דגימת דם חוזרת ונשנית מחיית המעבדה הקטנה היא היבט חשוב של אופטימיזציה של עופרת פרמצבטית. פרוטוקול זה מפרט את הכישורים המיקרו-כירורגיים כדי להקים מודל קבוע של חולדת קנביטת וריד הצוואר. טכניקה זו יכולה להקים ביעילות מודל עכברוש קנולי וריד הצוואר ולאסוף שוב ושוב דגימות דם דרך הצינורית בחולדות מודעות תוך הימנעות מתח וכאב.
חשוב לאתר את וריד הצוואר ואת הקנוליה שלו כמו הדגמה חזותית של מורכבות אנטומית אינו זמין עבור מודל זה. כדי להתחיל, להכין את תחנת העבודה aseptic עם 75% אלכוהול רפואי, ולאחר מכן להרדים את החולדה מגולחת עם איזופלוריין מעורבב עם חמצן. תת עורית להזריק תמיסת meloxicam במינון של שני מיליגרם לקילוגרם, ולאחר מכן בזהירות להרים את העור ליד עצם הבריח בצד ימין של קו האמצע של הצוואר עם מלקחיים, באמצעות זוג מספריים כירורגיים, לעשות חתך באורך 1.5 עד 2 ס"מ לכיוון החזה.
לחשיפת הווריד הצווארי שמתחת, השתמש במספריים קשתית כדי לנתח בוטה את כיסוי הרקמה הדקה. הקצה הצפאלי הפרוקסימלי של וריד הצוואר החיצוני מורכב משני ענפים שניתן לזהות חזותית. הרם את וריד הצוואר יחד עם רקמת הממברנה החיבורית שלו כדי לדמיין את בלוטת הלימפה המחוברת לווריד הצוואר.
בזהירות להפריד את הווריד לאורך כיוון כלי הדם מן השריר שמסביב, שומן, ורקמות אחרות. לדחוף את המלקחיים מתחת לווריד הצוואר מבלי לפגוע בכלי הדם המשניים ולעבור שתי חתיכות של תפר 6-0 מתחת לווריד כדי לסמן את שני הקצוות של כלי הדם בנפרד. משוך חתיכה אחת של התפר ככל האפשר לכיוון ראש החולדה ולכסות את הווריד cranily עם שניים עד שלושה קשרים באמצעות מלקחיים.
מניחים את הקשירה השנייה על הקצה caudal של הווריד עם קשר רופף אחד. חבר פוליאוריטן 11 ס"מ, או PU, קטטר למזרק קצה קהה מוכן מלא תמיסת מלח הפרין, ולדחוף לאט את מלוח הפרין לתוך קטטר כדי למנוע בועות אוויר. דחף את הצד השטוח ללא קצה של המלקחיים מתחת לווריד הצוואר כדי לצאת בצד השני.
לעשות חתך קטן בצורת V על הווריד ליד העניבה הגולגולתית עם זוג microscissors castroviejo, ופתח בעדינות את החתך עם קצה מלקחיים מרחיבים כלי המרפק. חותכים את הפתח האלכסוני של הקצה הקדמי של צנתר וריד הצוואר. לשתול את הקצה האלכסוני של הצינור עם מלקחיים ולהחליק אותו לתוך הווריד הצווארי.
תוך כדי קידום הצנתר, לסגת לאט את המלקחיים המיקרוכירורגיים המרפק, ומהדקים את פני השטח החיצוניים של הכלי עם מלקחיים. להפסיק להכניס את הצנתר על להכות את הסימן הכחול הראשון של צינור PU, שהוא כשלושה סנטימטרים אורך. אבטחו את הצנתר המוחדר לווריד עם קשירות קוודליות ורוסטרליות באמצעות מלקחיים.
חוט תפר 6-0 דרך הרקמה החשופה בצד ימין של החתך באמצעות מחט תפר, ולקשור את הקשירה עם hemostat. ואז לכופף את הצנתר בסימן הכחול השני כדי לאגד עם אותו קשירה ולהימנע חסימת צינורות PU. לאחר חיתוך כל חוט התפר הנוסף, לסגור את הצנתר על ידי החלפת מזרק קצה קהה עם תקע נירוסטה 22 מד.
