El Wellcome Trust por haber financiado el acceso abierto a la Universidad de Oxford. Robert Deacon es un miembro del grupo de Oxford OXION, financiado por el Wellcome Trust conceder WT084655MA.

1. Introducción: Ratas y ratones inicialmente se consumen sólo pequeñas cantidades de un nuevo alimento. Se cree que esto se deba a que están sujetos a una intoxicación debido a su incapacidad para vomitar. La única excepción a esto es si se ha trabajado antes otro animal que ha comido esa comida, y si huele en el aire exhalado de sus compañeros, que lo clasifican como seguros 13. Esto es porque el olor del alimento se combina con el sulfuro de carbono, el 12 de aliento a la rata del otro. De hecho, el disulfuro de carbono se incrementa el consumo de alimentos en ratas y ratones 17. El fenómeno se llama &quot;transmisión social de las preferencias de alimentos&quot; y se puede utilizar como un paradigma de aprendizaje simples olfativas 22. Esto ha sido reportado a ser sensibles a las lesiones en el hipocampo tres, pero otros estudios 5 no replicar este hallazgo. Se ha sugerido que el sistema neocortical colinérgica, particularmente el componente orbitofrontal 19 puede ser más importante que el sistema colinérgico del hipocampo para la transmisión social. Transmisión social incluso se ha demostrado que la pista deterioro de la memoria en ratas de edad avanzada, probablemente mediado por una disminución de CREB (cAMP respuesta elemento proteína de unión) la transmisión en el hipocampo de 7 años. La facilidad con que los roedores adquieren una preferencia alimentaria por la transmisión social tiene fuertes implicaciones para las pruebas de hyponeophagia. Cuando el autor estaba realizando una prueba con hyponeophagia del hipocampo y el control de ratas lesionadas, sin querer poner a prueba una rata del hipocampo (que se había comido el maíz dulce) dentro de la jaula de la rata de control próxima, debido a las pruebas 8. Se comió dentro de los 14 s, no el único control para tener una latencia de 300 s. Gran cuidado por lo tanto, se deben tomar para prevenir la transmisión social de tales olores de los alimentos durante las pruebas hyponeophagia. Si la primera prueba hyponeophagia no da lugar a un resultado claro, sin ambigüedades, varias otras pruebas se pueden realizar. Figuras 1-4 ilustran ejemplos de diferentes aparatos. El número de situaciones de prueba que puede ser concebido sólo está limitado por la imaginación del investigador. Los resultados son analizados por las reiteradas ANOVA de dos medidas. Desde hyponophagia de datos suele ser muy variable, no se ajusten a una distribución de Gauss y sesgada a menudo, con algunos animales dando latencias muy largas, que deberá ser transformada primero, una raíz cuadrada o transformación logarítmica es particularmente útil para truncar las latencias más extrema. 2. Aparatos: Figuras 1-4 se presentan como ejemplos de la prueba hyponeophagia set-ups. Las combinaciones específicas de los nuevos alimentos y el medio ambiente no son críticos, aunque la comida también se muestra en la Figura 1 es obviamente el más adecuado para contener líquidos, aunque un niblet de maíz dulce también puede ser depositado en él. En general, es una buena idea tener a la mayor parte de la planta de los aparatos cubiertos con la comida. No sólo los animales parecen encontrar esta superficie inusual aversión, esta técnica también elimina confunde debido a la explotación antes de encontrar el alimento. Así, un fármaco sedante podría parecer ansiogénicos ya que el aumento de la latencia para buscar y comer los alimentos, ya que la locomoción deprimido, no porque era ansiógeno. Por ejemplo, una publicación aconseja introducir los alimentos en el centro de un campo abierto 2. Esto no sólo como resultado la latencia de la alimentación está confundida por la exploración del tiempo, también presenta una faceta adicional de la ansiedad, la aversión al campo abierto, es decir la zona central, una medida clásica de campo abierto mediada por la ansiedad, que se ha relacionado con evitar el riesgo de depredación en los hábitats naturales 14. Sin embargo, en algunas situaciones esto podría ser una característica deseada de la prueba. Otra desventaja del experimento descrito en el 2 es que el cebo era el estándar de laboratorio chow en el centro del campo abierto. Esto tiene la doble desventaja de que no es nuevo, y tampoco es muy agradable, a diferencia de los alimentos como el maíz dulce o leche condensada azucarada. Siempre hemos encontrado que el uso de cebos de palatabilidad extremas no sólo aumenta el conflicto en torno a si se debe comer o evitar el nuevo alimento, sino también los animales no deben ser excesivamente comida privada antes de la prueba, sólo la privación leve es necesario, por lo que este aspecto de los protocolos que aquí se presenta refleja el &quot;refinamiento&quot; aspecto de las 3Rs de Russell y Burch 20. 2.1 Procedimiento: Ración de la comida de los ratones durante la noche. Retire todos los alimentos de la tolva de la jaula por la noche antes de la prueba a continuación, dar 1 g / ratón de la dieta ordinaria, que es aproximadamente un tercio de lo que comería normalmente. Si están alojados en grupo, asegúrese de que las piezas son pequeñas, para que todos los ratones pueden comer partes iguales. Prueba de ellosA la mañana siguiente y vuelva a colocar los alimentos tan pronto como la prueba ha terminado. La instalación del equipo hyponeophagia prueba elegida, además de una hilera de pequeñas jaulas en las que los ratones de la jaula del grupo se colocan de forma individual antes y durante la prueba. (Así se evita el aumento de la ansiedad en los ratones restantes quedan en la caja del grupo, que puede ocurrir si progresivamente eliminar los ratones de un grupo, también la transmisión social de las preferencias alimentarias. También ayuda en la normalización de la prueba (entre el grupo y los animales alojados individualmente) y asegura que los animales están perfectamente alerta. Coloque el ratón en el aparato de prueba. Medir la latencia para comer. Esta se define como comer / beber continuamente durante 2-3 s. A menudo, los ratones se huelen o lamen brevemente la comida en un primer momento, pero sólo después de empezar a comer continuamente sin inhibiciones. Otras medidas también se pueden tomar. El tiempo dedicado a comer durante un período determinado, por ejemplo, 2 minutos después de la alimentación se inicia en primer lugar, y posiblemente también la cantidad de alimentos consumidos durante este período, también se puede medir. Las lesiones cerebrales afectan a veces a estas medidas de manera diferente 4. 