이 프로토콜은 인간화 마우스에서 HIV RNA 복제를 성공적으로 억제하는 경구 조합 항레트로바이러스 약물 또는 ART를 전달하는 새로운 방법을 설명합니다. 새로운 경구 ART 방법은 안전성, 준비 및 투여의 용이성, 일일 주사로 인한 동물 스트레스 감소로 인해 이전 전달 시도를 능가합니다. 인간화 마우스에서 HIV RNA 복제를 억제하기 위해 제안된 경구 전달 방법은 만성 HIV 감염 개인의 약물 전달을 밀접하게 모방하는 새로운 치료 치료법을 개발하기 위한 전임상 개념 증명 연구에 매우 유용할 것입니다.
절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 실험실 관리자이자 기술자 인 Valerie Rezak입니다. 개별 약물의 무게를 측정하는 것으로 시작하십시오. 멸균 세포 스크레이퍼를 사용하여 cART로 식품 컵 10개를 만들어 FTC 250mg, TDF 375mg, RAL 또는 ELV 500mg을 바이오 안전 캐비닛의 개별 멸균 50밀리리터 원심분리 튜브에 넣습니다.
DMSO를 FTC 및 TDF 튜브에 추가하여 밀리리터당 250밀리그램의 최종 농도를 구성하고 RAL 또는 ELV 튜브에 밀리리터당 500밀리그램의 최종 농도를 구성합니다. 투명한 용액이 얻어질 때까지 교반하고 피펫팅하여 약물 용액을 혼합합니다. 멸균 주사기가있는 0.22 마이크로 미터 친수성 PVDF 멤브레인 필터를 사용하여 용액을 멸균하십시오.
개별 약물 용액은 섭씨 영하 20도에서 12 주 동안 보관할 수 있습니다. 용액이 투명해질 때까지 섭씨 37도에서 사용하기 전에 각 약물 용액의 분취량 하나를 갓 해동하십시오. 피펫을 사용하여 잘 섞는다.
DMSO에 용해 된 약물을 결합하고 잘 혼합하여 1 밀리리터의 FTC, 1.5 밀리리터의 TDF 및 1 밀리리터의 ELV 또는 RAL을 포함하는 마스터 믹스를 구성합니다. 350 마이크로 리터의 cART 마스터 믹스 용액을 컵에 넣고 하나의 다이어트 젤 부스트 cART 컵을 준비합니다. 컵에 0.75 밀리리터의 트리 메토 프림 설파 메 톡사 솔을 첨가하십시오.
1 밀리리터 멸균 피펫 팁을 사용하여 철저히 저어줍니다. 피펫 팁을 사용하여 cART가 들어있는 식품 컵을 60mm 페트리 접시에 분취합니다. 마우스의 수에 따라 각 케이지에 대한 음식의 무게를 측정하여 음식 컵의 cART의 양을 계산하십시오.
케이지에서 일반 차우를 제거하고 cART가 들어있는 식품 컵으로 교체하십시오. 일주일에 세 번 cART 음식을 새로 고칩니다. 섭취량을 모니터링하기 위해 사용한 컵의 무게를 측정합니다.
그런 다음 매주 마우스의 무게를 측정하여 소비량을 확인합니다. HIV-1 감염 4주 후, 마우스는 피하 주사를 통한 FTC/TDF/RAL 요법 또는 FTC/TDF/RAL 또는 FTC/TDF/ELV의 경구 투여에 의해 7.5주 동안 추가로 치료되었습니다. 마우스 체중은 매일 cART 피하 주사 동안 지속적으로 감소하였다.
대조적으로, 다이어트 젤은 경구 cART 투여 5주 후에 마우스 체중을 사전 ART 개시 수준으로 회복시켰다. 또한, RAL 또는 ELV 그룹 간에 유의한 체중 변화는 관찰되지 않았다. 4주 이내에 FTC/TDF/ELV 및 RAL/ART 식품 요법은 바이러스 복제를 각각 100% 및 80% 억제했습니다.
SC 주사를 맞은 쥐의 70%가 치료 4주 후 감지할 수 없는 수준에 도달했습니다. 그 결과 경구 투여가 피하 주사보다 바이러스 복제를 더 빠르고 효율적으로 억제한다는 것을 확인했습니다. 또한, cART 식품 요법은 매일 주사보다 일찍 말초 혈액에서 CD4 대 CD8 비율의 추가 감소를 방지했습니다.
전체 공정 동안 프로토콜과 관련된 모든 물질의 무균성을 유지하고 cART 스톡 용액의 다중 동결 및 해동을 방지하는 것이 중요합니다.
