Bu protokol, insanlaştırılmış farelerde HIV RNA replikasyonunu başarılı bir şekilde baskılayan oral kombinasyon antiretroviral ilaçlar veya ART sağlamak için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Yeni oral ART yöntemi, güvenliği, hazırlık ve uygulama kolaylığı ve günlük enjeksiyondan kaynaklanan hayvan stresinin azalması nedeniyle önceki doğum girişimlerini aşmaktadır. İnsanlaştırılmış farelerde HIV RNA replikasyonunu baskılamak için önerilen oral dağıtım yöntemi, kronik HIV ile enfekte bireylerde ilaç dağıtımını yakından taklit eden yeni tedavi tedavileri geliştirmek için klinik öncesi kavram kanıtı çalışmaları için oldukça değerli olacaktır.
Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan bir laboratuvar yöneticisi ve teknisyeni olan Valerie Rezak olacaktır. Bireysel ilaçları tartarak başlayın. Bir biyo-güvenlik kabininde 250 miligram FTC, 375 miligram TDF ve 500 miligram RAL veya ELV'yi bireysel, steril 50 mililitrelik santrifüj tüplerine tartmak için steril hücre kazıyıcıları kullanarak cART ile 10 gıda kabı yapın.
Mililitre başına 250 miligramlık bir nihai konsantrasyon oluşturmak için DMSO'yu FTC ve TDF tüpüne ve RAL veya ELV tüpüne mililitre başına 500 miligramlık bir son konsantrasyona ekleyin. İlaç çözeltisini, berrak bir çözelti elde edilene kadar karıştırarak ve pipetleyerek karıştırın. Steril bir şırınga ile 0,22 mikrometre hidrofilik PVDF membran filtre kullanarak çözeltileri sterilize edin.
Bireysel ilaç çözeltileri 12 hafta boyunca eksi 20 santigrat derecede saklanabilir. Çözelti netleşene kadar 37 santigrat derecede kullanmadan önce her ilaç çözeltisinin bir aliquot'unu taze olarak çözün. Bir pipet kullanarak iyice karıştırın.
DMSO'da çözünmüş ilaçları birleştirin ve bir mililitre FTC, 1.5 mililitre TDF ve bir mililitre ELV veya RAL içeren bir ana karışım oluşturmak için iyice karıştırın. Bir diyet jeli takviye cART fincanı hazırlamak için bir kaba 350 mikrolitre cART master karışım çözeltisi ekleyin. Bardağa 0.75 mililitre trimetoprim sülfametoksasol ekleyin.
Bir mililitrelik steril pipet uçlarını kullanarak iyice karıştırın. Bir pipet ucu kullanarak, cART içeren yiyecek kabını 60 milimetrelik bir Petri kabına yapıştırın. Her kafes için yiyeceği fare sayısına göre tartarak yiyecek kabındaki cART miktarını hesaplayın.
Kafesten düzenli chow'u çıkarın ve cART içeren bir yiyecek kabı ile değiştirin. CART yiyeceklerini haftada üç kez yenileyin. Alımı izlemek için kullanılmış bardakları tartın.
Ardından, tüketimi onaylamak için fareleri haftalık olarak tartın. Dört haftalık HIV-1 enfeksiyonundan sonra, fareler deri altı enjeksiyon yoluyla FTC / TDF / RAL rejimi ile veya FTC / TDF / RAL veya FTC / TDF / ELV'nin oral olarak uygulanmasıyla 7.5 hafta daha tedavi edildi. Günlük cART subkutan enjeksiyonu sırasında fare ağırlığı sürekli olarak azalmıştır.
Buna karşılık, diyet jeli, beş haftalık oral cART uygulamasından sonra fare ağırlıklarını ART öncesi başlangıç seviyelerine geri yükledi. Ek olarak, RAL veya ELV grupları arasında anlamlı bir ağırlık değişikliği gözlenmedi. Dört hafta içinde, FTC / TDF / ELV ve RAL / ART gıda rejimi viral replikasyonu sırasıyla% 100 ve% 80 oranında baskıladı.
SC enjeksiyonu alan farelerin% 70'i dört haftalık tedaviden sonra tespit edilemeyen seviyelere ulaştı. Sonuçlar, oral uygulamanın viral replikasyonu deri altı enjeksiyonlardan daha hızlı ve daha verimli bir şekilde baskıladığını doğruladı. Ayrıca, cART gıda rejimi, periferik kandaki CD4 ila CD8 oranlarının günlük enjeksiyonlardan daha erken düşmesini önledi.
Tüm proses boyunca protokolde yer alan herhangi bir malzemenin sterilitesini korumak ve cART stok çözeltisinin birden fazla donmasını ve çözülmesini önlemek çok önemlidir.
