Ce protocole décrit une nouvelle méthode d’administration de médicaments antirétroviraux combinés oraux, ou TAR, qui supprime avec succès la réplication de l’ARN du VIH chez des souris humanisées. La nouvelle méthode orale de TAR surpasse les tentatives d’accouchement précédentes en raison de son innocuité, de sa facilité de préparation et d’administration et de la réduction du stress des animaux résultant d’une injection quotidienne. La méthode d’administration orale proposée pour supprimer la réplication de l’ARN du VIH chez les souris humanisées sera très utile pour les études précliniques de preuve de concept visant à mettre au point de nouveaux traitements curatifs qui imitent étroitement l’administration du médicament chez les personnes infectées par le VIH chronique.
La démonstration de la procédure sera Valerie Rezak, gestionnaire de laboratoire et technicienne de notre laboratoire. Commencez par peser les médicaments individuels. Fabriquez 10 gobelets alimentaires avec cART à l’aide de racleurs à cellules stériles pour peser 250 milligrammes de FTC, 375 milligrammes de TDF et 500 milligrammes de RAL ou d’ELV dans des tubes centrifugés individuels stériles de 50 millilitres dans une armoire de biosécurité.
Ajouter du DMSO au tube FTC et TDF pour obtenir une concentration finale de 250 milligrammes par millilitre, et dans le tube RAL ou ELV à une concentration finale de 500 milligrammes par millilitre. Mélanger la solution médicamenteuse en agitant et en pipetant jusqu’à l’obtention d’une solution limpide. Stériliser les solutions à l’aide d’un filtre à membrane en PVDF hydrophile de 0,22 micromètre avec une seringue stérile.
Les solutions médicamenteuses individuelles peuvent être conservées à moins 20 degrés Celsius pendant 12 semaines. Décongeler fraîchement une partie aliquote de chaque solution médicamenteuse avant utilisation à 37 degrés Celsius jusqu’à ce que la solution devienne claire. Bien mélanger à l’aide d’une pipette.
Combinez les médicaments dissous dans le DMSO et mélangez bien pour former un mélange principal contenant un millilitre de FTC, 1,5 millilitre de TDF et un millilitre de VLE ou RAL. Ajouter 350 microlitres de solution de mélange principal cART dans une tasse pour préparer une tasse de gel diététique boost cART. Ajouter 0,75 millilitres de triméthoprime sulfaméthoxasole dans la tasse.
Bien mélanger à l’aide d’embouts de pipettes stériles d’un millilitre. À l’aide d’un embout de pipette, aliquoter le gobelet contenant cART sur une boîte de Petri de 60 millimètres. Calculez la quantité de cART dans le gobelet alimentaire en pesant la nourriture pour chaque cage en fonction du nombre de souris.
Retirez le chow ordinaire de la cage et remplacez-le par un gobelet contenant du cART. Rafraîchissez les aliments cART trois fois par semaine. Peser les tasses usagées pour surveiller la consommation.
Ensuite, pesez les souris chaque semaine pour confirmer la consommation. Après quatre semaines d’infection par le VIH-1, les souris ont été traitées pendant 7,5 semaines supplémentaires, soit avec un schéma FTC/TDF/RAL par injection sous-cutanée, soit par administration orale de FTC/TDF/RAL ou FTC/TDF/ELV. Le poids de la souris diminuait continuellement pendant l’injection sous-cutanée quotidienne de cART.
En revanche, le gel diététique a rétabli le poids de la souris aux niveaux d’initiation pré-TAR après cinq semaines d’administration orale de cART. De plus, aucun changement de poids significatif n’a été observé entre les groupes RAL ou VLE. En quatre semaines, le régime alimentaire FTC/TDF/ELV et RAL/ART a supprimé la réplication virale de 100 % et 80 % respectivement.
70% des souris recevant une injection SC ont atteint des niveaux indétectables après quatre semaines de traitement. Les résultats ont confirmé que l’administration orale supprimait la réplication virale plus rapidement et plus efficacement que les injections sous-cutanées. De plus, le régime alimentaire cART a empêché la baisse des rapports CD4/CD8 dans le sang périphérique plus tôt que les injections quotidiennes.
Il est essentiel de maintenir la stérilité de tout matériau impliqué dans le protocole pendant tout le processus et d’éviter les multiples gels et décongélations de la solution mère cART.
