כתמים אימונוהיסטוכימיים פלואורסצנטיים מרובים של ארבעה סוגי תאי מערכת החיסון רירית הרחם בהפלה חוזרת ונשנית

הטכנולוגיה הנוכחית מאפשרת שימוש בנוגדנים שגדלו באותו מין לאיתור עד שבעה סמנים. מדגים את ההליך יהיה לוסיה צ'אן, טכנאי מהמעבדה. התחל על ידי הכנת פורמלין קבוע פרפין משובץ שקופיות זכוכית רכוב עם דגימת הרקמה, על ידי הצבת השקופיות שטוח בתנור, כדי לאפות ב 60 מעלות צלזיוס עם הרקמה פונה כלפי מעלה.

לאחר שעה, דה שעווה rehydrate את השקופיות לכל 10 דקות כל אחד עם סדרת כימיקלים, כמתואר בכתב היד. תטביעו את השקופיות בתחבולת מלח עם חציצה, ואז בקופסת מגלשות פלסטיק מלאה בתערובת של פורמלדהיד מדולל במתנול, כדי לתקן את הדגימות. לאחר מכן, לשטוף את המגלשות פעמיים במים deionized במשך שתי דקות.

המשך לאחזור אפיטופ, על ידי הצבת מתלה השקופיות בקופסת התנגדות לחום מלאה במאגר חומצת לימון ב- pH 6.0. ואז למקם את התיבה במיקרוגל, לחמם את השקופיות תחילה ב 100% כוח במשך 50 שניות, ואחריו 20 דקות ב 20%כוח, כדי לשמור על אותה טמפרטורה. לאחר שטיפה של המגלשות במים מזוקקים, ושטיפה עם TBST, לטבול את השקופית לתוך צנצנת המכילה פתרון חסימת peroxidation במשך 10 דקות.

לאחר הדגירה, לשטוף את השקופיות במים מזוקקים לשטוף עם TBST, ולאחר מכן להשתמש בעט מחסום הידרופובי כדי לסמן גבול סביב קטע הרקמה במגלשה. לאחר מכן לשטוף את השקופית ב- TBST, לכסות את מקטעי הרקמה עם חוצץ חסימה ודגורת השקופיות בתא לח במשך 15 דקות. כדי להסיר את ריאגנטים חסימה, תחילה לדגור על השקופיות עם הנוגדן העיקרי של עניין, ולאחר מכן להסיר את הנוגדן העיקרי על ידי שטיפת השקופיות שלוש פעמים עם TBST, לפני הדגירה עם פולימר חזרת peroxidase מסומן, נוגדן משני.

לאחר הדגירה, לשטוף את השקופיות לפני החלת פרחי אופל עבור פתרון עבודה TSA, ולאחר מכן לשטוף את השקופית עם חוצץ אחזור אנטיגן. בצע את ההפשטה מבוססת המיקרוגל על ידי חימום השקופיות במאגר אחזור אנטיגן במיקרוגל ב-100%, למשך 50 שניות, ואחריו 20% חשמל למשך 20 דקות במיכלים הבטוחים למיקרוגל. לאחר קירור הדגימות בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות, לשטוף את השקופיות במים מזוקקים TBST ומאוחר יותר דגירה עם פתרון נדוש במשך חמש דקות.

לאחר מכן ייבשו את המגלשה לפני ההרכבה עם מדיום ההרכבה המתאים. לפני הדמיית השקופיות קבעו מראש את המסננים המתאימים בתחנת העבודה. לכוד לפחות 10 שדות לניתוח בהגדלה של פחות מפי 200.

לספירת התאים, לחצו על הלחצן 'ספירת עצמים' בסרגל השלבים, כדי להציג את החלונית 'קביעות ספירת עצמים'. אם הרקמה פולחו, בחר את קטגוריית הרקמה שבה ניתן למצוא את האובייקטים. לאחר מכן בחר את קנה המידה הרצוי של האות מקנה מידה אוטומטי או קנה מידה קבוע.

עבור פילוח אובייקטים, בחר את הרכיב הראשי מהרשימה הנפתחת. כדי לזהות אובייקטים שנוגעים באובייקטים אחרים כאובייקטים בודדים ולא משולבים, סמן את התיבה גודל ופיקסלים מרביים ולאחר מכן בחר בפיצול מעודן. לאחר מכן, לספור את כל התאים הסטרומליים בתאי החיסון בנפרד, כדי לבטא את הנתונים כאחוזים של תאי החיסון ביחס למספר הכולל של תאים סטרומיים עבור כל תמונה שנתפסה.

מאוחר יותר, דווח על ספירת התאים הסופית כממוצע של כל השדות. באמצעות עורך התצוגה, בדוק את טבלאות הנתונים שהתקבלו לאחר העיבוד ולאחר מכן יצא את טבלת נתוני הספירה. בניתוח הייצוגי, ארבעה סוגי תאי חיסון במדגם רירית הרחם אנחנו מובחנים.

התמונה המעובדת מציגה פילוח רקמות כתאים אפיתל, ותאים סטרומיים. החיסון המולטיפלקס בוצע על ביופסיות רירית הרחם מאישת בקרה פורייה ואישה עם הפלה חוזרת בלתי מוסברת, קומה אחת עבורנו המייצגים CD3, CD56, CD68 ו- CD20 נחשפו בחיסון. לאחר זיהוי הצליל החיסוני, כתמים נוספים מתחת לציטוקינים יכולים לעזור לטפל באינטראקציה שלהם ובמנגנון להצלחת ההשתלה.