신경수염 광학 스펙트럼 장애에 대한 최근의 국제 진단 기준에 따르면, 안티 AQP4 IgG는 핵심 진단 바이오마커로 간주됩니다. 세포 기반 분석체에 의한 안티-AQP4 IgG 검출은 임상 진단을 용이하게 할 수 있다. 따라서 세포 기반 분석법은 다른 검출 방법보다 더 민감하고 특이적입니다.
그리고 그것은 임상 진단과 과학적 연구 모두에 적용 될 수있다. 먼저, 냉장 된 세포 기반 분석 키트에서 환자의 혈청 샘플, 바이오 칩 슬라이드, PBS 분말 및 TWEEN 20을 실온으로 가져 온다. 그런 다음 각 바이오칩 슬라이드에 대해 0.2% TWEEN 20을 함유한 PBS 워시 버퍼 200밀리리터 이상을 준비합니다.
워시 버퍼를 사용하여 각 혈청 샘플의 10배 연속 희석제를 만듭니다. 제조업체의 지침에 따라 양수 및 음수 컨트롤을 준비합니다. 시약 트레이의 5개의 개별 반응 필드에 시료, 양성 제어 및 음의 대조군의 10배 직렬 희석제 30마이크로리터를 추가합니다.
슬라이드로 바이오칩 슬라이드를 잡고 반응 필드를 건드리지 않고 보호 커버를 제거합니다. 슬라이드를 시약 트레이 위에 놓고 실온에서 30 분 동안 설정을 배양하십시오. 세척 버퍼로 바이오칩 슬라이드를 부드럽게 헹구십시오.
그런 다음 세척 버퍼의 100 밀리리터로 채워진 500 밀리리터 비커에 담그고 10 분 동안 실온에 둡니다. 세척 버퍼에서 바이오 칩 슬라이드를 꺼내. 종이 타월을 사용하여 반응 필드 외부에서 남은 버퍼를 조심스럽게 닦아냅니다.
슬라이드를 1~2분 동안 공기 건조시키세요. 어두운 방에서, 시약 트레이의 각 반응 필드에 형광 이차 항체의 25 마이크로 리터를 추가합니다. 슬라이드를 시약 트레이 위에 놓고 실온에서 30 분 동안 설정을 배양하십시오.
세척 버퍼로 바이오칩 슬라이드를 부드럽게 헹구십시오. 그런 다음 신선한 세척 버퍼 100 밀리리터로 채워진 500 밀리리터 비커에 담그고 10 분 동안 실온에 둡니다. 세척 버퍼에서 바이오 칩 슬라이드를 꺼내.
종이 타월을 사용하여 반응 필드 외부에서 남은 버퍼를 조심스럽게 닦아냅니다. 슬라이드를 1~2분 동안 공기 건조시키세요. 생체 칩 슬라이드의 각 반응 필드에 포함 매체1 방울을 조심스럽게 추가하십시오.
마지막으로, 공기 거품을 피하면서 커버 유리로 바이오 칩 슬라이드를 밀봉하고 이미징을 진행합니다. 감염된 부위에서 관찰되는 음수 대조군의 약한 형광 강도는 이차 항체의 특이하지 않은 결합을 나타낸다. 감염된 및 감염되지 않은 영역에서 양성 제어의 검출된 형광 강도 사이의 비교는 감염된 세포에서 AQP4 GG에 대한 항-AQP4 IgG의 특이적 결합을 나타낸다.
항 AQP4 IgG 음성 혈청은 감염및 감염되지 않은 영역에서 음의 대조군과 유사한 결합 패턴을 보여줍니다. 양성 혈청은 감염된 부위와 감염되지 않은 영역에서 양성 대조군과 유사한 결합 패턴을 보여줍니다. 샘플은 감염된 지역에서 형광 이질이 증가할 때 안티-AQP4 IgG 양성으로 간주됩니다.
형광의 강도는 혈청에서 안티 AQP4 IgG 티터와 상관 관계가 있습니다. 견본은 단지 전염된 지역에 있는 세포의 소수만이 검출가능한 형광 강도를 보여줄 때 아마 긍정적인 것으로 여겨질 것입니다. 샘플은 감염된 부위의 강도가 감염되지 않은 부위보다 균질적으로 더 강할 때 항 AQP4 IgG 음수로 간주되어야 합니다.
기포를 피하는 것은 매우 중요하고 어렵습니다. 기포를 제거하려면 먼저 파이펫을 사용하여 물방울의 기포를 피하십시오. 둘째, 시약 트레이에 바이오칩 슬라이드를 적용하는 동안 먼저 슬라이드의 한쪽이 방울을 만지고 슬라이드를 천천히 평평하게 합니다.
또한, 실험 전반에 걸쳐 반응 필드를 만지지 마십시오.
