Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige Methode zur Verabreichung oraler antiretroviraler Kombinationsmedikamente (ART), die die HIV-RNA-Replikation in humanisierten Mäusen erfolgreich unterdrückt. Die neuartige orale ART-Methode übertrifft frühere Verabreichungsversuche aufgrund ihrer Sicherheit, einfachen Zubereitung und Verabreichung und reduziertem Tierstress, der sich aus einer täglichen Injektion ergibt. Die vorgeschlagene orale Verabreichungsmethode zur Unterdrückung der HIV-RNA-Replikation in humanisierten Mäusen wird für präklinische Proof-of-Concept-Studien zur Entwicklung neuartiger Heilbehandlungen, die die Medikamentenabgabe bei chronisch HIV-infizierten Personen genau nachahmen, sehr wertvoll sein.
Valerie Rezak, Laborleiterin und Technikerin aus unserem Labor, demonstriert das Verfahren. Beginnen Sie mit dem Wiegen einzelner Medikamente. Stellen Sie 10 Lebensmittelbecher mit cART unter Verwendung steriler Zellschaber her, um 250 Milligramm FTC, 375 Milligramm TDF und 500 Milligramm RAL oder ELV in einzelne, sterile 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen in einer Biosicherheitswerkbank abzuwiegen.
Fügen Sie DMSO zum FTC- und TDF-Rohr hinzu, um eine Endkonzentration von 250 Milligramm pro Milliliter zu erhalten, und in das RAL- oder ELV-Rohr zu einer Endkonzentration von 500 Milligramm pro Milliliter. Mischen Sie die Arzneimittellösung durch Rühren und Pipettieren, bis eine klare Lösung erhalten wird. Sterilisieren Sie die Lösungen mit einem hydrophilen 0,22-Mikrometer-PVDF-Membranfilter mit einer sterilen Spritze.
Einzelne Arzneimittellösungen können 12 Wochen bei minus 20 Grad Celsius gelagert werden. Frisch ein Aliquot jeder Arzneimittellösung vor Gebrauch bei 37 Grad Celsius auftauen, bis die Lösung klar wird. Mit einer Pipette gut mischen.
Kombinieren Sie die in DMSO gelösten Medikamente und mischen Sie gut, um eine Mastermischung zu bilden, die einen Milliliter FTC, 1,5 Milliliter TDF und einen Milliliter ELV oder RAL enthält. Fügen Sie 350 Mikroliter cART Master-Mix-Lösung in eine Tasse hinzu, um einen Diät-Gel-Boost-cART-Becher zuzubereiten. Fügen Sie 0,75 Milliliter Trimethoprimsulfamethoxasol in die Tasse hinzu.
Rühren Sie gründlich mit einem Milliliter sterilen Pipettenspitzen um. Aliquoten Sie den Lebensmittelbecher mit cART mit einer Pipettenspitze auf eine 60-Millimeter-Petrischale. Berechnen Sie die Menge an cART im Futterbecher, indem Sie das Futter für jeden Käfig entsprechend der Anzahl der Mäuse wiegen.
Entfernen Sie normales Chow aus dem Käfig und ersetzen Sie es durch einen Futterbecher, der cART enthält. Erfrischen Sie das cART-Essen dreimal pro Woche. Wiegen Sie gebrauchte Becher, um die Aufnahme zu überwachen.
Dann wiegen Sie die Mäuse wöchentlich, um den Verzehr zu bestätigen. Nach vier Wochen HIV-1-Infektion wurden die Mäuse für weitere 7,5 Wochen behandelt, entweder mit FTC/TDF/RAL-Regime durch subkutane Injektion oder durch orale Verabreichung von FTC/TDF/RAL oder FTC/TDF/ELV. Das Gewicht der Maus nahm während der täglichen subkutanen cART-Injektion kontinuierlich ab.
Im Gegensatz dazu stellte das Diätgel das Mausgewicht nach fünf Wochen oraler cART-Verabreichung wieder auf das Niveau vor der ART-Initiation zurück. Darüber hinaus wurden keine signifikanten Gewichtsveränderungen zwischen RAL- oder ELV-Gruppen beobachtet. Innerhalb von vier Wochen unterdrückten die Nahrungsmittel FTC/TDF/ELV und RAL / ART die Virusreplikation um 100% bzw. 80%.
70% der Mäuse, die eine subkutane Injektion erhielten, erreichten nach vierwöchiger Behandlung nicht nachweisbare Werte. Die Ergebnisse bestätigten, dass die orale Verabreichung die Virusreplikation schneller und effizienter unterdrückte als subkutane Injektionen. Darüber hinaus verhinderte die cART-Diät den weiteren Rückgang des CD4-zu-CD8-Verhältnisses im peripheren Blut früher als tägliche Injektionen.
Es ist wichtig, die Sterilität aller am Protokoll beteiligten Materialien während des gesamten Prozesses aufrechtzuerhalten und ein mehrfaches Einfrieren und Auftauen der cART-Stammlösung zu vermeiden.
