על פי קריטריוני האבחון הבינלאומיים האחרונים להפרעות ספקטרום נוירומייליטיס אופטיקה, אנטי AQP4 IgG נחשב סמן ביולוגי אבחון הליבה. זיהוי IgG נגד AQP4 על ידי בדיקה מבוססת תאים יכול להקל על אבחון קליני. לכן, בדיקה מבוססת תאים היא רגישה וספ ספציפית יותר משיטות זיהוי אחרות.
וזה יכול להיות מיושם הן על אבחון קליני והן על המחקרים המדעיים. ראשית, הביאו את דגימות הסרום של המטופל, את מגלשת הביוצ'פ, את אבקת ה-PBS ואת ה-TWEEN 20 ערכת ההתמדה המבוססת על תאים בקירור לטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להכין יותר מ 200 מיליליטר של מאגר לשטוף PBS המכיל 0.2 אחוז TWEEN 20 עבור כל שקופית biochip.
השתמש במאגר הכביסה כדי לבצע דילול טורי של פי 10 מכל דגימת סרום. הכן פקדים חיוביים ושליליים בהתאם להוראות היצרן. הוסף 30 מיקרוליטרים של דילול סדרתי של המדגם, השליטה החיובית והבקרה השלילית, לחמישה שדות תגובה בודדים במגש ריאגנט.
החזק את החלקת הביוצ'יק על ידי השקופיות שלה ולהסיר את כיסוי המגן שלה מבלי לגעת בשדות התגובה שלה. מניחים את השקופית על גבי מגש הריג'נט ו דגירה ההתקנה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. יש לשטוף בעדינות את מגלשת הביו-שבב עם חיץ הכביסה.
ואז לטבול אותו בתוך מקור 500 מיליליטר מלא 100 מיליליטר של חיץ לשטוף, ולהשאיר אותו בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. מוציאים את מגלשת השבבים ממאגר הכביסה. השתמש במגבת נייר כדי למחוק בזהירות כל חיץ שנותר מחוץ לשדות התגובה.
תן להחליק אוויר יבש למשך שעה עד שתי דקות. בחדר החשוך, הוסיפו 25 מיקרוליטרים של נוגדנים משניים פלואורסצנטיים לכל שדה תגובה של מגש ריאגנט. מניחים את השקופית על גבי מגש הריג'נט ו דגירה ההתקנה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות.
יש לשטוף בעדינות את מגלשת הביו-שבב עם חיץ הכביסה. ואז לטבול אותו בתוך מקור 500 מיליליטר מלא 100 מיליליטר של חיץ לשטוף טרי, ולהשאיר אותו בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. מוציאים את מגלשת השבבים ממאגר הכביסה.
השתמש במגבת נייר כדי למחוק בזהירות כל חיץ שנותר מחוץ לשדות התגובה. תן להחליק אוויר יבש למשך שעה עד שתי דקות. בזהירות להוסיף טיפה אחת של המדיום הטבעה לכל שדה תגובה על שקופית biochip.
לבסוף, לאטום את החלקת biochip עם כיסוי תוך הימנעות בועות אוויר ולהמשיך עם הדמיה. עוצמת הפלואורסצנטיות החלשה של השליטה השלילית שנצפתה באזור הנגוע מצביעה על הכריכה הלא ספציפית של הנוגדן המשני. ההשוואה בין התעצמויות הפלואורסצנטיות שזוהו של השליטה החיובית באזורים הנגועים והבלתי נגועים מצביעה על הכריכה הספציפית של האנטי-AQP4 IgG ל- AQP4M1 בתאים הנגועים.
הסרום השלילי נגד AQP4 IgG מראה דפוסי קשירה דומים לשליטה השלילית באזורים נגועים ולא נגועים. הנסיוב החיובי מראה דפוסי קשירה הדומים לשליטה החיובית באזורים נגועים ולא נגועים. דגימות נחשבות אנטי AQP4 IgG חיובי כאשר פלואורסצנטיות מגדילה הטרוגנית באזור הנגוע.
עוצמת הפלואורסצנטיות מתואמת לטיטר אנטי AQP4 IgG בסרום. דגימות נחשבות כנראה חיוביות כאשר רק מספר קטן של תאים באזור המהורהר מראים שפעת פלואורסצנטיות הניתנת לגילוי. יש להתייחס לדגימה כשלילית נגד AQP4 IgG כאשר עוצמתה באזור הנגוע חזקה רק באופן הומוגני מאשר באזור הלא נגוע.
הימנעות בועות אוויר הוא חיוני וקשה. כדי למנוע בועות אוויר, תחילה להשתמש פיפטה כדי למנוע בועות אוויר טיפות. שנית, בעת החלת שקופית הביו-שבב על מגש הריג'נט, תחילה תן לצד אחד של השקופית לגעת ב טיפות ולאחר מכן החלק את השקופית לאט.
בנוסף, אל תיגע בשדות התגובה לאורך כל הניסוי.
