chiamato &quot;trasmissione sociale delle preferenze alimentari&quot; e può essere usato come paradigma di semplice apprendimento olfattivo 22. Questo è stato segnalato per essere sensibili alle lesioni dell&#39;ippocampo 3, ma gli studi altri 5 non è riuscito a replicare questi risultati. È stato suggerito che il sistema colinergico neocorticale, in particolare la componente orbitofrontale 19 possono non essere più importante del sistema colinergico dell&#39;ippocampo per la trasmissione sociale. Trasmissione sociale ha anche dimostrato di tenere traccia compromissione della memoria in ratti anziani, probabilmente mediato da diminuito CREB (cAMP-response element-binding protein), la trasmissione nell&#39;ippocampo di età compresa tra 7. La facilità con cui i roditori acquisire una preferenza alimentare, la trasmissione sociale ha forti implicazioni per i test hyponeophagia. Quando l&#39;autore stava effettuando un test con hyponeophagia dell&#39;ippocampo ratti lesionati e controllo, ha accidentalmente messo un topo testato ippocampo (che aveva mangiato il mais dolce) nella gabbia del topo controllo successivo dovuta per il test 8. Si mangiava entro 14 s, il controllo non solo di avere una latenza di 300 s. Grande attenzione deve quindi essere adottate per prevenire tale trasmissione sociale degli odori degli alimenti durante i test hyponeophagia. Se il primo test hyponeophagia non si traduca in una chiara e determinata in modo univoco, più ulteriori prove possono essere eseguite. Figure 1-4 illustrano esempi di apparecchi diversi. Il numero di casi di test che può essere elaborata è limitato solo dalla fantasia dello sperimentatore. I risultati sono analizzati da due vie ANOVA a misure ripetute. Dal momento che hyponophagia dati è in genere molto variabile, non conforme ad una distribuzione gaussiana e spesso asimmetrica, con alcuni animali dando latenze molto lungo, deve prima essere trasformato, una radice quadrata o trasformazione logaritmica è particolarmente utile per troncare le latenze più estreme. 2. Apparecchi: Figure 1-4 sono presentati come esempi di prova hyponeophagia set-up. Le combinazioni specifiche dei nuovi prodotti alimentari e ambiente non sono critiche, anche se il cibo ben mostrato nella Figura 1 è ovviamente più adatto a contenere liquidi, anche se un niblet di granturco poteva anche essere collocato in esso. In generale, è una buona idea avere la maggior parte del pavimento della apparecchi che sono contemplati con il cibo. Non solo gli animali sembrano trovare questa superficie insolita avversione, questa tecnica elimina anche confonde a causa di esplorazione prima di trovare il cibo. Così un farmaco sedativo potrebbe apparire ansiogeno perché ha aumentato la latenza per trovare e mangiare il cibo perché depresso locomozione, non perché è stato ansiogeno. Per esempio, una pubblicazione consigliato mettere il cibo al centro di un campo aperto 2. Non solo questo risultato nella latenza alimentazione viene confusa da esplorativa volta, introduce anche un aspetto ulteriore di ansia, cioè aperta avversione zona campo centrale, una misura classica di campo aperto-mediata ansia, che è stata correlata ad evitare il rischio di predazione habitat naturali 14. Tuttavia, in alcuni casi questo potrebbe effettivamente essere una caratteristica voluta dell&#39;esperimento. Un altro svantaggio di questo esperimento descritto al punto 2 è che l&#39;esca era standard di laboratorio cibo al centro del campo aperto. Questo ha il duplice svantaggio che non è romanzo, e inoltre non è molto appetibile, a differenza di alimenti come il mais dolce o latte condensato. Abbiamo sempre trovato che l&#39;uso di esche di estrema appetibilità non solo aumenta il conflitto se mangiare o evitare il nuovo prodotto alimentare, ma anche gli animali non hanno bisogno di essere troppo cibo privato prima del test, solo privazione mite è necessario, quindi questo aspetto dei protocolli qui presentata riflette l&#39;aspetto &quot;raffinatezza&quot; delle 3R di Russell e Burch 20. 2.1 Procedura: Razionare il cibo dei topi durante la notte. Rimuovere tutti gli alimenti dalla tramoggia gabbia la sera prima del test poi dare 1 g / mouse di dieta ordinaria, che è circa un terzo di quello che normalmente mangiano. Se sono alloggiati gruppo assicurarsi che i pezzi sono di piccole dimensioni in modo che tutti i topi possono mangiare parti uguali. Testarlila mattina seguente e sostituire il proprio cibo, non appena il test è finito. Impostare l&#39;apparecchiatura di prova scelto hyponeophagia, anche una fila di piccole gabbie in cui vengono inseriti i topi dalla gabbia casa gruppo singolarmente prima e durante il test. (Questo evita l&#39;aumento di ansia nei topi rimanenti lasciato nella gabbia gruppo, che può verificarsi se si rimuove progressivamente i topi da un gruppo, anche la trasmissione sociale di preferenze alimentari. Si assiste anche nella standardizzazione di test (tra il gruppo e gli animali ospitati singolarmente) e assicura che gli animali sono perfettamente vigile. Posizionare un mouse di prova. Misurare la latenza per mangiare. Questo è definito come mangiare / bere continuamente per 2-3 s. Spesso i topi annusare o leccare brevemente il cibo in un primo momento, ma solo più tardi iniziano a mangiare continuamente senza inibizioni. Altre misure possono essere adottate. Il tempo trascorso a mangiare durante un determinato periodo, ad esempio, 2 minuti dopo l&#39;alimentazione inizia per primo, e forse anche la quantità di cibo consumato durante questo periodo, può anche essere misurata. Lesioni cerebrali a volte influenzano queste misure in modo differenziato 4. 