옥스포드 대학에 오픈 액세스 기금을 제공하는 웰컴 트러스트. 로버트 디콘는 웰컴 트러스트 부여 WT084655MA에 의해 자금 옥스포드 OXION 그룹의 구성원입니다.

1. 소개 : 마우스 및 쥐 처음 소설 음식에만 소량을 섭취합니다. 그들은 구토 자신의 무능력에 의한 중독에 대한 책임 때문에 이것은 것으로 생각됩니다. 그들이 이전에 그 음식을 먹은 다른 동물을 발생하는 경우에는이에 대한 유일한 예외는, 그들의 동료의 exhaled 공기에 냄새가있다면, 그들은 안전하게 13으로 분류됩니다. 음식 냄새가 다른 쥐의 숨을 12 탄소 disulphide와 결합되기 때문입니다. 사실, 탄소 disulphide 자체가 마우스 및 쥐 17 모두에서 식품 소비를 증가시킵니다. 현상은 &quot;식품 환경 설정의 사회적 전송&quot;라고 간단한 후각 학습 패러다임 22으로 사용할 수 있습니다. 이것은 해마 3 병변에 민감한 것으로보고 있지만, 다른 연구 5이 찾는를 복제하는 데 실패했습니다. 이것은 neocortical cholinergic 시스템, 특히 orbitofrontal 구성 요소 19 사회 전송 hippocampal cholinergic 시스템보다 더 중요 할지도 모르 것을 제안했습니다. 사회 전송도 아마 감소 CREB (캠프 - 반응 요소 결합 단백질) 노인 해마 7 전송에 의해 중재, 노인 쥐에서 메모리 손상을 추적하기 위해 표시되었습니다. 설치류 사회 전송하여 식품 환경 설정을 습득되는 쉬운 hyponeophagia 테스트에 대한 강한 의미가 있습니다. 작성자가 hippocampal lesioned 및 제어 쥐와 hyponeophagia 테스트를 수행했을 때, 그는 실수로 8 테스트로 인해 다음 제어 암흑의 새장에 테스트 hippocampal 쥐 (달콤한 옥수수를 먹어)을 넣어. 그것은 14의 안에 먹고, 유일한 컨트롤은 300 S.의 지연을하지 그레이트주의 따라서 hyponeophagia 테스트 기간 동안 음식 냄새의 사회 전송을 방지하기 위해 이동해야합니다. 첫 번째 hyponeophagia 테스트가 명확하고 모호하지 않은 결과가 발생하지 않는 경우, 여러 추가 검사를 수행할 수 있습니다. 그림 1-4 다른 장치의 예를 보여줍니다. 고안 수있는 테스트 상황의 숫자는 실험자의 상상력에 의해 제한됩니다. 결과는 양방향 반복 측정 ANOVA로 분석됩니다. hyponophagia 데이터는 일반적으로 매우 변수이기 때문에, 아주 긴 대기 시간을 제공 일부 동물, 가우스 분포에 부합 종종 괴상한 아니라, 그것 먼저 변화되어야, 제곱근 또는 로그 변환은 극단적인 이상 대기를 truncating 특히 유용합니다. 2. 장치 : 그림 1-4는 hyponeophagia 테스트 세트 업의 예제로 제공됩니다. 달콤한 옥수수 niblet도 거기에 배치 될 수 있지만 잘 그림 1에 표시된 음식, 분명 최고의 액체를 포함하는 적합하지만 소설 음식과 환경의 특정 조합은 중요하지 않습니다. 일반적으로, 그것은 음식으로 덮여 장치의 바닥의 대부분을 가지고하는 것이 좋습니다. 뿐만 아니라 동물 aversive이 특이한 표면을 찾을 수 나타나지 않습니다,이 기술은 또한 음식을 찾는 전에 탐사에 의한 confounds을 제거합니다. 그것이 anxiogenic되지 않았습니다 때문에이 운동을 우울 때문에이 음식을 찾아 먹는 대기 시간을 증가하기 때문에 그러므로 진정제 약물 anxiogenic 나타날 수 있습니다. 예를 들어, 하나의 간행물은 오픈 필드 2의 중앙에있는 음식물을 집어넣고하시기 바랍니다. 뿐만 아니라이 결과는 탐험 시간에 혼란되고있는 먹이 지연, 또한 불안, 즉, 오픈 필드 중앙 지역 혐오의 추가 패싯에 포식 위험을 피하고 관련된되었습니다 오픈 필드 인한 불안의 고전적인 조치를 도입하지 자연 서식지 14. 