ככל שהטמפרטורות העולמיות ממשיכות לעלות, כימות הגבולות התרמיים והקשר עם התאקלמות ואונטוגניה חיוניים לקביעת פגיעותם של מינים להתחממות עתידית. עבור אורגניזמים ימיים עם היסטוריית חיים מורכבת, קביעת גבולות תרמיים יכולה להיות מאתגרת מבחינה לוגיסטית. פרוטוקול זה מציג טביעת רגל קטנה, שיטה קלה לבנייה להערכת טמפרטורות קריטיות של אורגניזמים פלנקטוניים קטנים.
בעוד שהשיטה פותחה עבור פלנקטון קטן בגודל של פחות ממילימטר, ניתן לאמץ אותה עבור אורגניזמים ימיים גדולים יותר שיתאימו לבקבוקוני scintillation בנפח של כ-50 מיליליטר. מתחילים על ידי חיווט מחמם הרצועה אל rheostat. קדחו 60 חורים ברשת בגודל 6 על 10 כדי להכין את בלוק האלומיניום בגודל של 20.3 על 15.2 על חמישה סנטימטרים, וודאו שהחורים מרווחים שני סנטימטרים מהמרכז למרכז בשני הכיוונים.
קדחו שני חורים נוספים בין העמודה הראשונה והשנייה לבין העמודה התשיעית והעשירית, בהתאם לגודל של בדיקות בקר הטמפרטורה. כדי להחזיק את האלמנטים במקומם ולבודד את בלוק החום שהושלם, בנו מארז מיריעות אקריליות שקופות, תוך הקפדה על החלת שתי שכבות בצד האחורי של גוף החימום. בהרכבה הסופית, יש למרוח משחה תרמית כדי למקסם את מוליכות החום מגוף החימום לתוך הבלוק ומהבלוק לגוף הקירור.
חבר את אמבט המים עם צינורות טייגון והכנס את בדיקת התרמוסטט לתוך החורים בצד בלוק האלומיניום. בכל החורים הטחונים, מניחים צינורות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר, מלאים במי ברז עד אפס מקום. הפעל את בקר הטמפרטורה והגדר את טמפרטורת החימום של הבדיקה אחת עד 35 עד 37 מעלות צלזיוס, ובדיקה שתיים עד 21.5 עד 22.5 מעלות צלזיוס.
סובבו את הריאוסטט כדי להפעיל את גוף החימום והגדירו אותו לבינוני. הפעל את אמבט המים והגדר את טמפרטורת הצ'ילר ל -15 מעלות צלזיוס. באמצעות צמד תרמי עם אלקטרודה מסוג K, בדוק את הטמפרטורה בתוך כל צינור מיקרו-צנטריפוגה כל 10 דקות לאחר מכן.
התאם את הערכים של נקודות הקצה על ידי שינוי ההגדרות של בקר הטמפרטורה ואמבט המים לפי הצורך. הפעילו את אמבט המים והמחמם וקבעו אותם ל-15 מעלות צלזיוס ו-37 מעלות צלזיוס בהתאמה, כדי ליצור שיפוע טמפרטורה מ-19.5 מעלות צלזיוס ל-37 מעלות צלזיוס. לאחר שצינורות המיקרו-צנטריפוגה ממוקמים בחורים טחונים והטמפרטורה של בלוק החום מגיעה, בדוק את הטמפרטורה בתוך כל צינור מיקרו-צנטריפוגה באמצעות צמד תרמי עם אלקטרודה מסוג K.
ושימו לב לטמפרטורות האלה. מלא צינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר במי ים, מסוננים דרך רשת של 0.45 מיקרומטר. רכז את התרבית של אורגניזם המחקר בסינון הפוך, כך שהאורגניזמים יישארו בתחתית הכוס.
שטפו את התרבית המרוכזת במי ים מסוננים, וחזרו על הסינון ההפוך פעם נוספת כדי לרכז את הדגימה. ספרו את האורגניזמים הפלנקטוניים הקטנים תחת מיקרוסקופ מנתח והעבירו מספר ידוע של אורגניזמים לצינורות מיקרו-צנטריפוגה מלאים למחצה באמצעות פיפטה של פסטר זכוכית. עכשיו להוסיף מי ים מסוננים עד הנפח הסופי בצינורות אלה מגיע מיליליטר אחד.
כעת הכניסו את הצינורות האלה בזוגות לתוך גוש החימום, החל מהקצה הקר כדי לאפשר לאורגניזמים להתחמם בהדרגה לטמפרטורת הניסוי הרצויה. המתן 10 דקות והעבר את זוגות צינורות המיקרו-צנטריפוגה לחורים הקדוחים הסמוכים בטמפרטורות חמות יותר. מניחים זוגות נוספים של צינורות מיקרו-צנטריפוגה בכל שורה בקצה הקר וממשיכים להסיט אותם לכיוון הקצה החם יותר בזוגות.
לאחר מילוי הבלוק כולו, דגרו אותו במשך שעתיים בטמפרטורה המיועדת. בתום תקופת הדגירה, מדוד את הטמפרטורה בכל צינור ורשום אותה. לאחר מכן העבירו את כל הצינורות למחזיקים המסומנים מראש ודגרו אותם בטמפרטורה שנקבעה מראש למשך שעה אחת כדי לאפשר התאוששות.
כדי למנות את חלק האורגניזם החי, העבירו את תכולתו של צינור מיקרו-צנטריפוגה בודד בצלחת פטרי בקוטר 35 מילימטר באמצעות פיפטה מזכוכית. תחת מיקרוסקופ מנתח, ספרו את האורגניזמים החיים והמתים ורשמו את המספרים. מספר האורגניזמים שנצפה צריך להתאים לאורגניזם שנלקח במקור.
אם לא, בדוק את הצד של צינורות המיקרו-צנטריפוגה וצלחת הפטרי, צור טבלת נתונים בפורמט CSV עם הכותרות מקבצות משתנה עניין, טמפרטורת הצינור במעלות צלזיוס, מספר האנשים החיים ומספר האנשים המתים. כדי להתאים את הנתונים עם רגרסיה לוגיסטית, השתמש במודל ליניארי כללי עם התפלגות בינומית. כדי להפעיל את המודל, הקלד מקור והשתמש בקובץ R, modelloop.r.
חשב את ערכי המנבא שבהם שרדו 50% מהפרטים, כדי לקבוע את הגבול התרמי העליון החציוני. באמצעות פרוטוקול זה נמדדה הניצולה של דולרי חול זחליים, שהיו בטווח טמפרטורות של 19 עד 37 מעלות צלזיוס, ביומיים, ארבעה ושישה ימים לאחר ההפריה. עם התפתחות הזחלים בדולרים, הגבול התרמי העליון עלה מ-28.6 מעלות צלזיוס ביומיים שלאחר ההפריה, ל-28.8 מעלות צלזיוס בארבעה ימים לאחר ההפריה, וכ-29 מעלות צלזיוס בשישה ימים לאחר ההפריה.
זמני הדגירה וההתאוששות הם ספציפיים למינים. חשוב לערוך בדיקה ראשונית כדי לוודא שהתזמון שנבחר מניב הערכה אמינה של חי לעומת מת.
