İskemik hasar, nakledilen hücrelerin hayatta kalmasını etkileyen düşmanca pro-inflamatuar bir ortama neden olur. Protokolümüz yaralanmaya karşı ilk bağışıklık yanıtını atlatarak biyolojik lik sağlamak için alternatif bir yöntem sunmaktadır. Bu protokolün en büyük avantajı, yaralanmadan bir hafta sonra terapötik tedavinin mümkün kAlınması ve klinik ortamda tedaviyi taklit etmesidir.
Öncelikli odak noktamız iskemi reperfüzyon yaralanma modeli ve KÖK hücrelerin naklidir. Ancak, bu yaklaşım aynı zamanda biyolojik tedavilerin giriş içeren inflamatuar hastalık modelleri için kullanılabilir. Tüm cerrahi aletleri otoklavlayarak başlayın.
Birden fazla ameliyat tek seansta yapılacaksa, her hayvandan sonra aletleri temizleyin ve sıcak boncuk sterilizatörü kullanarak yeniden sterilize edin. Subkutan analjezik yönetmek, hayvan tartmak, ve ventilatör içine ağırlık girin. Göğüs kafesinin sol tarafını omuz seviyesine kadar tıraş edin ve fazla kürkü çıkarmak için tüy dökücü krem uygulayın.
Akciğer çökmesini önlemek için, iskemi reperfüzyon prosedürü için suyun iki santimetre de pozitif son ekspiratuar basıncı korumak ve hücrelerin prosedürü gecikmiş enjeksiyon için su üç santimetre değiştirin. Fareyi anestezi ettikten sonra, 20 gauge endotrakeal tüp ile entübe ve 35 ila 37 santigrat derece bir vücut sıcaklığı korumak için kontrollü bir ısıtma yastığı aktarın. Fareyi solda kranial ucu ve sağdaki kaudal uç ile lateral recumbency yerleştirin.
Povidon iyot ve alkol bezleri arasında değişen cerrahi bölgeyi üç kez temizleyin ve her iki göze de oftalmik merhem uygulayın. Görüş alanında sol en sol meme 2,5 milimetre dikey bir kesi yapmak için bir numara 10 bıçak neşter kullanın, sonra interkostal kas ve kaburga görünür olana kadar yüzeysel kas katmanları kesmek için makas kullanın. Kaburga ve çevre doku kaldırarak, dördüncü ve beşinci kaburga arasındaki interkostal boşluk üzerinden kesilmiş, sonra açık alana göz kapağı retraktör eklemek.
Kavisli forceps kullanarak perikard geri çekin, yukarı ve görüş dışında akciğer hareket. LAD arter altında miyokardium üzerinden 9-0 naylon dikiş geçirin 2.5 milimetre distal sol auricle doku yırtılması veya büyük bir kan damarı delinmesi önlemek için düzgün ve tutarlı bir hareket koruyarak. Gevşek bir kare düğüm kravat, sonra gevşek düğüm içinde polietilen boru bir santimetre yerleştirin.
Tüpün etrafındaki sütün etrafını sabitleyin ve pallor ve ventriküler aritmi ile iskemiyi doğrulayın, 35 dakika sonra serbest bırakın. Tüpü çıkardıktan sonra miyokardin yeniden perfüzyonu onaylamak için beş dakika bekleyin. 24 gauge IV kateter tüpünü açılışın sağındaki torasik kaviteye bir interkostal alana yerleştirin.
Basit bir kesik desen ve sürekli dikiş desen kas tabakası interkostal kesi kapatmak için 6-0 emilebilir dikişkullanın. Yüzeysel kas tabakasını kapattıktan sonra, bir mililitre tüberkülin şırınga ile göğüs boşluğundan hava çekerken göğüs tüpünü çıkarın. Sürekli yatay yatak desen 6-0 emilebilir dikiş ile cilt kesisi kapatın.
Bittiğinde, 1.5 mililitre sıcak tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın. Fareyi, sıcak bir ped üzerinde kapalı yatak takımları ve 35 ila 37 derece lik bir sıcaklıkla tamamen iyileşene kadar yatak ücretsiz bir kafese veya kafese aktarın. Daha önce açıklandığı gibi fareyi hazırlayıp entübe ettikten sonra, makas ve forceps ile deri tabakasından dikiş çıkarın, sonra bir önceki ameliyat ile aynı yerde bir kesi yapmak için bir sayı 10 neşter kullanın.
Kas tabakası dikiş görünür olana kadar skar dokusu ile kesmeye devam edin, sonra dikiş kaldırmak ve açık kas tabakası kesmek için makas ve forceps kullanın. Birlikte kaburga tutan dikişleri çıkarın ve önceki kesi den interkostal kas kesme ye devam edin. Göz kapağı retraktörü interkostal alana yerleştirin ve önceki ligasyon alanını bulun.
20 mikrolitre PBS'de asılı olan 300, 000 mezenkimal KÖK hücreyi 30 gauge insülin şırıngasına yükleyin ve enjeksiyon için uygun açıyı elde etmek için iğneyi hafifçe bükün. Apex'ten kalbin tabanına doğru ilerleyerek, iğne açıklığı miyokardyumun içine tamamen girene kadar şırıngayı peri-enfarktüs bölgesine yerleştirin, sonra hücreleri yavaşça miyokardyuma enjekte edin, üç saniye bekleyin ve iğneyi çıkarın. Ventriküler fibrilasyon gibi hücrelere anormal bir reaksiyon olmadığından emin olmak için kalbi üç dakika boyunca yakından gözlemleyin.
Üç dakika sonra, 24 gauge IV kateter tüpünü açılışın sağındaki torasik kaviteye bir interkostal alana yerleştirin. Interkostal kas ve deri tabakalarını kapatın ve daha önce açıklandığı gibi göğüs tüpünü çıkarın. 1.5 mililitre ılık tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın.
Fareyi, tamamen iyileşene kadar sıcak bir ped üzerinde kapalı yatak takımları olan yatak serbest kafesine veya kafese aktarın. Postoperatif ekokardiyogram ve elektrokardiyogram, enfarktüs ve azalmış ventriküler kontraktil fonksiyonunun doğrulanmasıyla, STEM hücre implantasyonunun devam edildiği gün gerçekleştirildi. Verilerin daha ileri incelenmesi, iskemik yaralanma alan farelerde ejeksiyon fraksiyonunun ve fraksiyonel kısalansın azaldığını, son diyastolik ve sistolik hacimlerin arttığını gösterdi.
Yaralanma dan yedi gün sonra miyokard dokusunun Masson trikrom boyama sında iskemik yaralanma alan farelerin kalplerinde kollajen birikiminin arttığı ve sol ventrikül duvarının inceltilmesi saptanmıştır. İn vivo biyolüminesans görüntüleme veya BLI mezenkimal KÖK hücre implantasyonundan sonraki gün yapıldı. MSC'lerin başarılı bir şekilde teslimi, iskemi reperfüzyon yaralanmasına neden olan ancak MSC almayan farelere kıyasla BLI sinyali ile örneklenir.
Bu protokolü denerken, interkostalları keserken, damarı bağlarken ve enjekte eden hücreler görüş alanında kalp veya akciğerde aşırı hasar oluşmasını önlemek için hayati önem taşır. Bu işlemler, ultrason yoluyla transplantasyon sonrası kardiyak fonksiyonu izleme, biyolüminesans görüntüleme yoluyla hücre canlılığı veya kullanılan tedaviye bağlı olarak daha fazla moleküler veya biyokimyasal teknikler ile kardiyak fonksiyonu izleme olanağı sunar.