그러나, 어떤 상황이 실제로 실험의 원하는 기능을 수 있습니다. 2 설명된 실험의 또 다른 단점은 미끼가 오픈 필드의 중앙에 표준 연구실 차우 있다고했다. 이것은 소설이 아니므로 또한 달콤한 옥수수 또는 가당 연유로 식품과는 달리, 매우 palatable 아니라는 것을 두 단점이 있습니다. 이 부분 때문에 단지 스패머로 빈곤이 필요합니다,, 우리는 항상 극단적인 palatability의 baits을 사용하여뿐만 아니라 소설 음식을 먹지 않도록 여부를 통해 충돌을 증가뿐 아니라 동물 시험 전에 박탈 지나치게 음식을 할 필요가 없습니다 것으로 나타났습니다 여기에 제시된 프로토콜의 러셀과 버치 20 3Rs의 &quot;다듬 는다&quot;측면을 반영합니다. 2.1 절차 : 하룻밤 생쥐의 음식 배급. 모든 케이지 호퍼 음식들이 정상적으로 음식을 먹을 것이다 무엇 대략 세 번째 일반적인 다이어트의 1g / 마우스,주고 그 테스트하기 전에하세요.을 제거 그렇다면 보관되어 그룹은 조각이 모든 쥐가 동일한 주식을 먹을 수 있도록 작은 있는지 확인하십시오. 그들을 테스트아침 옆에 마자 테스트가 완료로 그들의 음식을 바꿉니다. 또한 선택한 hyponeophagia 시험 장치, 그룹 홈 케이지에서 마우스를 테스트하기 전에 그리고 동안 개별적으로 배치하는 작은 새장의 행을 설정합니다. (이것은 점차 그룹 또한 식품 환경 설정의 사회 전송에서 마우스를 제거할 경우 발생할 수있는 그룹 케이지에 남아있는 나머지 생쥐에 불안의 증가를 방지합니다. 또한 (그룹 및 단독 보관되어 동물 사이) 시험 표준화 지원 그리고 동물이 최적 경보는 것을 보장합니다. 테스트 장치에 마우스를 놓으십시오. 먹을 수있는 대기 시간을 측정합니다. 이것은 먹는 / 2-3에 대한 지속적인 음주로 정의됩니다 S. 종종 마우스는 냄새 또는 릭 처음에는 식품 간략하게,하지만 오직 나중에 억제하지 않고 지속적으로 먹고 시작합니다. 다른 조치도 취할 수 있습니다. 시간도 측정할 수도 가능 예 2 처음 시작 먹이 후 분,이 기간 동안 소비하는 식품의 양을, 설정된 기간 동안 식사를 보냈다. 뇌 병변은 때때로 이들은 differentially 4 조치에 영향을 미칩니다. 그림 1에 표시된 장치와 hyponeophagia 테스트를 실행 2.2 구체적인 세부 정보 : 반투명 플라스틱 용기는 (대략 1.5 리터 볼륨,이 오르네 더 2cm를 튀어나온와 15cm 직경) 시험 장치입니다. 전체 크림을 사용 (네슬레 카네이션 브랜드 우수합니다) 소설 음식으로 물 (그것을 처리 촉진하기)에 희석 50:50 농축 우유를 가당. 기지에 마우스를 포함하고 우유의 조사를 촉진하기 위해이 오르네 잘 음식을 통해 작은 알코브 형성과 거꾸로 저그 넣습니다. 이 때문에 인식을의 영향을 미칠 수있는 트리 트먼트 효과, 또는 방향, 식품 소스를 최소화 잘하고 우유에 마우스의 관심을 초점을 맞추고 있습니다. 마우스가 떨어진 우물에서 마주 배치되고 용기가 부드럽게 마우스의 꼬리를 잡는하지 돌보는, 위치로 저하됩니다. 제대로 음주를 시작하는 장치에 배치되는 것을 지연은 이미 사용 중입니다. 우유에 킁킁이 포함되지 않습니다; 마시는 적어도 두 개의 초 발생한다. 어떤 faecal boli 카운트하고 (하지만 이러한 조치는 기기의 시간에 의해 영향됩니다) 모든 배뇨를 적어 둡니다. 차단 시간은 2 분입니다. 마우스 그때까지 술 마시지 않은 경우에는 장치에서 제거하고 다른 하나 또는 두 개의 마우스를 테스트 후, 나중에 3 분 약 마실 실패를 다시 테스트. 이것은 아직 시간이기구에 요법 이니의 상태를 유지하면서 감소 아마도 불안 수준에 최적입니다. 마우스가 먹는 또는 재판 일련의 번호가 수행 때까지이 테스트 - 휴식 - 재시험 - 휴식 - 재시험 사이클은 계속하실 수 있습니다. 3 시련의 최대 너무 오래 실험을하지 않고 마시는 대부분의 생쥐가 발생한다. 