נזק איסכמי גורם לסביבה פרו דלקתית עוינת המשפיעה על הישרדותם של תאים מושתלים. הפרוטוקול שלנו מציג שיטה חלופית לאספקת תרופות ביולוגיות על ידי עקיפת התגובה החיסונית הראשונית לפציעה. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שהוא מאפשר לנהל טיפולים שבוע לאחר פציעה, מחקה את הטיפול בסביבה הקלינית.
ההתמקדות העיקרית שלנו היא במודל הפציעה של עשן וההשתלה של תאי STEM. עם זאת, גישה זו יכולה גם להיות מנוצלת עבור מודלים של מחלות דלקתיות המערבת כניסתה של טיפולים ביולוגיים. התחל על ידי autoclaving כל המכשירים הכירורגיים.
אם יש לבצע מספר ניתוחים בפגישה אחת, יש לנקות את המכשירים לאחר כל חיה ולנקות אותם מחדש באמצעות מעקר חרוזים חם. באופן תת עורי לנהל משכך כאבים, לשקול את החיה, ולה להזין את המשקל לתוך מכונת ההנשמה. לגלח את הצד השמאלי של החזה מעצם החזה לרמה של הכתף ולהחיל קרם depilatory כדי להסיר פרווה עודפת.
כדי למנוע קריסת ריאות, לשמור על לחץ תפוגת הקצה החיובי בשני סנטימטרים של מים עבור הליך reperfusion קשה ולשנות אותו לשלושה סנטימטרים של מים עבור הזרקה מאוחרת של הליך התאים. לאחר הרדמה של העכבר, צנרר אותו עם צינור אנדוטראצ'ל 20 מד ולהעביר אותו כרית חימום מבוקרת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 35 עד 37 מעלות צלזיוס. מניחים את העכבר ב recumbency בצד השני עם קצה הגולגולת בצד שמאל ו caudal בצד ימין.
לשפשף את האזור הכירורגי לסירוגין בין יוד povidone ספוגיות אלכוהול שלוש פעמים ולהחיל משחה עיניים על שתי העיניים. השתמש באזמל להב מספר 10 כדי לבצע חתך אנכי 2.5 מילימטרים מימין לפטמה השמאלית ביותר בשדה המבט, ולאחר מכן השתמש במספריים כדי לחתוך דרך שכבות השריר השטחיות עד שהשריר והצלעות הבין-קומתיים נראים לעין. תוך כדי הרמת הצלעות והרקמה שמסביב, חותכים דרך החלל הבין-צלעי בין הצלעות הרביעית והחמישית, ואז מכניסים את מפולג העפעפיים לחלל הפתוח.
לסגת pericardium באמצעות מדפים מעוגלים, הזזת הריאה כלפי מעלה ומחוץ לתצוגה. להעביר תפר ניילון 9-0 דרך שריר הלב מתחת לעורק LAD 2.5 מילימטרים דיסטלי אל האוריאל השמאלי שמירה על תנועה חלקה ועקבית כדי למנוע קריעת הרקמה או לנקב כלי דם גדול. לקשור קשר מרובע רופף, ואז למקם סנטימטר אחד של צינורות פוליאתילן בתוך הקשר הרופף.
לאבטח את התפר סביב צינורות ולאשר איסקימיה על ידי חיוורון הפרעות קצב חדרית, ולאחר מכן לשחרר לאחר 35 דקות. לאחר הסרת הצינורות, לחכות חמש דקות כדי לאשר חליטה מחדש של שריר הלב. מניחים צינור קטטר IV 24 מד לתוך חלל בית החזה חלל בין-קוסטלי אחד מימין לפתיחה.
השתמש 6-0 תפרים נספגים כדי לסגור את החתך הבין-קומתי בתבנית מופרעת פשוטה ואת שכבת השריר בתבנית תפר רציפה. לאחר סגירת שכבת השריר השטחית, להסיר את צינור החזה תוך משיכת האוויר מן חלל בית החזה עם מזרק שחפת מיליליטר אחד. סגור את חתך העור עם תפר נספג 6-0 בתבנית מזרן אופקית רציפה.
