לתאי גאמא-דלתא T יש פעילות ציטוטוקסית רבת עוצמה נגד סוגים רבים של סרטן, כולל לוקמיה מיאלואידית חריפה. עם זאת, מחזור תאי גמא-דלתא T בדם הם נדירים יחסית, במיוחד בחולים עם ממאירות. עירוי של תורם נגזר, X-vivo מורחב תאי גאמא דלתא T, יש הבטחה בהפחתת הישנות של לוקמיה, ושיפור ההישרדות של חולים עם לוקמיה מיאלואידית חריפה.
השיטה המוצעת משיגה הרחבה של יותר מ-200, פי 000 של תאי גמא-דלתא T, ומגיעים למינונים רלוונטיים מבחינה טיפולית של מוצר תאי גמא-דלתא T טהור ביותר, בשלושה שלבים קלים. אז קשירת IEL להתרחבות, דלדול תאי אלפא ביתא T על ידי מיון מגנטי והרחבה משנית של שפע עם AAPCs. השיטה המוצעת מרחיבה את התועלת של תאי גמא-דלתא T למחלות כגון סרטן ומחלות אוטואימוניות על ידי יצירת מספר רב של תאים שניתן להשתמש בהם מהמדף.
ניתן להתאים תהליך זה להרחבת תאי גמא-דלתא בשיטות העשרה שונות ולהוסיף מניפולציות נוספות כגון התמרה. הדגמת ההליך תהיה lithed בלוס אנג'לס, טכנולוג טיפול בתא, שלושה מהמעבדה שלי. התחל על ידי התרוממות דגימת המוצר תוססת, על מכשיר צנטריפוגה זרימה נגד, באמצעות מדיום ראשוני של תמיסת מלח מאוזנת Hanks, עם 1%אלבומין סרום אנושי המדיום המשני של תמיסת מלח או DPBS.
עם מהירות צנטריפוגת ההבהה ב 900 פעמים G, לאסוף שברים המבוססים על קצב הזרימה וזמן. לאסוף את הדגימות משבריר שתיים כדי לבצע את בדיקות סטריליות, ספירת תאים פנוטיפינג התא על ידי ציטומטריית זרימה. משבריר שתיים, להרחיב שבר לימפוציטים טהור של תאים בתרבית ב 10 פעמים 10 עד התא השישי לסנטימטר בריבוע, עם חמישה מיקרומול לליטר של חומצה זולדרונית ו 300 יחידות למיליליטר של Interleukin-2 ב bioreactor מערכת סגורה ליטר אחד.
לדגור על המערכת במשך שבעה ימים ב 37 מעלות צלזיוס, עם 5% פחמן דו חמצני. לאחר הדגירה, תאי קציר מבקבוק הביו-ריאקטור של המערכת הסגורה של ליטר אחד. כדי לעשות זאת, ריתוך סטרילי חבילת העברה ליטר אחד לקו האדום של bioreactor, ולהשתמש במשאבת התרופות המתאימה כדי להעביר את התאים לתוך חבילת ההעברה.
קח את הדגימות לבדיקה של סטריליות בינונית בילה, ספירת תאים פנוטיפינג התא על ידי ציטומטריית זרימה. מהדגימה הנותרת, להשעות מחדש את התאים בחמש פעמים 10 לתאים השמיניים למיליליטר, במאגר PBS-EDTA המכיל 0.5% HSA וקולטן תאי T ביוטינילים, נוגדן ספציפי אלפא בטא. ותדגירה את התאים בשתיים עד שמונה מעלות צלזיוס עם רעד.
לאחר 15 דקות, לשטוף את התאים עם 600 מיליליטר של חוצץ PBS-EDTA המכיל 0.5 HSA וצנטריפוגה ב 200 עד 500 פעמים G במשך 15 דקות, בשתיים עד שמונה מעלות צלזיוס, כדי להסיר את הנוגדן לא מאוגד. לאחר מכן, להשעות מחדש את התאים בערך חמש פעמים 10 לתאים השמיניים למיליליטר, במאגר PBS-EDTA המכיל 0.5%HSA ו 7.5 מיליליטר לנקינה של חיידקים ספציפיים אנטי ביוטין. כפי שתואר קודם לכן, לדגור על התאים עם רועד, לפני centrifuging ההשעיה התא כדי להסיר את החיידקים לא מאוגדים.
השהה מחדש שש כפול 10 לתאים השביעיים למיליליטר במאגר PBS-EDTA עם 0.5% HSA. לאסוף אותם לתוך שקית חבילת העברה. ספייק זה כאשר הורה על ידי המכשיר.
לאחר מכן, התקן ערכת צינורות בהתקן הפרדת תאים מגנטיים ברמה קלינית. מקם את החבילות עם מאגר PBS-EDTA ואת חבילת ההעברה עם מוצר התא לתוך המכשיר. עבור דלדול של תאי אלפא ביתא T שכותרתם, בחר את פרוטוקול דלדול 1.2 בתוכנה.