테스트 매개 변수는 마실 (누적) 대기 시간입니다. 냄새가 중요한 역할을 수있는 다른 테스트와 마찬가지로, 이외의 실험 생쥐는 테스트를 시작하기 전에 장치에 배치해야합니다. 모든 마우스 사이의 표준 청소 절차를 따르십시오. , 소변 / 찌끼를 제거 음식을 잘 닦아하고 촉촉한와 플라스틱베이스 헝겊 / 조직 건조한 다음. 우유와 잘 리필은 식품 (0.2 ML에 대해, 우물의 가장자리에). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="그림 1"/> 그림 1. 플라스틱 가정 용기는 hyponeophagia 테스트 단위로 사용하기 위해 변환. 가당 연유 편리 곧바로 마우스의 관심을 이끌고 잘 오르네 안에있는 작은 음식에 삽입할 수 있습니다. 저그의 거꾸로베이스에 붙어 리드 무게는 벽에 마우스의 움직임에 대해 그것을 안정화하는 데 도움이됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="그림 2"/> 그림 2. 2 흰색 (불안 - 자극) hyponeophagia 테스트 백색 인서트를 포함하는 관찰 챔버. 스위트 콘은 소설 음식으로 사용할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="그림 3"/> 그림 3. 다른 hyponeophagia 시험 단위입니다. 소설 음식 원숭이 치료 믹스입니다. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="그림 4"/> 그림 4. 다른 hyponeophagia 시험 단위입니다. 제공 음식 혼합 다진 땅콩입니다. 3. 여러 hyponophagia 실험을 실행 : 첫 번째 hyponeophagia 시험은 애매하지 않은 결과를 제공하지 않을 수도 있습니다. 이것은 종종 발생하고 천정 또는 바닥 효과의 결과로, 자주 높거나 낮은 너무되는 기준 (제어) 가치 때문이다. hippocampal lesioned 생쥐 10 테스트를 할 때 바닥에 효과가 발생했다, 그것은 제어 값이 observ 충분히 높은 수 있다고 나타나E는 hyponeophagia을 감소. 이것은 테스트 상황에 필요한 aversiveness를 판단하기 어려울 수 있습니다. 생쥐가 (필요하지 불안과 관련된 업무에) 이미 여러 번 테스트한있다면 자신의 감격성 수준은 그들이 행동 테스트 및보다 anxiogenic 검사해야됩니다하신 나있다면보다 낮은 것입니다. 이것은 종종 높은 테스트 환경 (그림 4)에 의해 제공될 수 있습니다. Aversive 소음은 테스트 상황에, 큰 볼륨이나 백색 잡음 발전기에서 재생 라디오 예를 들어 추가할 수 있습니다. 밝게 조명은 또한 테스트 환경 aversiveness을 높일 것입니다. 첫 번째 hyponeophagia 결과가 중요하지 않은 경우 그럼, 몇 가지 더 테스트 상황을 시도하고 반복 측정 ANOVA를 수행합니다. 이것은 매우 강력한 실험적인 디자인입니다. 4. 예상 결과 : Hippocampal 병변은 쥐 10 hyponeophagia에서 강력한 감소를 생산하고 최근되지 않은 작품이로 쥐 1, 해마의 복부 지방에 의한 것으로 나타났습니다. KATP 채널 subunit Kir6.2을 부족한 마우스는 다른 9, 혼란 결과지만, 테스트 환경의 차이가 결과에 표시된 영향을 미칠 수 있다고 강조하는 역할을 하나 하나 테스트를했지만 이내에 hyponeophagia 증가하고, 또한 유용 지적했다 여러 테스트를 수행. 129S2/SvHsd 마우스는 C57BL/6JolaHsd 6 이상 hyponeophagic했다. 사실, 여러 근친 마우스 종자의 비교 표시 상호 변형 차이가 21을 보여주었다.