2,2 dettagli specifici di esecuzione di un test hyponeophagia con l&#39;apparato mostrato nella Figura 1: Una brocca di plastica trasparente (circa 1,5 litri di volume, 15 cm di diametro con un beccuccio che sporge un ulteriore 2 cm) è l&#39;apparecchiatura di prova. Usare crema piena latte condensato (marchio Garofano Nestlé è eccellente) 50:50 diluito con acqua (per facilitare la manipolazione di esso) come il nuovo prodotto alimentare. Per contenere il mouse sulla base e agevolare le indagini del latte, posto la brocca a testa in giù con il beccuccio formando una piccola alcova sul cibo bene. Questo si concentra l&#39;attenzione del mouse su al pozzo e il latte, in modo da minimizzare gli effetti dei trattamenti che possono influenzare la percezione di, o l&#39;orientamento per la fonte di cibo. Il mouse è posizionato rivolto verso il bene e la brocca è leggermente abbassata in posizione, facendo attenzione a non intrappolare la coda del topo. La latenza si trovino in l&#39;apparato di avviare correttamente potabile è preso. Annusa il latte non contano, almeno due secondi di bere dovrebbe verificarsi. Conte qualsiasi Boli fecali ed elencare ogni minzione (ma si noti che queste misure saranno influenzati dal tempo nell&#39;apparato). Il cut-off time è di 2 min. Se il mouse non ha bevuto da allora, rimuoverlo sullo strumento e prova una o due topi, poi ripetere il test quello che non è riuscito a bere circa 3 minuti più tardi. Questa volta è probabilmente ottimale per i livelli di ansia per diminuire pur mantenendo uno stato di assuefazione agli apparati. Questo test-retest-riposo-riposo-retest ciclo può essere continuato fino a quando il topo mangia o un determinato numero di prove sono state eseguite. Un massimo di 3 prove dovrebbe portare a maggior parte dei mouse a bere senza fare l&#39;esperimento troppo lungo. Il parametro è la prova (cumulativo) latenza da bere. Come in altri test, dove l&#39;odore potrebbe svolgere un ruolo significativo, non sperimentale topi dovrebbero essere messi in apparato prima dell&#39;inizio della prova. Seguire un protocollo standardizzato pulizia tra tutti i mouse. Rimuovere urine / feci, pulire bene gli alimenti e la base di plastica con umida seguita da un panno asciutto e / tessuto. Riempire il cibo e con il latte (circa 0,2 ml, al bordo del pozzo). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Una brocca di plastica domestico convertito per l&#39;uso come unità di test hyponeophagia. Latte condensato può essere collocato nel cibo piccolo pozzo situato all&#39;interno del becco, che dirige opportunamente l&#39;attenzione del mouse direttamente ad esso. Il peso di piombo incollati alla base della brocca rovesciata aiuta a stabilizzare contro qualsiasi movimento del mouse contro i muri. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Una camera di osservazione contenente due bianchi (di ansia) inserti bianchi per i test hyponeophagia. Mais dolce potrebbe essere usato come il nuovo prodotto alimentare. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Un&#39;altra unità di test hyponeophagia. Il nuovo prodotto alimentare è il trattamento di mix scimmia. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="Figura 4"/> Figura 4. Un&#39;altra unità di test hyponeophagia. Il cibo presentato è misto noci tritate. 3. L&#39;esecuzione di più esperimenti hyponophagia: Il primo test hyponeophagia non può fornire un risultato inequivocabile. Questo accade spesso ed è spesso dovuta alla (controllo) i valori di base troppo alta o bassa, con effetti a soffitto o sul pavimento. Effetti di piano sono stati riscontrati durante il test dell&#39;ippocampo topi lesionati 10; sembrava che il valore di controllo doveva essere sufficientemente elevata da osservatorie ridotto hyponeophagia. Può essere difficile giudicare l&#39;avversione richiesta della situazione di prova. Se i topi sono stati testati più volte già (non necessariamente in ansia attività correlate), il loro livello di emotività sarà inferiore se sono na ve ai test comportamentali e un test più ansiogeno sarà richiesto. Questo spesso può essere fornita da un ambiente di test elevato (come in Figura 4). Rumore avversione potrebbe essere aggiunto alla situazione di prova, ad esempio, una radio suonare ad alto volume o di un generatore di rumore bianco. Brillante illuminazione aumenterebbe anche l&#39;ambiente di prova avversione. Quindi, se il primo risultato hyponeophagia non è significativo, provare diverse situazioni di prova più e di eseguire una ANOVA a misure ripetute. Questo è un disegno sperimentale molto potente. 4. Risultati attesi: Lesioni dell&#39;ippocampo producono un forte calo nei topi hyponeophagia 10 e recente lavoro inedito ha mostrato che questo è, come nel ratto 1, a causa della regione ventrale dell&#39;ippocampo. Topi privi della subunità del canale KATP Kir6.2 ha mostrato un aumento hyponeophagia in un test, ma meno in un altro 9, un risultato confuso, ma che serve a sottolineare che le differenze di ambiente di test può avere un marcato effetto sul risultato, e sottolinea anche l&#39;utilità di eseguire test multipli. 129S2/SvHsd topi erano più hyponeophagic di C57BL/6JolaHsd 6. In effetti, un confronto di diversi ceppi di topi inbred hanno mostrato marcati tra ceppo differenze 21.