2.2 Los detalles específicos de la ejecución de una prueba hyponeophagia con el aparato se muestra en la Figura 1: Una jarra de plástico transparente (volumen aproximado de 1,5 l, 15 cm de diámetro con un pico que sobresale unos 2 cm) es el aparato de prueba. Utilizar una crema llena de leche condensada (Nestle marca Clavel es excelente) 50:50 diluido con agua (para facilitar su manejo) como el nuevo alimento. Para contener el ratón en la base y facilitar la investigación de la leche, coloque la jarra boca abajo con la boquilla en la formación de un pequeño hueco sobre los alimentos también. Se centra la atención del ratón sobre el bien y la leche, por lo que se minimizan los efectos de los tratamientos que puedan afectar a la percepción, o la orientación de la fuente de alimento. El ratón se coloca de espaldas al bien y la jarra es ligeramente baja en su posición, teniendo cuidado de no atrapar la cola del ratón. La latencia de ser colocado en el aparato para empezar a beber se toma correctamente. Huele la leche no cuentan, al menos dos segundos de la bebida debe ocurrir. Contar el boli fecal y tome nota de la micción (pero tenga en cuenta que estas medidas se verá influido por el tiempo en el aparato). El tiempo de corte es de 2 min. Si el ratón no ha bebido para entonces, retirar del aparato y probar uno o dos ratones, vuelva a probar el que no pudo beber aproximadamente 3 minutos después. Esta vez es probable que los niveles de ansiedad óptima para reducir al mismo tiempo conservar un estado de habituación al aparato. Este ciclo de prueba-resto-retest-resto-retest se puede continuar hasta que el ratón se come o un número determinado de ensayos se han realizado. Un máximo de 3 pruebas deben dar lugar a la mayoría de los ratones beber sin hacer el experimento demasiado tiempo. El parámetro de la prueba es la latencia (acumulativo) para beber. Al igual que en otras pruebas donde el olor podría desempeñar un papel importante, no experimental de ratones se deben colocar en el aparato antes de que comience la prueba. Seguir un protocolo de limpieza estandarizada entre todos los ratones. Eliminar la orina / heces, limpie bien los alimentos y la base de plástico con aire húmedo seguido por un paño seco / tejido. Rellene el alimento bien con la leche (alrededor de 0,2 ml, al borde del pozo). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Una jarra de plástico domésticos convertidos para su uso como una unidad de pruebas hyponeophagia. La leche condensada azucarada puede ser colocado en el alimento pequeño bien ubicado en el interior del conducto, que dirige convenientemente la atención de la recta del ratón a la misma. El peso de plomo pegado a la base invertida de la jarra de ayuda a estabilizar en contra de cualquier movimiento del ratón en las paredes. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Una sala de observación con dos blancos (que provoca ansiedad) inserta blanco para las pruebas de hyponeophagia. El maíz dulce puede ser utilizado como el nuevo alimento. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Otra unidad de prueba hyponeophagia. El nuevo alimento es la mezcla de mono tratar. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="Figura 4"/> Figura 4. Otra unidad de prueba hyponeophagia. Los alimentos que se presentan se mezcla de nueces picadas. 3. Ejecución de varios experimentos hyponophagia: La primera prueba hyponeophagia no puede proporcionar un resultado inequívoco. Esto sucede a menudo y con frecuencia se debe a la línea de base (control) los valores son demasiado altos o bajos, resultando en efectos techo o suelo. Efecto suelo se encontraron pruebas de que los ratones del hipocampo lesionado 10, parecía que el valor de control tuvo que ser suficientemente alta como para observadorese reduce hyponeophagia. Puede ser difícil juzgar la repulsión que requiere de la situación de prueba. Si los ratones se han probado ya varias veces (no necesariamente en las tareas relacionadas con la ansiedad) su nivel de emotividad será menor que si se ve na de las pruebas de comportamiento y una prueba más ansiógeno será requerida. A menudo, esto puede ser proporcionada por un entorno de pruebas elevada (como en la Figura 4). Ruido aversivo podría ser añadido a la situación de prueba, por ejemplo, un radio encendido a un volumen alto o un generador de ruido blanco. Una iluminación más brillante también aumentaría la aversión de entorno de prueba. Por lo tanto, si el primer resultado hyponeophagia no es significativo, probar varios más situaciones de prueba y realizar un análisis de varianza de medidas repetidas. Se trata de un diseño experimental muy potente. 4. Resultados esperados: Lesiones del hipocampo produce una fuerte disminución en hyponeophagia en ratones 10 y obra inédita reciente ha demostrado que esto es, que en la rata 1, debido a la región ventral del hipocampo. Los ratones que carecen de la subunidad del canal KATP Kir6.2 mostró un aumento de hyponeophagia en una prueba, pero menos en otros 9, un resultado confuso, pero una que sirve para enfatizar que las diferencias en el entorno de prueba puede tener un efecto marcado en el resultado, y también destaca la utilidad de realizar múltiples pruebas. 129S2/SvHsd ratones eran más que hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. De hecho, una comparación de varias cepas de ratones endocriadas mostraron marcadas diferencias entre la cepa 21.