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

hyponeophagia 테스트에 대기 시간의 수치는 일반적으로 매우 변수입니다. 기술, 그것이 식사를하지 않을 경우 나중에 다시 테스트 후, 먹을 수있는 동물에 대해 설정된 기간을 순례의 여기에 설명된 울트라 긴 대기 시간의 위험을 최소화하고 실험자 시간을 절약할을 제공합니다. 예 플러스 - 미로와 같은 불안 테스트를 통해 hyponeophagia 중 하나 장점은 첫 번째 시험의 결과는 통계적 의미를 달성하지 않는 경우, 다른 시험 불안 측정되는 형식으로, 다른 소설 테스트 환경 및 식품을 사용하여 실행할 수있다는 것입니다 더하기 - 미로 16과는 달리, 이전에 실행 테스트하여 동일한 및 질적으로 변경되지 것 같습니다. 반복 측정 ANOVA는 다음 테스트 시리즈를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 그것은 지금 감격성 여러 가지 측면이 포괄적 용어 &quot;불안&quot;11,15,18이 적용되는 것으로 알려져 있습니다. hyponeophagia의 변화를 보여주는 마우스가 반드시 더하기 미로 고가 오픈 필드의 변경, 또는 가벼운 어두운 상자 테스트를 표시하지 않습니다. 따라서 이러한 시험의 성능을 기본 뇌 시스템은 적어도 어느정도는 달라야합니다. 예를 들어, 시상 하부 및 amygdale 잘 그들이 음식 섭취의 규정 (다른 것들 중에서)와 우려로 hyponeophagia에 참여할 수 있습니다.

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

현재 하루 전에, 같은 알파 - chloralose으로 빠른 행동과 강력한 rodenticides 사용가 아직되지 않은 경우, 해충 컨트롤러의 작품은 종종 &quot;미끼 수줍음&quot;로 알려진 현상​​에 의해 방해되었다. 마우스 및 쥐가 그래서 그들은 첫 소설 물질만이 아주 소량을 섭취의 전략을 발전시켜 왔습니다 잠재적인 식품 독성의 문제를 극복하기 위해, 복부의 심장 괄약근의 죄어져 있음으로 인해, 구토 수 없습니다. 금액은 동물이 물질 안전하고 영양가 여부를 결정 때까지 점차적으로 증가 후 섭취. 그래서 늙은 쥐 - 캐처스 먼저 감염 지역에서 독소를위한 수단이 될 것이었다 같은 오트밀로 palatable 물질을 넣어 것입니다. 대용량이 쉽게 소비되고 있었다 때만 그들은 다음 차량의 맛을 영향을 미치지 않도록 계산 금액에서 독을 추가합니다. 동물이 지금 즉시 다량의 먹고 중독 미끼는 다음 신속하게 그 기능을 수행합니다. 베이트 수줍음 이제 불안을 측정하는 방법으로 행동 연구실에서 사용됩니다. 같은 달콤한 옥수수, 견과류 또는 가당 연유로 높은 palatable하지만 소설 물질은, 이러한 새로운 새장 같은 소설 상황에서 쥐 (또는 쥐)에 제공됩니다. 새로운 음식 정의된 금액을 소비하는 대기 시간은 다음 측정됩니다. 로버트 MJ 디콘이에 도달할 수있는 <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

