该协议描述了一种递送口服联合抗逆转录病毒药物或ART的新方法，该方法成功抑制了人源化小鼠中的HIV RNA复制。这种新颖的口服ART方法因其安全性，易于制备和给药以及减少每日注射引起的动物压力而超越了以前的给药尝试。拟议的口服递送方法在人源化小鼠中抑制HIV RNA复制对于临床前概念验证研究将非常有价值，以开发与慢性HIV感染者中的药物递送密切相关的新型治疗方法。
演示该程序的将是Valerie Rezak，我们实验室的实验室经理和技术人员。首先称量单个药物。使用无菌细胞刮刀用cART制作10个食物杯，将250毫克FTC，375毫克TDF和500毫克RAL或ELV称量到生物安全柜中的单个无菌50毫升离心管中。
将DMSO添加到FTC和TDF管中，以弥补每毫升250毫克的最终浓度，并加入RAL或ELV管中，以达到每毫升500毫克的最终浓度。通过搅拌和移液混合药物溶液，直到获得澄清的溶液。使用带有无菌注射器的0.22微米亲水性PVDF膜过滤器对溶液进行灭菌。
个别药物溶液可在零下20摄氏度下储存12周。在37摄氏度下使用前，新鲜解冻每种药物溶液的一等分试样，直到溶液变得澄清。用移液管搅拌均匀。
将溶解在DMSO中的药物混合并充分混合，制成含有1毫升FTC，1.5毫升TDF和1毫升ELV或RAL的预混液。将 350 微升 cART 预混液加入杯中，制备一个无糖凝胶增强 cART 杯。在杯中加入0.75毫升甲氧苄啶磺胺甲噁唑。
使用一毫升无菌移液器吸头彻底搅拌。使用移液器吸头将装有cART的食物杯等分到60毫米培养皿上。通过根据小鼠数量称量每个笼子的食物来计算食物杯中cART的量。
从笼子中取出普通食物，并用装有cART的食物杯代替。每周刷新 cART 食物三次。称量用过的杯子以监测摄入量。
然后，每周称量小鼠以确认食用。在HIV-1感染四周后，小鼠再治疗7.5周，通过皮下注射或口服FTC / TDF / RAL或FTC / TDF / ELV进行FTC / TDF / RAL方案治疗。在每日cART皮下注射期间，小鼠体重不断下降。
相比之下，饮食凝胶在口服cART给药五周后将小鼠体重恢复到ART开始前的水平。此外，RAL组或ELV组之间未观察到显着的体重变化。在四周内，FTC/TDF/ELV和RAL/ART食品方案分别抑制了100%和80%的病毒复制。
接受SC注射的小鼠中有70%在治疗四周后达到检测不到的水平。结果证实，口服给药比皮下注射更快、更有效地抑制病毒复制。此外，cART饮食方案在每日注射之前防止了外周血中CD4与CD8比率的进一步下降。
在整个过程中保持方案中涉及的任何材料的无菌性并避免cART储备溶液的多次冻融至关重要。