מניחים את החולדה בתנוחת הגב ומנקים בעדינות את האזור שבין השכם עם כדור הכותנה ספוג ב -75% אלכוהול רפואי. באמצעות המספריים כירורגיים, לעשות חתך קטן מאוד במרכז הצוואר הגב. דרך חתך הגב, להנחות בעדינות לדחוף את trochar מתחת לעור לכיוון החתך הגחוני בצד ימין של הצוואר.
שים את קטטר ורידים לתוך trochar ולאחר מכן לשלוף ולהנחות את קטטר ורידים לכיוון חתך הגב. לאחר אבטחת הצנתר החיצוני לשכבת השריר, סגור את שכבת העור של החתכים הגחוניים והגביים עם תפר ניילון 6-0 ומחט תפירה וספוגית כל החתכים הכירורגיים עם יודופור. לאחר מכן, להסיר את תקע קטטר על ידי הידוק הצנתר עם קצות האצבעות.
מניחים מזרק קצה קהה חדש לאט למשוך בחזרה את המזרק כדי לבדוק את זרימת הדם. החזק את הצנתר שוב עם קצות האצבעות. הזריקו 0.2 מיליליטר של תמיסת מלח הפריניזציה ו-0.1 מיליליטר של תמיסת נעילה לצנתר באמצעות מזרק קצה קהה, ולאחר מכן החליפו את המזרק בתקע נירוסטה.
מבטלים את הקטטר ודוחפים מעט את התקע פנימה כדי להבטיח את ההידוק של הצנתר. כדי לאסוף דגימות דם לבדיקות המטולוגיות, למקם את החולדה בריסון, לפתוח את התקע, ולהכניס את המזרק לתוך קטטר PU ורידים כדי להבטיח את הצנתר אינו חסום. השליכו את הדם שנסוג בתחילה המכיל תערובת של דם, תמיסת מלח הפרינה ותמיסת נעילת קטטר.
באמצעות מזרק חדש, לאסוף 150 microliters של דגימת דם טרי ולהעביר את דגימת הדם לצינור 0.5 מיליליטר רוסס בעבר עם K2EDTA. הזריקו 150 מיקרוליטרים של תמיסת מלח רגילה שחוממה מראש, והחדירו 0.2 מיליליטרים של תמיסת מלח רגילה הפרינית סטרילית דרך הצנתר. הזריקו 100 מיקרוליטרים של תמיסת המנעול לצנתר כדי להבטיח את האיטום והסטריליות של הצנתר לפני איסוף הדגימה הבאה.
במחקר הנוכחי נחקרו התנאים הפיזיולוגיים וההמטולוגיים במשך שישה ימים לאחר הניתוח. רוב החולדות התאוששו בתוך ארבעה עד שישה ימים לאחר הניתוח כפי שמעיד על ידי עלייה במשקל הגוף של יותר מ -10 גרם, צריכת מזון קבועה, רכיבי דם נבחרים הנוגעים לזיהום, התייבשות ודלקת, כולל תאי דם לבנים, תאי דם אדומים, המוגלובין, וספירת טסיות דם. לכן, החולדות דרשו מינימום של ארבעה עד שישה ימים להחלמה לאחר ההליך.
צריכת המים הגדולה הצביעה על התייבשות ביום הראשון שלאחר הניתוח. בנוסף, הפרמקוקינטיקה של החומצה האלגית פוליפנול הטבעית נחקרה במודל חולדת הקנוליה של וריד הצווארי שנקבע והזמינות הביולוגית הירודה של החומצה האלגית צוינה על ידי ריכוז הפלזמה הנמוך שלה במשך 24 שעות. בידוד נכון של וריד הצוואר הוא הצעד הראשון החשוב ביותר כי וריד הצוואר מוטבע בתוך רקמות רכות אחרות לא יכול להיות גלוי מיד לחוקר.
דגימת דם רציפה בתוך אותה חיה יכולה להתבצע במודל העכברושים JVC שנקבע. זהו כלי שימושי וחזק להערכת ביצועי ניסוחים של תרופות ב- vivo.