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Las cifras de latencia en las pruebas de hyponeophagia suelen ser muy variables. La técnica descrita aquí, de imponer un período de tiempo establecido para el animal para comer, y luego volver a probar más adelante si no para comer, sirve para minimizar el riesgo de ultra-larga latencia y ahorra el tiempo experimentador. Una de las ventajas de hyponeophagia sobre las pruebas de ansiedad, como la del laberinto, es que si los resultados de la primera prueba no alcanzó significación estadística, otra prueba se puede ejecutar mediante un nuevo entorno de ensayo y los alimentos, como el tipo de ansiedad que se está midiendo parece ser el mismo y no un cambio cualitativo en las pruebas ejecutado anteriormente, a diferencia de los 16 del laberinto. ANOVA de medidas repetidas se pueden utilizar para evaluar la serie de pruebas. Ahora se sabe que varios aspectos de la emocionalidad están cubiertos por el término genérico de &quot;ansiedad&quot; 11,15,18. Los ratones que muestran los cambios en hyponeophagia no necesariamente mostrará los cambios en campo abierto, elevado del laberinto o de luz-oscuridad pruebas de caja. Así que los sistemas cerebrales subyacentes rendimiento en estas pruebas debe ser al menos un poco diferente. Por ejemplo, el hipotálamo y la amígdala podría participar en hyponeophagia, ya que tienen que ver con (entre otras cosas) la regulación de la ingesta de alimentos.