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Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

자신의 타고난 cautiousness로 인해 마우스 및 쥐는, 처음 특히 소설 장소에서, 소설의 음식 소비에 느린 있습니다. 이 hyponeophagia는 즉시 실험 동물이 훨씬 덜 불안 그들의 야생 대응보다에도 불구하고, 실험실에서 측정할 수

Hyponeophagia : 마우스에서 불안의 측정

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

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Research

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Neuroscience

21.8K 조회수.  University of Oxford. 자신의 타고난 cautiousness로 인해 마우스 및 쥐는, 처음 특히 소설 장소에서, 소설의 음식 소비에 느린 있습니다. 이 hyponeophagia는 즉시 실험 동물이 훨씬 덜 불안 그들의 야생 대응보다에도 불구하고, 실험실에서 측정할 수

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A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

파리에서 에탄올 민감도를 측정하는 간단한 방법

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

연구

신경과학

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

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Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

마우스 강제 수영 시험

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

Zebrafish의 시력의 정량적 측정과 Optokinetic 응답

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various neurological deficits. The current ex vivo live imaging of motile ependymal cilia technique allows for a detailed study of ciliary dynamics following several steps. These steps include: mice euthanasia with carbon dioxide according to protocols of The University of Toledo&#8217;s Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC); craniectomy followed by brain removal and sagittal brain dissection with a vibratome or sharp blade to obtain very thin sections through the brain lateral ventricles, where the ependymal cilia can be visualized. Incubation of the brain&#8217;s slices in a customized glass-bottom plate containing Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)/High-Glucose at 37 &#176;C in the presence of 95%/5% O2/CO2 mixture is essential to keep the tissue alive during the experiment. A video of the cilia beating is then recorded using a high-resolution differential interference contrast microscope. The video is then analyzed frame by frame to calculate the ciliary beating frequency. This allows distinct classification of the ependymal cells into three categories or types based on their ciliary beating frequency and angle. Furthermore, this technique allows the use of high-speed fluorescence imaging analysis to characterize the unique intracellular calcium oscillation properties of ependymal cells as well as the effect of pharmacological agents on the calcium oscillations and the ciliary beating frequency. In addition, this technique is suitable for immunofluorescence imaging for ciliary structure and ciliary protein localization studies. This is particularly important in disease diagnosis and phenotype studies. The main limitation of the technique is attributed to the decrease in live motile cilia movement as the brain tissue starts to die.

Using high-resolution differential interference contrast (DIC) microscopy, an ex vivo observation of the beating of motile ependymal cilia located within the mouse brain ventricles is demonstrated by live-imaging. The technique allows a recording of the unique ciliary beating frequency and beating angle as well as their intracellular calcium oscillation pacing properties.

마우스 뇌의 좌우 심실의 뇌실막 섬모의 라이브 영상

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법<em&gt; 노랑 초파리</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

효소 기반의 바이오 센서를 사용하면 알츠하이머 병 마우스 모델에서 토닉과 Phasic이 품목을 측정하는

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

모터 뉴런과 유사한 NSC-34 세포 내에서 실시간으로 핵 세포질 수송을 측정하는 분석

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

설치류에서 시간적 처리의 평가 대 한 Interstimulus 간격의 힘

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Hyponeophagia : 마우스에서 불안의 측정

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