לאחר מכן, צנטריפוגה המוצר התא כדי לאסוף את שבר היעד מועשר בתאי גאמא דלתא T. להשעות מחדש את התאים שנאספו במדיום, בתוספת 10% סרום AB אנושי. בצע את הכדאיות ספירת התאים ואת ציטומטריית הזרימה פנוטיפינג לאחר דלדול.
להביא תאים לריכוז סופי של בערך פעם אחת כפול 10 לתא השישי למיליליטר. הקרנה חמש פעמים 10 לתאים המלאכותיים השביעיים המציגים אנטיגן או AAPCs לכל בקבוקון, ב-100 אפור במכשיר יצירת קרני הרנטגן. הכן תרבית משותפת, על ידי הצבת AAPCs מוקרן ותאי גאמא-דלתא T ביחס של 10 הוא לאחד, בבקבוקי ביו-ריאקטור מערכת סגורה ליטר אחד.
עם ליטר אחד של בינוני תרבות, בתוספת 10% סרום AB אנושי, זרע עד 10 צלוחיות. לדגור על התרבות ב 37 מעלות צלזיוס, ו 5% פחמן דו חמצני במשך 10 ימים, עם הקרנה של רמות גלוקוז לקטט כל שלושה עד ארבעה ימים באמצעות רצועות, גלוקוז ומד לקטט. אם רמת הגלוקוז יורדת ל 215 מיליגרם לדסקיליטר, להפחית את הנפח בבקבוקון ל 200 מיליליטר.
מערבבים את התאים ב-200 המיליליטר הנותרים של המדיה, ומסירים דגימה של 0.5 מיליליטר לספירת תאים ומדידת כדאיות על ידי כתמי תפוז אקרדין או פרופיליום יודיד. אם ספירת התאים שווה, או יותר מ-10 עד התשיעית, פצל את התוכן של בקבוקון אחד לשניים ומלא כל בקבוקון עד לליטר אחד במדיום AIM-V, בתוספת סרום AB אנושי של 10%. אם ספירת התאים היא פחות מ -10 עד התשיעי, להאכיל את התאים עם ליטר אחד טרי של מדיום תרבית, בתוספת 10% סרום AB אנושי, ולהחזיר את הבקבוקונים לאינקובטור.
בתום 10 ימים בתרבית משותפת, קוצרים את הבקבוקים הביולוגיים בזה אחר זה, ומושכים את כל התאים לחבילת העברה בגודל המתאים. לאחר הסרת דגימות בקרת האיכות, צנטריפוגה התאים ב 200 עד 500 פעמים G במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, ולהשליך את supernatant. לשטוף את התאים בתמיסה של פתרון גבישי מאוזן, בתוספת עם 0.5%HSA ב 200 עד 500 פעמים G במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
להשעות אותם מחדש בנפח יעד של 100 עד 300 מיליליטר של פתרון גבישי מאוזן עם 0.5% HSA. התאים מופרדים משבר צנטריפוגה של זרימת הנגד לאחר. שניים הניבו אוכלוסיית לימפוציטים טהורה, עם יכולת ערך ממוצעת מצוינת של 95.80% תאי גמא-דלתא T התרחבות ספציפית, עם חומצה זולדרונית תלויה באחוז הראשוני של תאי הרג טבעיים הנמצאים בשבר הלימפוציטים לאחר ההבהרה.
ההעשרה של חומר התרופה תא T-דלתא גמא, עם קולטן תא T אלפא בטא דלדול היה עקבי. מוצר התרופה תא T-דלתא המיוצר משלושה תורמים בריאים, עמד בקריטריון השחרור של פחות מ -1% של קולטן תאי T אלפא בטא חיוביים תאים, עם ממוצע של 0.11%CD20 תאי B חיוביים, 0.00%קולטן תאי T אלפא בטא חיוביים תאים. האחוז הממוצע של תאי הרג טבעיים במוצר הסופי היה סביב 17.06%אשר עמד בקריטריון השחרור של פחות מ 35% כתם פני התא וניתוח ציטומטרי זרימה, נוצלו כדי לאפיין את הזהות, טוהר וזיהום תהליך של חומר התרופה ומוצר סמים.
ההרחבה המחודשת השנייה שהושגה מהתרבות המשותפת של חומר התרופה AAPC ו- Gamma-Delta T-cell, יצרה מוצר של תא T-T גמא-דלתא שעמד בכל קריטריוני השחרור. פטונים אשר מעשירים את אוכלוסיית תאי T משפיעים על ההתרחבות והמאפיינים של המוצר. נדרשת התחשבות מספקת ובדיקה של שיטות העשרה, לפני תחילת תהליך ההעשרה שלהן.
