מודל הרומן במבחנה של פגיעה מוחית טראומטית הפיצוץ

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום של פגיעה מוחית טראומטית מזיקה הפיצוץ והוא יכול לשמש כדי לסנן תרופות neuroprotective לפני השימוש במודלים מורכבים יותר Vivo. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא משתמשת במכשיר מעבדה כדי לחשוף רקמת מוח מסת ויטרו לגלי הלם באמצעות פרוטוקול תפוקה פשוט וגובה המאפשר יצירת פגיעה לשחזור. ראשית, הכנס טבעות נירוסטה סטריליות בהתאמה אישית לתוך בארות של צלחת שש בארות.

לאחר מכן הוסיפו מדיום ניסיוני מחומם מראש ללא סרום עם פרופידיום יודיד לבאנות ומבטיחים כי רמת המדיום לא תגיע מעל לחיץ הטבעת. מעבירים את הצלחת לאנקובטור למשך שעה כדי להבטיח שהמדיום יהיה ב-37 מעלות צלזיוס לפני שתרבות הרקמה תועבר. לאחר שעה, מעבירים את תרבות הרקמות עם פרוסות אורגנוטיפיקות ממנות הגדילה שלהם לטבעות בצלחת ששת הטובים.

הפוך נקודה על שפת הכניסה במיקום שלוש שעה עם עט סמן קבוע כדי להקל על החזרת מוסיפים למיקום המקורי שלה, ולאחר מכן תווית כל צלחת שש גם עם שם ייחודי ותאריך ולעשות מפה של הבארים של כל צלחת, שמות כל באר עם אות וכל פרוסה הבאר עם מספר, כך שלכל פרוסה יש מזהה ייחודי. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת כדי להבטיח את הפרוסות הם ב 37 מעלות צלזיוס מיד לפני הדמיה. שעה לאחר המעבר למדיום ניסיוני, להעריך את בריאות הפרוסה על ידי הדמיה מהירה של כל פרוסה בנפרד ברצף תחת הספק נמוך.

השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי המצויד במסנן קריאה ו פליטה מתאים באופן אידיאלי בחדר חשוך או בחדר עם אור עמום. שמור את המכסה על הצלחת בעת הדמיה. עיבוי מסוים עשוי להצטבר בחלק הפנימי של המכסה.

אם זה קורה, בקצרה להשתמש מייבש שיער על ההגדרה הנמוכה בצד החיצוני של המכסה. ודא שתנאי ההדמיה זהים בימים שונים ובין ניסויים. בבסיס, פרוסות בריאות מראות מעט מאוד כתמי פלואורסצנטיים.

פרוסות המציגות אזורים של כתמים אדומים צפופים מצביעות על כדאיות נפגעת ויש להחריג אותן מניתוח נוסף. לשם השוואה, פלואורסצנטיות מהפיצוץ שנפצע פרוסה ב 72 שעות מוצג כאן. מיד לאחר ההדמיה, הסר הכנסת תרבות רקמה אחת מצלחת ששת הבאר והעבר בזהירות את התוסף לשקית פוליאתילן סטרילית המכילה 20 מיליליטר של מדיום ניסיוני מחומם מראש עם 95%חמצן ו-5% פחמן דו-חמצני.

בזהירות להסיר את כל בועות האוויר ולאטום את השקית סטרילית על ידי פיתול החלק העליון והחלת מהדק פלסטיק. ודא כי כל שקית סטרילית מסומנת כראוי עם הצלחת וזיהוי היטב. לאחר העברת כל תבומת רקמה להכניס לשקית סטרילית בודדת, מניחים את השקיות ואת שש צלחות גם עם מדיום ניסיוני לתוך החממה 37 מעלות צלזיוס.

לאחר שעה, בזהירות לארוז את שקיות סטריליות עם תרבות הרקמה מכניס בקופסאות פלסטיק בתוך קופסה מוסדר תרמית מלא במים מיונים ב 37 מעלות צלזיוס. המים צריכים לשמור את הפרוסות האורגנוטיפיות בטמפרטורה פיזיולוגית לאורך כל פרוטוקול החשיפה לגלי הלם. ללבוש מגפי מגן בהון פלדה, מעיל מעבדה, וכפפות במהלך הכנת צינור ההלם ואת החשיפה גלי הלם.

השתמש במוט ריק כדי לנעול את מסגרת מחזיק התיק הסטרילי לאוגן דיסטלי צינור ההלם להבטיח כי החור המרכזי מיושר עם שקע צינור ההלם. חיישן 1, מתמר לחץ, ממוקם בחלק האמצעי של החלק המונע, וחיישן 2 נמצא בגן הדיסטלי של צינור ההלם. חבר מתמרים לחץ אלה לאוצילוסקופ באמצעות יחידת כוח מקור נוכחית והדליק את אוסצילוסקופ.

ודא שסתום סולנואיד של צינור ההלם ובקרת זרימה סגורים, ולאחר מכן לפתוח את קו האוויר הדחוס החיצוני לטעון את שסתום סולנואיד ל 2.5 בר. פתח את שסתום הבטיחות צילינדר אוויר דחוס לאט לפתוח את וסת הלחץ כדי להגביר את הלחץ על כחמישה בר. לאחר מכן, להכין דיאפרגמות על ידי חיתוך 23 גיליונות פוליאסטר עבה מיקרון לתוך 10 על ידי 10 ריבועים סנטימטר.