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

I dati di latenza nei test hyponeophagia sono in genere altamente variabile. La tecnica qui descritta, di imporre un periodo di tempo impostato per l&#39;animale da mangiare, poi ripetere il test in seguito, se non riesce a mangiare, serve a minimizzare il rischio di ultra-lunga latenza e salva il tempo sperimentatore. Un vantaggio di hyponeophagia rispetto ai test ansia come il plus-labirinto, è che se i risultati del primo test non riescono a raggiungere la significatività statistica, un altro test può essere eseguito utilizzando un diverso ambiente di test romanzo e cibo, come il tipo di ansia misurato sembra essere lo stesso e non qualitativamente cambiata dai test eseguiti in precedenza, a differenza del plus-labirinto 16. Misure ripetute ANOVA può quindi essere utilizzata per valutare la serie di test. E &#39;ormai noto che diversi aspetti di emotività sono coperti dal termine ombrello &quot;ansia&quot; 11,15,18. I topi che illustrano l&#39;evoluzione hyponeophagia non necessariamente mostrare i cambiamenti in campo aperto, elevati plus-labirinto o luce-buio test box. Così i sistemi cerebrali sottostanti le prestazioni su questi test deve essere almeno un po &#39;diversa. Ad esempio, l&#39;ipotalamo e amigdala potrebbe partecipare hyponeophagia di loro competenza con (tra le altre cose) la disciplina dell&#39;assunzione di cibo.

