הדמיה בהילוך מהיר עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי מאפשרת התבוננות בשינויים הדינמיים של גדילה והתפתחות ברמה התאית והתת-תאית. פרוטוקול פשוט זה להדמיית קיטועי זמן תלת-ממדיים יכול לחקור ישירות את הדינמיקה של דופן התא לאורך תקופה ארוכה. פרוטוקול זה משתמש בצבע calcofluor כדי לסמן את הדינמיקה של עובי דופן התא, ולכן אינו דורש טרנספורמציה של חלבון פלואורסצנטי.
אותות calcofluor הם יציבים והוא יכול להימשך יותר משבוע. שיטה זו יכולה להיות מיושמת על מערכות רבות אחרות עם מבנים פשוטים המכילים דפנות תאים והוא יכול להיות מוכתם על ידי calcofluor כגון בצמחים פורחים. בפרוטוקול זה, אותות הקלקופלור יציבים כאשר צבע זה מעורבב בתווך במהלך כל התהליך של הדמיה בהילוך מהיר.
כדי להתחיל, לפזר את רקמת הטחב בת שבעת הימים לתוך צינור מיקרו 1.5 מיליליטר המכיל 20 מיקרוליטר של מים מעוקרים. עבור סוג פראי להשתמש מלקחיים כדי להפריד את protonemata. עבור מוטציית ggb, יש להפריד את הפרוטונמטה באמצעות פיפטה AP-1000.
מוסיפים 10 מיקרוליטר של הקלקופלור-לבן המעוקר לתוך המיקרו-צינור ומשאירים את הצינור זקוף במכסה המנוע למשך שתי דקות להכתמה. מיד לאחר הצביעה, מערבבים את הצמחים עם 200 מיקרוליטר של BCDATG מקורר המכיל מדיום BCDAT על ידי פיפטינג חמש פעמים עם פיפטה P1000 ומעבירים את התערובת לצלחת בסיס זכוכית 27 מילימטר. ודא כי 200 מיקרוליטר של BCDATG עם דגימות מופץ באופן שווה על פני השטח של צלחת זכוכית 27 מ"מ תחתית כדי לייצר שכבה דקה של סרט כך הדגימות נמצאים במרחק העבודה האובייקטיבי במהלך ההדמיה.
לאחר התמצקות במשך שתי דקות בטמפרטורת החדר, מכסים את השכבה הדקה בשלושה מיליליטר של BCDATG מקורר ומניחים לה להתייצב למשך 10 דקות כדי להתמצק שוב. בתחתית המנה מציירים תשעה קווים כל אחד בכיוונים מקבילים ומאונכים ומסמנים את השורות בתווים מא' עד ח', ואת העמודות במספרים מאחת עד שמונה. השתמש בחלק העליון, התחתון, הימני, האמצעי והשמאלי כדי לסמן את המיקומים בתוך כל ריבוע.
לדוגמה, אם צמח נמצא בריבוע בשורה השנייה, בעמודה השישית וממוקם בחלק השמאלי העליון של הריבוע, אז צמח זה מקבל את השם b6 בפינה השמאלית העליונה. הניחו את צלחת תחתית הזכוכית תחת אור לבן למשך יום עד יומיים לפני שתעברו הדמיה בהילוך מהיר מדי יום, למשך עד שלושה ימים. כדי לבנות מחדש את התמונות התלת-ממדיות, פתח את הקובץ ND2 ולחץ על אמצעי אחסון.
לשחזר את דופן התא ביום אפס, ביום הראשון, ביום השלישי וביום הרביעי. לאחר צילום כל תמונה, החזירו את הצלחת מבוססת הזכוכית לתא הגידול. שינויים דינמיים בדפנות הצולבות הודגמו על ידי צביעה לבנה בקלקופלור בסוג פראי, ומוטציות ggb.
עבור מוטציות ggb, קווים מקווקווים לבנים מתחת לכל תמונה מציינים את דופן תא המשטח השבור בתאים המתרחבים, וקווים כתומים מציינים את התאים מתחת לפני השטח של דופן התא ב- ggb. ההבדלים באות הקלקופלור-לבן יכולים להיות מזוהים על מיקומי פני השטח של התאים ואזורים מוכתמים פחות בצפיפות הצביעו על התרחבות תאים במוטציות ggb או באתרי הסתעפות חדשים בסוג הבר. עבור תרבית טרום תרבית מסוג בר, הצמחים באור אדום חלש מלמעלה במשך חמישה ימים נדרשים כדי לעורר את התגובה הפוטוטרופית של פרוטונמטה, כך שניתן יהיה לחבר את הצמחים לתחתית הכלים וניתן יהיה לצאת מהצמחים במרחק העבודה האובייקטיבי במהלך ההדמיה מכיוון שניתן להשתמש בקלקופלור-לבן עם צבעים אחרים כגון מיקרוספירה.
מידע נוסף על התרחבות התא ניתן גם ללמוד. דינמיקה של דופן תא הצמח היא קריטית לביצוע יעיל של צמיחה והתפתחות, כמו גם לתגובה לאותות סביבתיים. פרוטוקול זה מאפשר חלוקה ישירה של שינויים באותות דופן התא ואינטגרציה.