בסיום, לנהל 1.5 מיליליטר של מלוחים חמים תת עורית ולהחיל משחה אנטיביוטית משולשת לאתר החתך כדי למנוע זיהום. מעבירים את העכבר לכלוב ללא מצעים או לכלוב עם מצעים מכוסים על כרית חמה וטמפרטורה של 35 עד 37 מעלות צלזיוס עד שהוא התאושש לחלוטין. לאחר הכנת וצנרור העכבר כפי שתואר קודם לכן, להסיר את התפר משכבת העור עם מספריים ומדפים, ולאחר מכן להשתמש מספר 10 אזמל לעשות חתך באותו מיקום כמו הניתוח הקודם.
המשך לחתוך דרך רקמת הצלקת עד תפר שכבת השריר גלוי, ולאחר מכן להשתמש במספריים ומלקחיים כדי להסיר את התפר לחתוך את שכבת השריר פתוח. הסר את התפרים המחזיקים את הצלעות יחד והמשך לחתוך דרך השריר הבין-קומתי מהחתך הקודם. מניחים את מפשק העפעפיים בחלל הבין-חלק ומאתרים את האזור של הרצועה הקודמת.
לטעון 300, 000 תאי STEM mesenchymal מושעה ב 20 microliters של PBS לתוך מזרק אינסולין 30 מד לכופף את המחט מעט כדי להשיג את הזווית הנכונה להזרקה. נע בכיוון מן איפקס לכיוון בסיס הלב, להכניס את המזרק לתוך האזור peri-infarct עד פתיחת המחט הוא לגמרי בתוך שריר הלב, ואז לאט להזריק את התאים לתוך שריר הלב, לחכות שלוש שניות ולהסיר את המחט. שימו לב ללב מקרוב במשך שלוש דקות כדי לוודא שאין תגובה חריגה לתאים כגון פרפור חדרי.
לאחר שלוש דקות, מניחים צינור קטטר IV 24 מד לתוך חלל בית החזה חלל בין-חלק אחד מימין לפתיחה. סגור את שכבות השרירים והעור הבין-קוסטליות והסר את צינור החזה כפי שתואר קודם לכן. לנהל 1.5 מיליליטר של מלוחים חמים תת עורית ולהחיל משחה אנטיביוטית משולשת לאתר החתך כדי למנוע זיהום.
מעבירים את העכבר לכלוב או כלוב ללא מצעים עם מצעים מכוסים על כרית חמה עד שהוא משוחזר במלואו. אקו-קרדיוגרמה ואלקטרוקרדיוגרמה לאחר הניתוח בוצעו ביום ההליך השתלת תאי STEM, המאשר אוטם וירידה בתפקוד התכווצות חדרית. בדיקה נוספת של הנתונים הראתה כי שבר הפליטה וקיצור השברים ירדו בעכברים שקיבלו פגיעה איסכמית, בעוד שהנפחים הדיאסטאליים והסיסטוליים בסוף גדלו.
מכתים Trichrome מאסון של רקמת שריר הלב שבעה ימים לאחר פציעה הראו תצהיר קולגן מוגברת דילול של הקיר החדר השמאלי בלבבות של עכברים שקיבלו פגיעה איסכמית. הדמיה ביולומינסנטית של Vivo או BLI בוצעה ביום שלאחר השתלת תאי STEM קסנצ'ימליים. מסירה מוצלחת של MSCs מתדגמת על ידי אות BLI בהשוואה לעכברים שגרמו לפגיעה בהתרשכות אצ'מיה אך לא קיבלו MSCs.
בעת ניסיון פרוטוקול זה, יש לזכור כי תנועות מכוונות קטנות בעת חיתוך דרך intercostals, קשירה כלי השיט, והזרקת תאים חיוניים למניעת נזק מיותר ללב או הריאה בשדה המבט. הליכים אלה מציעים את היכולת לפקח על תפקוד הלב לאחר ההשתלה באמצעות אולטרסאונד, כדאיות התא באמצעות הדמיה bioluminescence, או טכניקות מולקולריות או ביוכימיות נוספות בהתאם לטיפול המשמש.
