פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשנית להעברת תרופות אנטי-רטרו-ויראליות משולבות דרך הפה, או ART, המדכאת בהצלחה שכפול HIV RNA בעכברים אנושיים. שיטת ART האוראלית החדשנית עולה על ניסיונות לידה קודמים בשל בטיחותה, קלות ההכנה והניהול שלה, והפחתת הלחץ על בעלי חיים כתוצאה מהזרקה יומית. שיטת המסירה האוראלית המוצעת לדיכוי שכפול RNA של HIV בעכברים אנושיים תהיה בעלת ערך רב למחקרי הוכחת היתכנות פרה-קליניים לפיתוח טיפולי ריפוי חדשניים המחקים באופן הדוק את אספקת התרופה אצל אנשים הנגועים ב- HIV כרוני.
מי שתדגים את ההליך תהיה ולרי רזאק, מנהלת מעבדה וטכנאית מהמעבדה שלנו. התחל על ידי שקילת תרופות בודדות. הכינו 10 כוסות מזון עם cART באמצעות מגרדי תאים סטריליים כדי לשקול 250 מיליגרם של FTC, 375 מיליגרם של TDF ו-500 מיליגרם של RAL או ELV לצינורות צנטריפוגה בודדים סטריליים של 50 מיליליטר בארון בטיחות ביולוגי.
הוסף DMSO לצינור FTC ו- TDF כדי ליצור ריכוז סופי של 250 מיליגרם למיליליטר, ולתוך צינור RAL או ELV לריכוז סופי של 500 מיליגרם למיליליטר. מערבבים את תמיסת התרופה על ידי ערבוב ופיפטינג עד לקבלת תמיסה ברורה. לעקר את התמיסות באמצעות מסנן קרום PVDF הידרופילי בגודל 0.22 מיקרומטר עם מזרק סטרילי.
פתרונות סמים בודדים ניתן לאחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס במשך 12 שבועות. הפשרה טרייה של אליקוט אחד מכל תמיסת תרופה לפני השימוש בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד שהפתרון מתבהר. מערבבים היטב באמצעות פיפטה.
שלב את התרופות המומסות ב- DMSO וערבב היטב כדי ליצור תערובת מאסטר המכילה מיליליטר אחד של FTC, 1.5 מיליליטר של TDF, ומיליליטר אחד של ELV או RAL. הוסיפו 350 מיקרוליטרים של תמיסת תערובת מאסטר cART לכוס כדי להכין cART אחת עם ג'ל דיאטה. הוסיפו לכוס 0.75 מיליליטר של טרימתופרים סולפאמתוקסאסול.
ערבבו היטב בעזרת קצוות פיפטה סטריליים של מיליליטר אחד. בעזרת קצה פיפטה, העלו את המזון המכילה cART על צלחת פטרי בקוטר 60 מילימטרים. חשב את כמות ה- cART בגביע המזון על ידי שקילת המזון עבור כל כלוב בהתאם למספר העכברים.
הוציאו צ'או רגיל מהכלוב והחליפו אותו בכוס מזון המכילה cART. רעננו את האוכל של cART שלוש פעמים בשבוע. שקלו כוסות משומשות כדי לעקוב אחר הצריכת.
לאחר מכן, שקלו את העכברים מדי שבוע כדי לאשר את הצריכה. לאחר ארבעה שבועות של הידבקות ב-HIV-1, עכברים טופלו במשך 7.5 שבועות נוספים, בין אם באמצעות משטר FTC/TDF/RAL באמצעות הזרקה תת עורית או על ידי מתן פומי של FTC/TDF/RAL או FTC/TDF/ELV. משקל העכבר ירד ללא הרף במהלך הזרקה תת עורית יומית של cART.
לעומת זאת, ג'ל הדיאטה החזיר את משקל העכברים לרמות טרום-ART לאחר חמישה שבועות של מתן cART דרך הפה. בנוסף, לא נצפו שינויים משמעותיים במשקל בין קבוצות RAL או ELV. בתוך ארבעה שבועות, משטר המזון FTC/TDF/ELV ו-RAL/ART דיכא את שכפול הנגיף ב-100% וב-80% בהתאמה.
70% מהעכברים שקיבלו זריקת SC הגיעו לרמות בלתי ניתנות לגילוי לאחר ארבעה שבועות של טיפול. התוצאות אישרו כי מתן פומי דיכא את שכפול הנגיף מהר יותר וביעילות רבה יותר מאשר זריקות תת עוריות. יתר על כן, משטר המזון cART מנע ירידה נוספת של יחס CD4 ל- CD8 בדם ההיקפי מוקדם יותר מזריקות יומיות.
זה קריטי לשמור על סטריליות של כל חומר המעורב בפרוטוקול במהלך כל התהליך ולמנוע הקפאה והפשרה מרובות של תמיסת מלאי cART.
