מודל זה של דלקת ריר הנגרמת על ידי כימותרפיה יכול לשמש כדי לקבוע נקודות קצה חשובות סמנים מתרבים של פגיעה במעיים קטנים ו hyperproliferation פיצוי בעכברים. שיטה זו היא זמן וחסכוני וקל לביצוע. בשיטה מתוקקנת כמו זו, קל יותר להשוות נקודות קצה אנליטיות עם וריאציות מעטות.
עבור אינדוקציה 5-Florauracil או 5FU mucositis, לטעון מזרק 1 מיליליטר מצויד מד 27 על ידי מחט 19 מילימטר עם הנפח המתאים של 5FU ולרסן באופן ידני עכבר הנמען. תוך שמירה על העכבר באחיזה יציבה אך עדינה, לחשוף את הצד הגחוני של החיה ולהכניס את המחט לתוך חלל intraparitoneal בתוך אחד הרבעים התחתונים של הבטן. לאחר מכן, שאפו כדי להבטיח מיקום מחט תקין ולהזריק את 5FU.
בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, כימות 4-ברומו-Deoxyuridine או BrdU, לשקול עכבר בעלי חיים פצוע 5FU ולספק 5 מיליגרם לקילוגרם של BrdU על ידי הזרקה תוך-ניתוחית ברדס אדים. 150 דקות לאחר injetion BrdU, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן, להקליט את המשקל של העכבר הרדמה, ולמקם את החיה במצב סופין. בצע לפרוטומיה כדי לחשוף את חלל הבטן ולעשות חתך של חלל החזה כדי להציג pneumothorax.
חותכים מעולה על pylorus, בזהירות לחלץ את רקמת המעי מן החיה עד cecum הוא הגיע. באמצעות מלקחיים, בעדינות להדק את לומן proximal סגור ולהשתמש מזרק 10 מיליליטר מצויד מחט 25 מד כדי לשטוף את המעי הדק עם מלוחים. לאחר מכן מניחים את המעי המרוקן על נייר סופג נקי כדי להסיר בזהירות את תסנון המלח העודף.
לאיסוף רקמות, לקצור את המעי הדק מן החיה מוזרק כפי שהוכח רק להקליט את המשקל של הרקמה הסמקה. לאחר עיבוד היסטולוגי, ניתן לדמיין את הרקמה תחת המטרה 10x של מיקרוסקופ אור המחובר למצלמה כדי להשיג תמונות היסטולוגיות של הרקמה שנקטפו. כדי למדוד את האזור של התאים האימונו-רטרואקטיביים של BrdU, פתח את תמונת העניין בתמונה J ופתח את תמונת המיקרומטר של הבמה.
השתמש בכלי בחירת הקו הישר כדי לצייר קו ישר בתדמית מיקרומטר כדי להגדיר מרחק ידוע ולבחור קנה מידה מוגדר בתפריט הניתוח. הזן ערך בתיבת המרחק הידועה והגדר את יחידת האורך בתיבת האורך של יחידת האורך. פתח תמונה מעניינת כדי למדוד את האזור של התאים החיסונים של BrdU לכל קריפטה, והגדר את גרפיקת הצבע ל- 8 סיביות מתחת לתפריט סוג התמונה.
הגבר את החדות של התמונה תחת ניגודיות משופרת של תהליכים והגדר את הפיקסלים הרוויים ל- 0.4%החל סף על התמונה כדי למקטע את החיוביות החיסנית ולבחור התאמת תמונה. בחר סף ואדום, הזז את סרגל הסף כדי לבחור סף של סביב 10 עד 20 אחוזים. לאחר מכן בחרו קריפטה מכוונת היטב, ולהשתמש בכלי הבחירה ביד חופשית כדי לסמן את האזור שסביבו.
כדי למדוד את אזור הסף, פתח את לשונית הניתוח ובחר נתח חלקיקים. בחלון ניתוח החלקיקים, הגדר את הגודל ל- 20 עד אינסוף ולחץ על יחידות הפיקסלים של התיבה. הגדר את המעגליות לאפס לאפס והגדר הצגה לקווי מתאר.
לאחר מכן לחץ על תוצאות התצוגה, סכם וכלול תיבות חורים. תוצאות המדידה יוצגו בחלון הסיכום. כדי למדוד את עומק הקריפטה, פתחו תמונה בזן לייט והתחברו למצלמה.
צלם תמונות במצב מצלמה עם מטרה של 20x, ולעבור למצב עיבוד כדי לפתוח את התמונה. מעבר לתצוגת המידה. השתמש בכלי הקו כדי להתחיל שורה בחלק התחתון של קריפטה מכוונת היטב, מסיים את הקו בחלק העליון של הקריפטה.
לאחר מכן לייצא את המידות ולחשב את הממוצע של עומק הקריפטה ולמלא כמו גובה. משקל המעי הדק יורד מיום 2 ליום 4, מה שמרמז על ירידה במסת enterocyte. שימו לב, ביום 5, המשקל אינו שונה באופן משמעותי ממשקל היום 0 על בעלי חיים מטופלים.
ההתפשטות הנמדדת על ידי התאגדות BrdU כמעט בוטלה בימים 1 ו -2, אבל בימים 4 ו -5, יש בערך פי ארבעה וחמישה עליות בהתפשטות שלהם, בהתאמה. זה hyperproliferation הוא ציין גם בעת מדידת עומק הקריפטה. בשלב ההתחדשות של mucositis, יש מתאם חזק בין שילוב BrdU ועומק קריפטה כי הוא לא נצפה בשלב החריף, מה שמרמז כי באמצעות עומק קריפטה כנקודת קצה עשוי להיות מתאים בשלב החריף של mucositis.
עכברים מהודקים, עם הפרשת L-cell לא מספקת, מדגימים ירידה משמעותית במשקל הגוף וירידה במשקל המעי הדק בשלב ההחלמה, בהשוואה לזה שנצפה בעכברים מסוג 5-FU פראיים. יתר על כן, העכברים הטרנסג'נים אינם מצליחים להראות היפר-פרולייציה מפצה מכיוון שהקריפטות קצרות משמעותית מאשר בעכברים מסוג פראי ובבקרות בריאות. בעת ניסיון הליך זה, הקפד לרוקן את המעי הדק לחלוטין, ולהסיר את מלוחים עודף לפני שקילה של הרקמה כדי לקבל את משקל המעי הדק בלבד.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך לנהל, לאסוף, ולקבוע נקודות קצה חשובות של פגיעה במעיים קטנים. ולהשיג ביעילות נתונים לשחזור. אל תשכח כי עבודה עם תרכובות כימיות כגון 5FU ו BrdU יכול להיות מסוכן, כי אמצעי זהירות, כגון שימוש במעיל מעבדה, כפפות, מכסה המנוע אדים תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליכים אלה.
