Este protocolo describe un método novedoso para administrar medicamentos antirretrovirales de combinación oral, o ART, que suprime con éxito la replicación del ARN del VIH en ratones humanizados. El novedoso método de ART oral supera los intentos de administración anteriores debido a su seguridad, facilidad de preparación y administración, y reducción del estrés animal resultante de una inyección diaria. El método de administración oral propuesto para suprimir la replicación del ARN del VIH en ratones humanizados será muy valioso para los estudios preclínicos de prueba de concepto para desarrollar nuevos tratamientos de curación que imiten estrechamente la administración de medicamentos en individuos infectados crónicamente por el VIH.
Demostrando el procedimiento estará Valerie Rezak, gerente de laboratorio y técnica de nuestro laboratorio. Comience por pesar medicamentos individuales. Haga 10 tazas de comida con cART usando raspadores de células estériles para pesar 250 miligramos de FTC, 375 miligramos de TDF y 500 miligramos de RAL o ELV en tubos centrífugos individuales y estériles de 50 mililitros en un gabinete de bioseguridad.
Agregue DMSO al tubo FTC y TDF para formar una concentración final de 250 miligramos por mililitro, y en el tubo RAL o ELV a una concentración final de 500 miligramos por mililitro. Mezcle la solución del medicamento agitando y pipeteando hasta obtener una solución transparente. Esterilice las soluciones utilizando un filtro de membrana de PVDF hidrófilo de 0,22 micrómetros con una jeringa estéril.
Las soluciones farmacológicas individuales se pueden almacenar a menos 20 grados centígrados durante 12 semanas. Descongele recientemente una alícuota de cada solución farmacológica antes de usarla a 37 grados centígrados hasta que la solución se aclare. Mezclar bien con una pipeta.
Combine los medicamentos disueltos en DMSO y mezcle bien para formar una mezcla maestra que contenga un mililitro de FTC, 1.5 mililitros de TDF y un mililitro de ELV o RAL. Agregue 350 microlitros de la solución de mezcla maestra cART en una taza para preparar una taza de cART de refuerzo de gel dietético. Agregue 0.75 mililitros de trimetoprima sulfametoxasol en la taza.
Revuelva bien con puntas de pipeta estéril de un mililitro. Con una punta de pipeta, alícuota la taza de comida que contiene cART en una placa de Petri de 60 milímetros. Calcule la cantidad de cART en la taza de comida pesando la comida para cada jaula de acuerdo con el número de ratones.
Retire la comida regular de la jaula y reemplácela con una taza de comida que contenga cART. Refresque los alimentos cART tres veces por semana. Pese las tazas usadas para controlar la ingesta.
Luego, pesa los ratones semanalmente para confirmar el consumo. Después de cuatro semanas de infección por VIH-1, los ratones fueron tratados durante otras 7,5 semanas, ya sea con régimen FTC/TDF/RAL mediante inyección subcutánea o mediante administración oral de FTC/TDF/RAL o FTC/TDF/ELV. El peso del ratón disminuyó continuamente durante la inyección subcutánea diaria de cART.
En contraste, el gel dietético restauró el peso del ratón a los niveles de iniciación previos al TAR después de cinco semanas de administración oral de cART. Además, no se observaron cambios significativos de peso entre los grupos RAL o ELV. En cuatro semanas, el régimen alimenticio FTC/TDF/ELV y RAL/ART suprimió la replicación viral en un 100% y 80% respectivamente.
El 70% de los ratones que recibieron inyección SC alcanzaron niveles indetectables después de cuatro semanas de tratamiento. Los resultados confirmaron que la administración oral suprimió la replicación viral de manera más rápida y eficiente que las inyecciones subcutáneas. Además, el régimen alimenticio cART previno la disminución adicional de las proporciones de CD4 a CD8 en la sangre periférica antes de las inyecciones diarias.
Es fundamental mantener la esterilidad de cualquier material involucrado en el protocolo durante todo el proceso y evitar la congelación y descongelación múltiple de la solución de material de cART.
