人血清抗水药物蛋白-4 免疫球蛋白 g 的细胞检测

根据最近国际神经骨髓炎视谱障碍诊断标准，抗AQP4 IgG被认为是一种核心诊断生物标志物。通过基于细胞的检测进行抗AQP4IgG检测，可促进临床诊断。因此，基于细胞的检测方法比其它检测方法更灵敏、更具体。

并可应用于临床诊断和科学研究。首先，将患者的血清样本、生物芯片幻灯片、PBS 粉末和 TWEEN 20 从冷冻细胞检测试剂盒带到室温。然后，为每张生物芯片幻灯片准备超过 200 毫升的 PBS 洗涤缓冲液，其中含有 0.2% TWEEN 20。

使用洗涤缓冲液对每种血清样品进行10倍的连续稀释。根据制造商的说明准备正负控制。将样品的10倍连续稀释、正控和负对，加入30微升，加入试剂盒上的5个单独反应场。

握住生物芯片幻灯片的幻灯片，在不接触其反应场的情况下拆下其保护盖。将幻灯片放在试剂盒顶部，并在室温下孵育设置 30 分钟。用洗涤缓冲液轻轻冲洗生物芯片幻灯片。

然后浸入装满 100 毫升洗涤缓冲液的 500 毫升烧杯中，并在室温下浸泡 10 分钟。从洗涤缓冲液中拿出生物芯片幻灯片。使用纸巾小心地从反应场外部擦去剩余的缓冲液。

让滑梯风干一到两分钟。在暗室中，在试剂盒的每个反应场中加入25微升荧光二次抗体。将幻灯片放在试剂盒顶部，并在室温下孵育设置 30 分钟。

用洗涤缓冲液轻轻冲洗生物芯片幻灯片。然后浸入一个500毫升的烧杯中，装满100毫升的新鲜洗涤缓冲液，并在室温下浸泡10分钟。从洗涤缓冲液中拿出生物芯片幻灯片。

使用纸巾小心地从反应场外部擦去剩余的缓冲液。让滑梯风干一到两分钟。小心地将一滴嵌入介质添加到生物芯片幻灯片的每个反应场中。

最后，用盖玻璃密封生物芯片幻灯片，同时避免气泡，然后继续成像。在感染区域观察到的阴性对照的微弱荧光强度表示二级抗体的不特异性结合。在受感染和未感染区域检测到阳性对照的荧光强度之间的比较表明，抗AQP4 IgG与感染细胞中AQP4M1的具体结合。

抗AQP4 IgG阴性血清显示与受感染和未感染区域阴性控制类似的结合模式。阳性血清显示与受感染和未感染区域的阳性控制类似的结合模式。当荧光在感染区域异质增加时，样品被认为是抗AQP4IgG阳性的。

荧光强度与血清中抗AQP4IgG滴度相关。当转染区域中只有少数细胞显示可检测到的荧光强度时，样本可能被认为是阳性的。当样本在感染区域的强度仅与未感染区域的强度均匀强时，应将其视为抗 AQP4 IgG 阴性。

避免气泡是至关重要和困难的。要消除气泡，请首先使用移液器以避免液滴中的气泡。其次，在将生物芯片幻灯片涂到试剂盒上时，首先让幻灯片的一侧触摸液滴，然后缓慢地将幻灯片水平。

此外，不要在整个实验中接触反应场。