הכן ידיות מקלטת autoclave ולתקוע אותם בחלק העליון והתחתון של כל דיאפרגמה. מקם דיאפרגמה אחת בהפרה וודא שהם מרוכזים. לאחר מכן, מהדקים את הסרעפת באמצעות ארבעה ברגים ואגוזים M24.

לעצב אותם ברצף בצורה סימטרית באלכסון תוך הבטחת הסרעפות הם ללא קמטים. מהדקים שקית סטרילית בתחנה אנכית על מסגרת המחזיק ומבטיחים כי פני השטח של תרבות הרקמה הכנס עם פרוסות ההיפוקמפוס האורגנוטיפיות פונה לשקע צינור ההלם ותרבות הרקמה מוכנסת בתוך השקית הסטרילית. עבור תצורת הסרעפת הכפולה, הלחץ המתפרץ תלוי בהיפרפרנציאל לחץ הגז בין הנהג לתא ההפרה הכפול.

לכן, עבור הסרעפות להתפוצץ בצורה מבוקרת, שסתום בטיחות הפרה כפולה נפתח באופן ידני לאחר הלחצים היעד הם הגיעו. לשים על מגיני האוזן ומשקפי בטיחות אם לא כבר שחוקים. סגור את שסתום סולנואיד.

הפעל את יחידת הכוח הנוכחית המשמשת כמקור כדי להשיג את נתוני גלי ההלם. לתפעל את ידית בקרת זרימה על לוח הבקרה צינור ההלם לאט ללחוץ על קטע נפח הנהג של צינור ההלם עבור תצורת דיאפרגמה אחת או הן את סעיף נפח הנהג ואת קטע הפרה כפולה של צינור ההלם עבור תצורת דיאפרגמה כפולה. ברגע שהסרעפת נקרעת, סגר במהירות את זרימת האוויר הדחוסה באמצעות ידית הזרימה ופתח את שסתום סולנואיד.

השילוב האידיאלי של פרמטרים גלי הלם צריך להיות מספיק כדי לגרום לפגיעה ברקמה אבל לא כל כך גבוה שזה גורם לתרבות הרקמה להכניס או עיוות שקית סטרילי או קרע. לאחר חשיפת כל פרוסה לגל צינור הלם יחיד, להחזיר אותו מיד לתיבה התרמית מוסדר. לאחר מכן קחו את התיק הסטרילי הבא מהתיבה והדקו אותו על מסגרת המחזיק.

בצע את המתג בצורה חלקה ומהירה כדי למנוע קירור של המדיום הניסיוני כמו טמפרטורות מתחת 37 עלול להפריע להתפתחות פציעה. לאחר שכל מוסיף תרבות הרקמה נחשף לפרוטוקול גלי הלם או זיוף, להחזיר את תרבות הרקמה מכניסה ל בארות שלהם בצלחת המקורית שש באר ולחזור החממה עד הדמיה נוספת. תמונה זו היא דוגמה מייצגת של גל הלם שהושג באמצעות סרט פוליאסטר עבה 23 מיקרון עם 55 לחץ יתר שיא קילו-פסקל.

מהירות גלי ההלם הייתה 440 מטר לשנייה. גם גלי הלם של 50 וגם 55 קילו-פסקל גרמו לפציעה משמעותית שהתפתחה לאורך כל פרוטוקול 72 השעות בהשוואה לקבוצת הזיוף. הפציעה כתוצאה מחשיפה לגל לחץ יתר של 55 קילו-פסקל הייתה גבוהה משמעותית מאשר לאחר 50 קילו-פסקל ב-48 שעות ו-72 שעות, מה שמוכיח שהתפתחות הפציעה פרופורציונלית לעוצמת גלי ההלם.

תמונה זו מציגה פרוסה 72 שעות לאחר פיצוץ של 50 קילו-פסקל. רמה גבוהה של פציעה מפוזרת נראית לעין. פציעה בולטת יותר לאחר פיצוץ 55 קילופסקל שיא לחץ יתר.

תמונת פלואורסצנטיות פרופידיום יודיד זו מציגה פרוסה אורגנותית מניסוי מזויף. פרוסת הזיוף מראה רמות נמוכות של פלואורסצנטיות. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על טכניקה אספטית לאורך כל הדרך, כדי למנוע זיהום של הרקמה כדי לתפעל תרבות רקמות במהירות אך בעדינות רבה, כדי למנוע נזק לתאים לא מכוונים.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו כתמי שפעת חיסונית על מנת לענות על שאלות נוספות כמו מה הם המנגנונים של מוות תאי המעורבים בפיצוץ הנגרמת פגיעה מוחית טראומטית? טכניקה זו מאפשרת בדיקה תפוקה גבוהה עבור חוקרים בתחום neuroprotection לחקור את הפוטנציאל של תרופות כדי למנוע את התפשטות מוות של תאים רקמת המוח לאחר חשיפה גלי הלם הפיצוץ.