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

Antes de que el día de hoy, cuando los rodenticidas de acción rápida y potente como el alfa-cloralosa aún no estaban en uso, el trabajo de los controladores de plagas se vio obstaculizada a menudo por un fenómeno conocido como &quot;la timidez de cebo&quot;. Los ratones y las ratas no pueden vomitar, debido a la estrechez del esfínter cardiaco del estómago, por lo que para superar el problema de la toxicidad potencial de alimentos que se han desarrollado una estrategia de la primera ingestión de cantidades muy pequeñas de sustancias nuevas. Las cantidades ingeridas luego aumentar gradualmente hasta que el animal ha determinado si la sustancia es segura y nutritiva. Por lo que el ajetreo cotidiano de los receptores en primer lugar puso una sustancia apetecible como la avena, que iba a ser el vehículo de la toxina, en la zona infestada. Sólo cuando una gran cantidad eran fácilmente consumidos iban a continuación, agregue el veneno, en cantidades calculadas para no afectar el sabor del vehículo. Los cebos envenenados, que los animales estaban comiendo fácilmente en grandes cantidades, entonces rápidamente realizar su función. La timidez de cebo se utiliza actualmente en el laboratorio del comportamiento como una forma de medir la ansiedad. Una sustancia muy apetecible, pero la novela, como el maíz dulce, frutos secos o la leche condensada azucarada, se le ofrece a los ratones (o ratas) en una situación nueva, como una jaula nueva. La latencia de consumir una cantidad definida de los nuevos alimentos se mide. Robert MJ diácono puede llegar a <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

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Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Ratones y ratas, debido a su innata cautela, son inicialmente lento en el consumo de un nuevo alimento, en especial en un lugar nuevo. Este hyponeophagia fácilmente se puede medir en el laboratorio, a pesar de que los animales de laboratorio son mucho menos ansiosos que sus contrapartes silvestres

Hyponeophagia: una medida de la ansiedad en el ratón

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

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Research

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Neuroscience

21.8K vistas.  University of Oxford. Ratones y ratas, debido a su innata cautela, son inicialmente lento en el consumo de un nuevo alimento, en especial en un lugar nuevo. Este hyponeophagia fácilmente se puede medir en el laboratorio, a pesar de que los animales de laboratorio son mucho menos ansiosos que sus contrapartes silvestres

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A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

Una manera sencilla de medir la sensibilidad de etanol en las moscas

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Investigación

Neurociencias

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

La cuantificación de la actividad de Cis Elementos reguladores en la retina del ratón por electroporación explante

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

Un Protocolo de PET-MRI Dual trazador para la medición cuantitativa de la Regional del cerebro Energía Sustratos captación en la rata

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

La respuesta optocinética como una medida cuantitativa de la agudeza visual en el pez cebra

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Una manera sencilla de medir alteraciones en el comportamiento de búsqueda de recompensa Uso<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer&#039;s Mouse Models

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

El uso de biosensores basados ​​en enzimas para medir tónica y fásica glutamato en modelos de ratones con Alzheimer

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

Ensayo para medir el transporte nucleocitoplasmático en tiempo real dentro de las células NSC-34 similares a neuronas motoras

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

El poder del Interstimulus intervalo para la evaluación de proceso Temporal en roedores

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

Ensayo mecánico de evitación de conflictos para medir el comportamiento del dolor en ratones

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Social Isolation Model: A Noninvasive Rodent Model of Stress and Anxiety

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of patients achieve full remission. A critical step in developing a novel anxiolytic is to develop and utilize an animal model, such as mice, to study pathological changes and test drug target(s), efficacy, and safety. Current approaches include genetic manipulation, chronic administration of anxiety-inducing molecules, or the administration of environmental stress. These methods, however, may not realistically reflect anxiety induced throughout daily life. This protocol describes a novel anxiety model, which mimics the intentional or unintentional patterns of social isolation in modern life. The social isolation-induced anxiety model minimizes perceived distractions and invasiveness and utilizes wild type C57BL/6 mice. In this protocol, 6- to 8-week-old mice (male and female) are singly housed in opaque cages to visually block the external environment, such as neighboring mice, for 4 weeks. No environmental enrichments (such as toys) are provided, bedding material is reduced by 50%, any treatment of drug is administered as an agar form, and the exposure/handling of the mice is minimized. Socially isolated mice generated using this protocol exhibit greater anxiety-like behavior, aggression,&#160;as well as decreased cognition.

Presented here is a social isolation (SI)-induced anxiety mouse model that utilizes wild type C56BL/6J mice to induce stress and anxiety-like behavior with minimal handling and no invasive procedures. This model reflects modern life patterns of social isolation and is ideal for studying anxiety and related disorders.

Modelo de aislamiento social: un modelo no invasivo de estrés y ansiedad para roedores

Anxiety disorders are one of the leading causes of disability in the United States (US). Current treatments are not always effective and less than 50% of ...