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

Prima di oggi, quando rodenticidi ad azione rapida e potente come l&#39;alfa-cloralosio non erano ancora in uso, il lavoro dei controllori dei parassiti è stata spesso ostacolata da un fenomeno noto come &quot;esca timidezza&quot;. Topi e ratti non possono vomitare, a causa della tenuta dello sfintere cardiaco dello stomaco, in modo da superare il problema della tossicità potenziale prodotto hanno sviluppato una strategia di prima ingerire solo quantità molto piccole di sostanze romanzo. Le quantità ingerite poi aumentare gradualmente fino a quando l&#39;animale ha stabilito se la sostanza è sicuro e nutriente. Così il vecchio topo-catchers sarebbe la prima volta una sostanza appetibile come la farina d&#39;avena, che doveva essere il veicolo per la tossina, nella zona infestata. Solo quando grandi quantità venivano prontamente consumato avrebbero quindi aggiungere il veleno, in quantità calcolate per non alterare il gusto del veicolo. Le esche avvelenate, che gli animali erano ora facilmente a mangiare in grande quantità, sarebbe poi rapidamente svolgere la sua funzione. Timidezza esca è ora usato in laboratorio del comportamento come un modo per misurare l&#39;ansia. Una sostanza altamente appetibile, ma romanzo, come il mais dolce, di frutta o latte condensato zuccherato, viene offerto ai topi (o ratti) in una situazione nuova, come una nuova gabbia. La latenza di consumare una quantità definita di nuovo alimento viene misurata. Robert MJ Deacon si può raggiungere a <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

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Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Topi e ratti, a causa della loro innata prudenza, sono inizialmente lenta nel consumare un nuovo prodotto alimentare, in particolare in un posto nuovo. Questo hyponeophagia può facilmente essere misurata in laboratorio, anche se gli animali di laboratorio sono molto meno ansiosi rispetto ai loro omologhi selvatici

Hyponeophagia: una misura di ansia nel mouse

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

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21.7K Views.  University of Oxford. Topi e ratti, a causa della loro innata prudenza, sono inizialmente lenta nel consumare un nuovo prodotto alimentare, in particolare in un posto nuovo. Questo hyponeophagia può facilmente essere misurata in laboratorio, anche se gli animali di laboratorio sono molto meno ansiosi rispetto ai loro omologhi selvatici

Video: Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

Un modo semplice per misurare sensibilità etanolo in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

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Neuroscienze

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

Quantificare le attività di Cis-Regolamentazione Elementi nella retina di topo Elettroporazione Espianto

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

La risposta Optokinetic come una misura quantitativa di acuità visiva in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Un modo semplice per misurare alterazioni in ricompensa il comportamento di ricerca Utilizzando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer&#039;s Mouse Models

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

Utilizzando biosensori a base di enzimi misurare Tonic e Phasic glutammato in modelli murini di Alzheimer

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

Analisi per misurare il trasporto nucleocitoplasmatico in tempo reale all&#39;interno di motori neuronici come le cellule NSC-34

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

Il potere di Interstimulus intervallo per la valutazione di elaborazione temporale in roditori

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

Saggio meccanico di prevenzione dei conflitti per misurare il comportamento del dolore nei topi

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Social Isolation Model: A Noninvasive Rodent Model of Stress and Anxiety

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of patients achieve full remission. A critical step in developing a novel anxiolytic is to develop and utilize an animal model, such as mice, to study pathological changes and test drug target(s), efficacy, and safety. Current approaches include genetic manipulation, chronic administration of anxiety-inducing molecules, or the administration of environmental stress. These methods, however, may not realistically reflect anxiety induced throughout daily life. This protocol describes a novel anxiety model, which mimics the intentional or unintentional patterns of social isolation in modern life. The social isolation-induced anxiety model minimizes perceived distractions and invasiveness and utilizes wild type C57BL/6 mice. In this protocol, 6- to 8-week-old mice (male and female) are singly housed in opaque cages to visually block the external environment, such as neighboring mice, for 4 weeks. No environmental enrichments (such as toys) are provided, bedding material is reduced by 50%, any treatment of drug is administered as an agar form, and the exposure/handling of the mice is minimized. Socially isolated mice generated using this protocol exhibit greater anxiety-like behavior, aggression,&#160;as well as decreased cognition.

Presented here is a social isolation (SI)-induced anxiety mouse model that utilizes wild type C56BL/6J mice to induce stress and anxiety-like behavior with minimal handling and no invasive procedures. This model reflects modern life patterns of social isolation and is ideal for studying anxiety and related disorders.

Modello di isolamento sociale: un modello non invasivo di roditori di stress e ansia

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of ...